六亚甲基二乙酰胺诱导HL-60细胞分化及其分子机制的研究

本研究探讨六亚甲基二乙酰胺（HMBA）对髓系白血病HL-60细胞分化的作用及其分子机制。应用MTT比色法观察不同浓度HMBA在不同时间点对细胞增殖的抑制作用，采用Wright—Giemsa染色观察细胞形态学变化，运用流式细胞仪测定细胞分化抗原CD11b的表达，并进行细胞周期分析，半定量RT—PCR分析c-myc、mad1、p21、p27、hTERT、HDAC1基因mRNA的表达。结果表明：HL-60细胞经不同浓度（0．5、1、2mmol/L）HMBA处理后细胞增殖受到较明显的抑制，并随时间延长、剂量增大抑制作用明显增强。HL-60细胞经2mmol／L HMBA处理后，细胞形态学上趋于分化成熟，细胞停滞于G0／G1期；CD11b表达显著增高；c-myc、hTERT mRNA表达显著下调，mad1、p21、p27mRNA表达显著上调，而HDAC1 mRNA表达无明显变化。结论：HMBA能诱导HL-60细胞分化，其分子机制可能是通过调节c-myc／mad1开关引起p21、p27上调，并且下调hTERT mRNA表达，与HDAC1活性抑制无关。     

抗CD49d McAb联合rhG-CSF动员的PBSC救治放射损伤小鼠

目的观察抗CD49d单克隆抗体(McAb)联用重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员的外周血干细胞(PBSC)救治放射损伤小鼠的效果.方法8.5 Gy60Co γ射线照射的BALB/c小鼠,分别接受经rhG-CSF(1组)、抗CD49d McAb(2组)、rhG-CSF联合抗CD49d McAb(3组)动员的PBSC移植.并以生理盐水组为对照,观察受体小鼠的4周存活率、外周血白细胞(WBC)、骨髓有核细胞(BMNC),粒细胞巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)及脾集落形成单位(CFU-S)等指标.结果实验3组小鼠的4周存活率、WBC、BMNC,CFU-GM、CFU-S数均明显高于对照组、1组和2组,差异具有显著性或非常显著性(P＜0.05或P＜0.01).结论抗CD49d McAb联合rhG-CSF使用能协同动员小鼠PBSC,并能成功救治放射损伤小鼠.     

小剂量As_2O_3体外诱导HL-60细胞发生非终末分化分子机制的研究

目的探讨增强子结合蛋白C／EBPs在小剂量三氧化二砷(As_2O_3)诱导HL-60细胞发生非终末分化中的作用。方法采用瑞式染色观察细胞形态,WST1实验测定细胞增殖变化,测定和分析细胞周期,NBT还原实验测定细胞分化状态,RT-PCR方法检测C／EBPα和C／EBPε的 mRNA表达。结果HL-60细胞经全反式维甲酸(ATRA)作用24 h后,随着细胞分化的发生, C／EBPε mRNA的表达明显增加,C／EBPα mRNA的表达降低。HL-60细胞经As_2O_3作用24 h后, C／EBPα mRNA的表达降低,C／EBPε mRNA的表达轻微增加。结论经As_2O_2和ATRA诱导后不同分化状态HL-60细胞,C／EBPα mRNA的表达降低,二者差异无显著意义;C／EBPε的表达差异较大(P<0．05),二者差异有显著意义。小剂量As_2O_3诱导HL-60细胞发生非终末分化可能是由于C／EBPε不能持续表达升高引起的。     

半相合骨髓移植的动物实验研究

目的：观察半相合骨髓移植对GVHD或GVL的影响。方法：以C57，BL-6小鼠急性放射病为模型，进行半相合小鼠骨髓移植，同时设异基因骨髓移植为对照，观察移植后小鼠存活率、造血重建、GVHD或GVL作用。结果：GVHD中，半相合骨髓移植组30天死亡率低于基因骨髓移植。半相合骨髓移植与异基因骨髓移植比较，外周血象或骨髓CFU-GM恢复快，以9天以后明显，脾结节数及嵌合体测定高于异基因组。体內混合淋巴细胞反应证实半相合骨髓移植较异基因骨髓移植GVHD小。在GVL中，异基因骨髓移植组主要死于GVHD。半相合骨髓移植组30天生存率仍为56.3％，表现出明显GVL作用。结论：半相合骨髓移植在减轻GVHD同时，产生明显的GVL作用。     

中药提取物逆转K562/ADM细胞的耐药作用及其分子机制的探讨

Objective To investigate the reversal effect of the monomer of traditional Chinese medicine on muhidrug resistance(MDR) and its possible mechanism in K562/ADM cell line in vitro. Methods With different concentrations of baicalin, geniposide administered to K562/ADM cells, the proliferation of K562/ ADM cells was detected by the MTY assay. Expression of mdr-1 mRNA, Topo Ⅱ mRNA was measured by semi-quantitive RT-PCR. Results Thatbaicalin and geniposide could increase the sensitivity of K562/ADM cells to adriamycin, multiples of reversion were 1.95 times and 1.46 times. The proliferation of K562/ADM cells was in-hibited obviously by baicalin and geniposide, the level of mdr-1 mRNA expression was down-regulated and the Topo Ⅱ mRNA was up-regulated(P<0.01 ). Conclusion Baicalin and geniposide may reverse the multi-drag-resistance of K562/ADM cells, which was related to the down-regulation of mdr-1 expression and up-reg-ulation of Topo Ⅱ beta expression.     

