荧光定量聚合酶链反应检测库存血浆HBV-DNA及HCV-RNA

目的 调查库存血中HBV-DNA及HCV-RNA的阳性率。方法 采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法,对合格库存血浆进行微量汇集池标本(10份×50μl汇集)中的HBV-DNA和HCV-RNA测定,再对阳性汇集池中的标本进行单份检测。结果 250份(分25个汇集池)受检血浆中HCV-RNA阳性1份(0.4％),HBV-DNA阳性2份(0.8％)。结论 荧光定量PCR检测微量血浆汇集池标本法筛查血液病毒核酸是提高输血安全性的一种先进方法。     

中国14家教学医院2005-2008年临床分离肺炎链球菌耐药性分析

目的 监测2005-2008年我国不同地区14家教学医院临床分离肺炎链球菌的耐药性,为临床经验用药提供科学建议.方法 2005-2008年从14家教学医院收集非重复的1 317株临床分离肺炎链球菌,其中2005年271株、2006年391株、2007年363株、2008年292株.菌株主要为社区呼吸道感染病原菌,即以呼吸道感染收治的门诊和急诊患者或入院48 h内发生呼吸道感染的患者中分离的肺炎链球菌.菌株分离地区包括华北地区、东北地区、华南地区、华中及西北地区以及华东地区.患者按年龄分为成人组(≥18岁)、青少年组(6～17岁)和儿童组(≤5岁).菌株经中心实验室复核后,采用Etest法、琼脂稀释法或纸片扩散法测定8类17种抗菌药物的MIC或抑菌圈直径,数据输入WHONET5.5软件分析敏感率、中介率、耐药率、MIC50、MIC90.结果 肺炎链球菌对利奈唑胺(100%)和氟喹诺酮类药物(95.2%～99.7%)保持了高的敏感率.对于β内酰胺类药物,菌株对阿莫西林-克拉维酸敏感率为73.8%～92.1%,对青霉素、头孢曲松和头孢吡肟也有较高的敏感率,但逐年降低.3种二代头孢菌素的敏感率较低(2008年为36.3%～38.4%).对于红霉素、阿奇霉素、克林霉素、甲氧苄啶-磺胺甲 唑和四环素,菌株的敏感率均较低且逐年下降.PISP的比例在逐年增大,从2005年的4.4%上升至2008年的20.2%.华北地区的PNSP发生率较低(6.0%),而华中及西北地区和华东地区的PNSP发生率较高(30.1%和38.7%).成人组的PNSP发生率(15.7%)明显低于儿童组(33.0%),也低于青少年组(38.2%).结论 肺炎链球菌对利奈唑胺和氟喹诺酮类药物在2005-2008年间保持了较高的敏感性,而对青霉素类和头孢菌素类的敏感性逐年降低,临床需慎用对肺炎链球菌活性较低的药物,包括大环内酯类、克林霉素、甲氧苄啶-磺胺甲 唑和四环素.

