PKH26标记单核细胞衍生的肝样细胞体内示踪研究

目的 探讨人外周血单核细胞向肝样细胞潜能及单核细胞衍生的肝样细胞移植的有效示踪剂,并进一步观察受体鼠移植后肝样细胞存活、分布与转归情况.方法 分别设立A、B两组.A组为阴性对照组,在细胞培养过程中不添加诱导细胞分化肝细胞生长因子(HGF)和成纤维细胞生长因子-4 (FGF-4);B组应用HGF和FGF-4体外联合诱导人外周血单核细胞向肝干细胞分化.鉴定和判断细胞分化的变化,采用免疫荧光细胞化学染色法检测细胞甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)和细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)表达.以红色荧光染料PKH26标记单核细胞衍生的肝样细胞,尾静脉注入受体鼠体内作为实验组.对照组注射等量生理盐水.分别于移植2周后取肝组织,通过荧光显微镜观察实验组肝样细胞向肝脏迁移与转归的情况.采用免疫荧光细胞化学染色法检测移植的肝样细胞白蛋白(albumin,ALB)的表达.结果 A组细胞随培养时间延长,单核细胞由刚分离出的较均一的圆形逐渐变得不规则,呈条索状、纤维样改变,少部分细胞呈圆形,细胞发生凋亡,裂解.B组细胞随诱导分化培养时间延长,细胞变大、变圆,呈集落生长,增殖活性强.B组有AFP和CK19阳性表达,而A组则没有表达.动物实验组受体鼠肝组织冰冻切片可见大量PKH26标记阳性的肝样细胞,对照组未发现PKH26标记阳性的肝样细胞.移植2周后行免疫荧光细胞化学染色法检测实验组肝样细胞ALB表达阳性.结论 在HGF和FGF-4体外联合诱导条件下,人外周血单核细胞具有向肝样细胞分化的潜能.并且,PKH26可作为肝样细胞移植的一种有效示踪剂.移居肝组织的肝样细胞2周后开始向成熟肝细胞分化,发挥肝细胞功能,表达白蛋白.     

右美托咪啶对老年骨科手术患者全麻恢复期质量的影响

目的 评价右美托咪啶对老年骨科手术患者全麻恢复期质量的影响.方法 择期行骨科手术患者60例,ASA分级Ⅰ～Ⅲ级,年龄≥65岁,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=20):对照组(C组)、右美托咪啶0.25 μg/kg组(D1组)和右美托咪啶0.50 μg/kg组(D2组).C组、D1组和D2组分别于麻醉诱导前15 min静脉输注生理盐水、右美托咪啶0.25 μg/kg和0.50μg/kg( 15 ml),输注时间15 min.3组均采用全身麻醉,于切皮前即刻静脉注射氟比洛芬酯1 mg/kg.记录自主呼吸恢复时间、苏醒时间、拔除气管导管时间及全麻恢复期不良反应的发生情况,采用词语等级量表评分法(VRS)评估苏醒5min时疼痛程度.结果 与C组比较,D1组和D2组躁动、呛咳、心血管事件发生率和VRS评分降低,镇痛有效率升高,D2组苏醒时间和拔除气管导管时间延长(P＜0.05);与D1组比较,D2组苏醒时间和拔除气管导管时间延长(p＜0.05),VRS评分、镇痛有效率及不良反应发生率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 全麻诱导前静脉输注右美托咪啶0.25μg/kg可改善老年骨科手术患者全麻恢复期的质量.     

吻合单根动脉指尖再植侧支回流流体力学解析

目的研究末节指动脉侧支的解剖学特点,探讨吻合单根动脉指尖再植的侧支回流的流体力学机制。方法对10只新鲜成人尸体手标本进行乳胶灌注,显微解剖观测手指末节指动脉侧支的数量、侧支的外径．结合指动脉铸型标本观测侧支和主干的角度。用简易装置建立模拟吻合单根动脉指尖再植流体力学模型,观察模拟侧支回流现象。结果（1）指动脉末节侧支数为（12．7±3．2）支,侧支外径为（0．32±0．08）mm。约60．3％的末节指动脉侧支与主干的角度在30°～60°,指动脉弓处侧支角接近90°（2）从模拟指尖再植流体力学模型上观察到理想液体的模拟侧支回流现象。结论（1）在指尖再植术中应尽量保留指动脉吻合口近端侧支,尽量缩短指动脉吻合口与侧支的距离。（2）利用伯努利定律（ρgh±1／2ρv^2±P=C）分析指动脉侧支回流现象,这种现象是吻合单根动脉指尖再植成活的主要机制。     

miR-181a靶向作用CARF基因抑制胰腺癌细胞凋亡

目的：探讨miR-181a与CARF基因是否存在靶向关系,并研究其在调节胰腺癌细胞增殖凋亡过程中的作用。方法：利用Real-time PCR检测胰腺癌组织细胞中miR-181a的表达水平,通过miR-181a拮抗剂下调胰腺癌细胞中miR-181a浓度,并用MTT检测其细胞增殖能力变化。建立包含CARF基因3’-UTR序列的PGL-3载体,结合双荧光素酶报告基因系统验证CARF基因是否存在miR-181a的作用靶点,然后通过激动剂及拮抗剂调节胰腺癌细胞中miR-181a浓度,用Western blot检测相应细胞CARF基因蛋白表达情况。结果：miR-181a在胰腺癌组织/细胞中的表达水平明显高于正常胰腺组织/细胞（P＜0.05）。转染miR-181a拮抗剂可显著下调胰腺癌细胞中miR-181a的表达,并使其增殖能力明显下降（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因系统提示miR-181a与包含CARF基因3’-UTR序列的载体共转染,可明显下调荧光素酶活性,且下调水平与miR-181a剂量呈负相关（P＜0.05）;CARF蛋白表达情况和胰腺癌细胞中miR-181a水平呈显著负相关（P＜0.05）。结论：miR-181a在胰腺癌细胞中存在高表达,通过下调CARF靶基因促进细胞增殖而推动胰腺癌的发展。     