中药提取物逆转K562/ADM细胞的耐药作用及其分子机制的探讨

目的 观察两种中药提取物黄芩苷、京尼平苷对多药耐药(MDR)K562/ADM细胞的耐药逆转作用,探讨其分子机制.方法 建立阿霉素(ADM)诱导K562/ADM细胞耐药模型,分别将不同浓度黄芩苷、京尼平苷作用于K562/ADM细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其对化疗药物的敏感性,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测多药耐药基因-1(mdr-1)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)基因在mRNA水平的表达变化.结果 两种中药提取物黄芩苷、京尼平苷,可增加K562/ADM细胞对ADM的敏感性,K562/ADM细胞增殖受到明显抑制,耐药逆转倍数分别为1.95倍及1.46倍;RT-PCR检测mdr-1基因表达减弱,Topo Ⅱ基因表达增强(P<0.01).结论 黄芩苷、京尼平苷可通过降低K562/ADM细胞mdr-1基因表达和提高TopoⅡ的表达来逆转白血病细胞MDR.     

PML-RARα表达对细胞凋亡诱导剂敏感性差异的分子机制研究

目的 研究PML-RARα表达阴性的HL-60细胞和表达阳性的NB4细胞对三氧化二砷(As2O3)诱导细胞凋亡敏感性差异的分子机制.方法 经As2O3作用人急性早幼粒细胞白血病HL-60和NB4细胞后,MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞术测定细胞凋亡水平的变化,RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Fas等基因在mRNA水平的表达变化.结果 As2O3可诱导NIM细胞出现明显的凋亡现象,细胞增殖受到明显抑制(P<0.05),Bcl-2基因表达明显下调(P<0.05),但Bax、Fas基因表达没有明显变化(P>0.05),Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.05).而对于PML-RARa表达阴性的HL-60细胞,经小剂量As2O3作用后,对细胞的增殖抑制作用不明显(P>0.05),未出现明显凋亡现象,Bcl-2、Bax、Fas或Bcl-2/Bax表达水平及比值变化不明显(P>0.05).结论 Bcl-2/Bax表达比值变化与否,可能是小剂量As2O3诱导PML-RARα表达阴性的HL-60细胞和表达阳性的NB4细胞发生凋亡差异的分子机制.     

桑银降糖胶囊对实验性糖尿病大鼠脂质过氧化物酶水平的影响

目的 观察桑银降糖胶囊对实验性糖尿病大鼠脂质过氧化物酶水平的影响.方法 用微量血糖测定法测定链脲霉素(STZ)实验性糖尿病大鼠实验前后各组空腹血糖浓度.用放免法测定血清胰岛素和C肽.用黄嘌呤-鲁米诺化学发光法测定血液超氧化物歧化酶(SOD)的活性.用硫化巴比妥酸(TBA)比色法测定血清丙二醛(MDA)的含量.用HE染色方法 观察桑银降糖胶囊治疗前后胰腺、肝脏、肾脏的组织学变化.结果 桑银降糖胶囊可升高糖尿病动物模型SD大鼠胰岛素(36.08±11.40 μIU/ml)和C肽(0.10±0.04 μIU/ml)的浓度,具有明显降糖(6.33±1.66)mmol/L作用,对糖尿病动物模型SD大鼠具有提高血液SOD的活性(591.00±53.03 ug/g.HB),降低MDA水平的功效(6.3±0.85umol/L.对糖尿病动物模型SD大鼠的胰腺、肝脏、肾脏等组织有改善作用.结论 桑银降糖胶囊减少自由基对糖尿病动物模型SD大鼠的胰腺、肝脏、肾脏等组织的损伤并具有保护作用,纠正糖尿病动物模型SD大鼠的糖代谢紊乱,减少并发症的发生.     

抗VLA-4单克隆抗体动员的外周血干细胞重建辐射损伤小鼠造血的初步研究

目的 观察抗VLA-4单克隆抗体动员的外周血干细胞对辐射损伤小鼠造血重建的效果。方法 8.5 Gy~(60)Co γ射线照射的BALB/c小鼠,分别接受经生理盐水(实验1组)及抗VLA-4单克隆抗体(实验2组)动员的外周血干细胞移植,观察受体小鼠的4周存活率、外周血白细胞(WBC)、骨髓有核细胞(BMN),粒细胞巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)及脾集落形成单位(CFU-S)等指标。结果 实验2组小鼠的4周存活率、WBC、BMNC,CFU-GM、CFU-S数均明显高于对照组、实验1组,差异具有显著性(P<0.05或P<0.01)。结论 抗VLA-4单克隆抗体能有效动员小鼠外周血干细胞,并能成功重建辐射损伤小鼠的造血功能。     

皮肤恶性肿瘤与人免疫缺陷病毒疾病

随着人免疫缺陷病毒(HIV)感染率的上升,某些皮肤肿瘤的发生率也在增加,如恶性黑素瘤、鳞状细胞癌、基底细胞癌、HIV相关Kaposi肉瘤(KS)、皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)等。淋巴瘤：①霍奇金病发生率为正常人群的5～16倍。②非霍奇金淋巴瘤的发生率很高,HIV感染者患非霍奇金淋巴瘤的危险增加100～350倍。应用抗逆