Abstract：

Objective To investigate antimicrobial resistance among Streptococcus pneumoniae clinically isolated from 14 teaching hospitals located at different areas in China in 2005-2008 and to give logical guidance for clinical empirical therapy.Methods A total of 1 317 non-repetitive S.pneumoniae isolates in 14 teaching hospitals from 2005-2008 were collected and sent to the central lab for reidentification and susceptibility testing, including 271 isolates collected in 2005, 391 isolates collected in 2006, 363 isolates collected in 2007 and 292 isolates collected in 2008. Most of the isolates were from community-acquired respiratory tract infections, which were isolated from outpatient or emergency department patients with respiratory tract infections or those patients with respiratory tract infections within ≤48 hours hospitalization.The districts where the organisms were isolated include North China, Northeast China, South China, Central and Northwest China and East China.The patients included adults, teenagers and children.The minimum inhibitory concentrations (MICs) or inhibitory zone diameter of 17 antimicrobial agents were determined by Etest method, agar dilution method or disk diffusion method.WHONET5.5 software was used to analyze susceptibility rate, intermediate rate, resistance rate, MIC50 and MIC90.Results Linezolid (100%) and fluoroquinolones (95.2%-99.7%) showed excellent activities against S.pneumoniae.Among β-lactams, amoxicillin-clavulanic acid remained high activities (73.8%-92.1%),followed by penicillin, ceftriaxone and cefepime with year-over-year decrease in activities.The activities of three second-generation cephalosporins were low (36.3%-38.4% in 2008).The activities of erythromycin, azithromycin, clindamycin, trimethoprim/sulfamethoxazole and tetracycline against S.pneumoniae were poor and decreased year over year.The incidence of penicillin non-susceptible S.pneumoniae (PNSP) was increasing especially for PISP (from 4.4% in 2005 to 20.2% in 2008).The incidence of PNSP in North China was low (6.0%), while this value were high in central China and East China (30.1% and 38.7%, separately).The incidence of PNSP in adults (15.7%) was obviously lower than that in children(≤5 years:33.0%) and teenagers (6-17 years:38.2%).Conclusions linezolid and fluoroquinolones showed excellent in vitro activity against S.pneumoniae, followed by penicillin and cephalosporins with year-over-year decrease of activity. Clinicians should pay more attention when using those antimicrobial agents with poor activity against S.pneumoniae, which include macrolides, clindamycin, trimethoprim/sulfamethoxazole and tetracycline.     

免疫抑制法测定血清CK-MB致结果偏高的原因分析

目的：探讨免疫抑制法测定血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）值高于总肌酸激酶（CK）的原因及解决方法。方法选择陕西省人民医院心内科已经确诊心肌梗死的住院病人68例,肿瘤内科恶性肿瘤病人32名,其中肝癌8例、肺癌6例、胃癌6例、神经母细胞瘤5例、乳腺癌4例、卵巢癌3例以及来源于消化内科肝硬化患者16例。另选取门诊体检中心健康体检者100例作为对照组。于罗氏 MODUALR 全自动生化分析仪上采用免疫抑制法测定 CK-MB,酶偶联速率法测定总CK活性。结果在68例心肌梗死病人血清中CK-MB单项升高21例,总 CK单项升高39例,二项指标同时升高30例;在32例恶性肿瘤患者中血清CK-MB单项升高11例,总活性升高3例,二项同时升高3例;16例肝硬化患者2例 CK-MB单项升高。结论采用免疫抑制法检测CK-MB作为心肌梗死诊断指标存在一定缺陷,且CK-MB结果升高与某些重度炎症、恶性肿瘤等有密切关系。     

乙肝病毒表面抗原大蛋白检测的临床应用

目的 探讨乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白(L-HBs)用于临床乙型肝炎诊断的实验价值以及与HBV-DNA定量的相关性.方法 采用酶联免疫吸附试验检测了546例HBsAg阳性病人血清标本中的L-HBs,乙肝系列及PreS1抗原,同时应用实时荧光定量PCR技术检测HBV DNA含量.结果 546例HBsAg阳性标本中,HBV-DNA阳性的373份,L-HBs阳性377份,PreS1抗原阳性305份,阳性率分别为68.3%,69.0%和55.9%,HBV-DNA与L-HBs相关良好,经分析无统计学意义(P＞0.05);408例HBeAg阴性标本中HBV-DNA阳性235份,L-HBs阳性253份,PreS1抗原阳性204份,阳性率分别为57.6%,62.0%和50.0%,经分析HBV-DNA与L-HBs阳性率呈正相关,差异无统计学意义(P＞0.05),而PreS1抗原阳性率明显低于HBV-DNA与L-HBs的阳性率,具有显著差异(P＜0.01).结论 血清L-HBs在反映体内病毒复制方面与HBV-DNA相关良好,而且操作简便,可以作为HBV-DNA检测的替代或补充指标.     