不同消化道重建方式对腹腔镜胃癌术后反流的影响

目的分析腹腔镜胃癌术后胃肠反流的相关因素并探讨具体的诊疗措施。方法回顾分析1 835例行腹腔镜胃癌术后病人的临床资料,其中实施胃十二指肠吻合(毕Ⅰ式)386例,胃空肠吻合(毕Ⅱ式) 1 002例,胃空Roux-en-Y吻合412例,三角吻合35例。结果毕Ⅰ式术后发生Ⅰ级反流13例,Ⅱ级反流21例,Ⅲ+Ⅳ级反流5例。毕Ⅱ式术后发生Ⅰ级反流39例,Ⅱ级反流67例,Ⅲ+Ⅳ级反流71例。胃空Roux-en-Y吻合术后发生Ⅰ级反流9例,Ⅱ级反流7例,Ⅲ+Ⅳ级反流3例。三角吻合术后发生Ⅰ级反流1例,无Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级反流者。结论三角吻合在腹腔镜胃癌手术中具有较为明显抗反流的优势。     

miRNA132在抑郁症患者及慢性不可预知温和应激抑郁模型大鼠中的表达

目的观察首发抑郁症患者外周血及慢性不可预知温和应激(CUMS)抑郁模型大鼠血液和前额叶皮层中miRNA132的表达水平。方法以2017年3月至2018年5月在杭州市第七人民医院精神科门诊治疗的首发抑郁症患者(抑郁组)41例及同期招募的健康志愿者(对照组)31例为研究对象,采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分评估抑郁症患者严重程度。雄性SD大鼠24只,采用配对比较法随机分为对照组和CUMS组,每组12只;分别用糖水偏好实验和强迫游泳实验检测大鼠抑郁样行为,ELISA法检测大鼠血浆皮质酮水平。采用实时荧光定量PCR法检测受试者外周血白细胞中和大鼠血液及前额叶皮层中miRNA132表达水平。结果抑郁症患者外周血白细胞miRNA132水平为2.37±0.36,明显高于对照组的1.34±0.16(t=2.355,P=0.0213);抑郁症组患者外周血白细胞miRNA132表达水平与HAMD17得分呈显著正相关(P=0.0004,r_s=0.5303,n=41)。CUMS组大鼠不动时间为(72.67±2.95)s,明显多于对照组的(40.00±5.49)s(t=2.366,P=...     

肺癌初治患者睡眠障碍影响因素分析及与生活质量的相关性研究

目的调查肺癌初治患者睡眠障碍影响因素,探讨睡眠障碍与生活质量的相关关系。方法选取158例肺癌初治患者为研究对象,采用一般资料调查问卷、疼痛数字评分法(NRS)、医院焦虑抑郁量表(HADS)、肺癌生活质量评估量表(FACT-L)和阿森斯失眠量表(AIS)调查肺癌初治患者的一般资料、疼痛、情绪、生活和睡眠质量;并根据AIS评分将患者分为睡眠障碍组和非睡眠障碍组,分析睡眠障碍的影响因素及与生活质量的相互关系。结果肺癌初治患者睡眠障碍发生率为40. 5%(64/158)。两组患者在性别、有无信仰、付费方式、肿瘤分期、有无疼痛、是否存在焦虑和抑郁方面比较,差异有统计学意义(P<0. 05)。多因素回归分析结果显示,肿瘤分期、疼痛、焦虑和抑郁是发生睡眠障碍的影响因素(P<0. 05)。Spearman相关分析得出,肺癌初治患者的睡眠障碍与生活质量存在相关关系(P<0. 01)。结论肺癌初治患者睡眠障碍发生率较高,肿瘤晚期、存在疼痛、焦虑和抑郁是肺癌初治患者发生睡眠障碍的危险因素;此外,睡眠障碍越严重,患者的生活质量越差。     

德生丹治疗排卵障碍性不孕症肾虚肝郁证患者临床研究

目的?观察中原门氏验方德生丹对排卵障碍性不孕症肾虚肝郁证患者的临床疗效。方法?将120例排卵障碍性不孕症肾虚肝郁证患者随机分为中药组（采用中药德生丹）、联合组（采用中药德生丹+克罗米芬）、西药组（单纯使用克罗米芬）。治疗12周后观察3组患者优势卵泡直径、子宫内膜厚度、宫颈黏液（Insler）评分及排卵率、妊娠率及血清雌二醇（E₂）、孕酮（P）水平的变化等。结果?治疗后3组优势卵泡直径与治疗前比较均显著增长（P<0.05~0.01）,联合组与西药组优于中药组（P<0.01）;3组中医证候积分均显著下降（P<0.01）,联合组与中药组优于西药组（P<0.01）;中药组、联合组子宫内膜厚度、Insle评分均有所增加（P<0.01）,优于西药组（P<0.05~0.01）;排卵日3组血清E₂水平均有所增长（P<0.01）,联合组与中药组优于西药组（P<0.05）;中药组、联合组黄体期血清P水平增长明显（P<0.01）,优于西药组（P<0.05~0.01）;3组排卵率比较,联合组与西药组均优于纯中药组（P<0.05~0.01）;3组妊娠率比较,联合组优于中药组、西药组（P<0.05~0.01）,中药组优于西药组（P<0.05）。结论?德生丹能改善排卵障碍性不孕症肾虚肝郁证患者临床症状,减少单纯克罗米芬抑制子宫内膜的不良作用,提高临床排卵及妊娠率。