念珠菌类细菌样变异株生物学性状及遗传学特征研究

目的 了解念珠菌发生变异后其形态、结构等生物学性状的改变情况,并通过其遗传学特征研究从分子水平揭示这种变异发生的机理。方法实验室研究中,利用不同的营养条件及生长环境、不同的唑类抗真菌药物对白色念珠菌标准菌株进行诱导使其变异; 临床研究中,从抗真菌治疗效果不佳患者的阴道分泌物、痰液、胸腔积液、胃液等标本中分离念珠菌变异株,并对以上变异株的形态特点、核结构、生化反应、耐药性、菌体组分、遗传学特征等进行研究。结果 菌体形态:念珠菌极易发生类细菌样变异,变异株菌体可呈G⁺球菌状、G⁺杆菌状、G⁺长丝状、G^-球菌状、G^-杆菌状等; 核结构:电镜透射扫描证实念珠菌变异株失去真核细胞固有的核结构而呈原核生物样改变; 生化反应:在所观察的20项生化试验中有 5项不同; 药敏试验:念珠菌发生变异后对原本敏感的抗真菌药物完全耐药,而对原本耐药的普通抗细菌药物敏感,且耐药谱与普通细菌耐药谱相同; 菌体组分改变:经质谱仪鉴定念珠菌变异株和变异菌返祖株菌体组分有明显不同; 真菌最保守基因表达:采取PCR技术对变异株进行真核生物最保守基因16S sRNA检测发现,念珠菌发生类细菌样变异后仍表达真核生物保守基因,由此可证明具有原核细胞生物学特性的念珠菌类细菌样变异株是源于具有真核细胞的念珠菌。结论 念珠菌极易发生类细菌样变异,变异株各种生物学特性与原核生物酷似。电镜观察具有明确亲缘关系的念珠菌标准菌株、念珠菌类细菌样变异株、变异菌返祖株在核物质存在形式上确有质的改变,此研究在生物进化特别是在原核细胞与真核细胞的进化联系上有非常重要的意义。     

2008年中国15所教学医院医院感染患者分离的肠杆菌科细菌耐药性分析

目的监测2008年我国不同地区15所教学医院医院感染患者中分离的肠杆菌科细菌的耐药性。方法按设计方案收集非重复的1 357株医院感染患者中分离的肠杆菌科细菌。菌株经中心实验室复核后,采用琼脂稀释法测定15种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC),数据输入WHONET5.6软件进行统计分析。结果大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌敏感率较高的药物有美罗培南(97.6%～100%)、帕尼培南(79.8%～98.4%)、亚胺培南(64.9%～98.1%)、厄他培南(91.3%～97.4%)、哌拉西林-他唑巴坦(87.2%～97.4%)、头孢美唑(82.1%～97.0%)和阿米卡星(89.9%～93.8%)。肠杆菌属细菌敏感率较高的抗菌药物有美罗培南(98.7%)、帕尼培南(96.4%)、亚胺培南(95.4%)和阿米卡星(85.7%)。弗劳地枸橼酸杆菌和黏质沙雷菌敏感率较高的药物有碳青霉烯类抗生素(92.0%～100%)、哌拉西林-他唑巴坦(93.1%～99.1%)、阿米卡星(89.0%～94.3%)和头孢吡肟(86.2%～93.1%)。结论碳青霉烯类抗生素、哌拉西林-他唑巴坦和阿米卡星对医院分离的肠杆菌科细菌保持了较高的抗菌活性,头孢美唑对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌表现出良好的抗菌活性。     

恶性肿瘤患者血浆D-二聚体检测的临床意义

目的探讨恶性肿瘤患者血浆D-二聚体（D—dimer）的变化和临床应用价值。方法应用日本sysmex公司生产的CA／500全自动血凝分析仪,由德国德灵公司提供试剂,采用免疫散射比浊法测定血浆D-二聚体含量。结果恶性肿瘤晚期患者（Ⅲ期＋Ⅳ期）血浆D-二聚体的含量明显升高,与正常对照组比较差异有显著性（P〈0．01）,早期（Ⅰ期＋Ⅱ期）患者血浆D-二聚体含量有所升高,与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈O．01）。结论恶性肿瘤患者血浆D-二聚体的变比与疾病的严重程度及预后明显相关,有助于病情判断、预后估计及治疗。     

临床分离类细菌样变异念珠菌的实验室诊断

目的 探索临床分离类细菌样变异念珠茼的实验室诊断方法.方法 对类细菌样变异念珠菌感染的可疑病人标本采取合适的培养基分离、传代恢复、动物体内恢复返祖、必要时进行真菌基因鉴定.结果 临床分离的类细茼样变异念珠菌绝大多数能在合适条件下恢复成典型的念珠菌.少数难恢复的变异株,可通过真菌基因检测进行鉴定.结论 对于慢性念珠菌感染、不合理抗真菌治疗病人临床标本分离出的菌体形态酷似细菌但用传统方法无法进行鉴定的菌株,应考虑为念珠菌变异株,并对其返祖后进行鉴定.从而避免或减少念珠菌因形态变异造成的漏诊或误诊.     

育龄男性孕前精液检测分析研究

目的了解不同年龄段育龄男性精液质量及在男性不育诊断中的重要性。方法检测分析我院泌尿外科门诊402例育龄男性孕前精液,将其分为20～30岁和31～40岁两组。观察两组精液颜色、粘稠度、测定pH值及体积检测后,用精子质量分析仪检测精子的密度、活率及活力,检测结果进行统计学分析。结果经统计学分析,人工检测项两组结果除pH值外,其余检测项结果正常百分率均在60%以上,其中外观颜色正常高达98.51%～98.67%。仪器检测项两组精子密度正常百分率高达79.3%～80.57%,其中精子密度在50×106～100×106/ml所占百分率最高,但活率和活力均较低,活率正常百分率为31.25%～35.80%,活力a级为37.5%～39.53%,a级+b级为31.25%～31.39%。育龄男性精液人工及仪器检测项正常百分率分别为18.25%和37.3%,人工及仪器检测项均正常者仅占6.72%,除外pH值小于7.2外,人工与仪器检测项均正常者明显增高,可达24.00%。结论 pH值降低可能是导致长时间不育的重要原因之一。育龄男性孕前精液检测分析可为临床提供不孕不育实验室诊断依据。     

特异性siRNA抑制宫颈癌细胞CaSKi中HPV16 E6基因的表达

目的：研究RNAi技术抑制宫颈癌细胞CaSKi中HPV16 E6癌基因的表达以及对细胞生物学特性的影响。方法：构建真核细胞表达特异性shRNA的pGENESIL-1/E6（PS6）重组质粒,脂质体转染细胞后用半定量RT-PCR技术检测CaSKi细胞中E6mRNA水平的变化,然后用western blotting检测RNA干扰前后p53和p21蛋白的表达来验证RNAi效应。用透射电子显微镜观察CaSKi/PS6细胞形态变化;应用流式细胞仪检测细胞的凋亡和细胞周期的变化,最后利用细胞计数和裸鼠成瘤实验测定CaSKi/PS6细胞增殖能力。结果：成功构建了真核细胞表达特异性siRNA的PS6重组质粒;在RNA干扰24、48和72小时后CaSKi/PS6细胞中E6mRNA分别下降了21.50%、52.60%和65.60%;CaSKi/PS6细胞出现凋亡的特征性改变;RNA干扰24h、48h和72h后CaSKi/PS6细胞的凋亡率分别为27.94%、31.95%和56.63%,细胞生长周期停滞于S期。结论：应用RNA干扰技术能有效地、特异地抑制宫颈癌细胞中HPV16 E6基因的表达,为RNA干扰应用于研究宫颈癌发病分子机制、临床治疗和干预性预防提供了新的方法。