2013年青海省德令哈地区蚊虫及蚊媒病毒调查

目的 调查青海省海西州德令哈地区蚊虫及蚊媒病毒的种类及分布。方法 在德令哈地区采集蚊虫标本, 蚊虫标本经实验室常规处理后使用C6/36、BHK-21和Vero细胞开展病毒分离及9种病毒特异性基因检测及分析。结果 2013年在德令哈地区共采集蚊虫6050只, 分别为黄背伊蚊和里海伊蚊, 其构成比分别为92.6%(5600/6050)和7.4%(450/6050)。所有蚊虫标本分为96批, 接种上述3种细胞, 这些蚊虫标本在BHK-21和Vero细胞上均未出现病变也未检测病毒基因阳性。但有32批蚊虫标本接种的C6/36细胞上清液和对应蚊虫标本研磨液中均检测到辽宁病毒(liaoningvirus, LNV), 其中黄背伊蚊27批, 里海伊蚊5批。病毒基因进化分析发现德令哈市分离的LNV与我国在新疆分离的LNV处在同一进化分支。结论 2013年青海省德令哈地区黄背伊蚊为优势蚊种, 黄背伊蚊和里海伊蚊标本中LNV感染率均较高, 为首次在当地发现LNV。     

我国西北地区蚊虫标本中广平病毒的检测

目的 对我国西北地区蚊虫携带病毒开展调查,并快速发现重要的蚊媒病毒.方法 通过形态学方法对采集蚊虫进行分类鉴定,深度测序和宏基因组分析方法分析蚊虫携带的病毒,结合Sanger测序法补全病毒基因组全序,应用系统进化分析方法分析病毒分子遗传特征.结果 2019年7月采集自陕西省的中华按蚊标本和宁夏回族自治区的三带喙库蚊标本...     

从滇西北地区首次分离到版纳病毒

目的 对滇西北地区分离的版纳病毒进行系统鉴定,明确与云南其他地区分离株的差异.方法 对2005、2006年从滇西北地区分离的3株版纳病毒进行形态学、基因组带型和分子生物学鉴定,测定第12片段核苷酸序列,进行序列的同源性和系统进化分析.结果 从2005、2006年滇西北蚊虫标本中分离到的3株版纳病毒为直径约70 nm、无包膜、有双层衣壳的球形颗粒,基因组带型为6-6分布.3株版纳病毒问第12片段核苷酸序列同源性为99%,与云南其他地区和印度尼西亚版纳病毒毒株的最大同源性分别为98%和90%;系统进化分析显示滇西北分离株和云南其他地区分离株共同形成一个分枝;第12片段编码的氨基酸序列比较发现我国版纳分离株和印度尼西亚毒株间存在共同的氨基酸残基差异.结论 首次从滇西北地区蚊虫中分离到3株版纳病毒,基因序列分析显示滇两北分离株和云南其他地区分离株同源性较高.     

西藏环状病毒TaqMan反转录聚合酶链式反应方法的建立

目的:建立一种灵敏、特异的实时荧光定量TaqMan反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),用于快速、准确地检测西藏环状病毒(Tibet orbivirus, TIBOV)。方法:收集GenBank数据库中全部TIBOV基因序列,利用Clustal X 2.1软件进行比对,根据分析结果选择TIBOV VP4基因保守区域设计...     

2006年河南省南阳市流行性乙型脑炎病毒的分离与分子特征分析

目的在河南省南阳市采集蚊虫标本,进行西尼罗病毒基因检测,分离流行性乙型脑炎(乙脑)病毒并分析分离株的分子生物学特征。方法 2006年从南阳市采集蚊虫标本,将标本研磨处理后进行巢式PCR检测西尼罗病毒核酸,用细胞培养法对标本进行病毒分离,通过血清学与分子生物学方法鉴定新分离到的乙脑病毒,扩增分离株PrM和E基因区,使用生物学软件进行序列和系统发生分析。结果共采集蚊虫标本6231只,巢式PCR检测西尼罗病毒结果均为阴性。从标本中分离到7株病毒,经鉴定均为乙脑病毒。基因分型显示7株病毒均为基因Ⅰ型,新分离株在E基因之间的核苷酸同源性为98.5%～100%,氨基酸同源性为98.4%～100%。新分离株与P3株和SA14-14-2的E基因核苷酸同源性分别为87.7%～88.2%和87.3%～87.9%。新分离株与P3株相比存在10个共同氨基酸差异位点,但在决定毒力的关键位点不同于SA14-14-2。结论河南省南阳市2006年乙脑病毒流行株为基因Ⅰ型,毒株的毒力基因没有明显改变,所有标本均未检测到西尼罗病毒阳性。     

2009年江西省新分离流行性乙型脑炎病毒株全基因组分子生物学特性研究

目的对2009年分离自江西省蚊虫标本的流行性乙型脑炎(乙脑)病毒JX0939株进行全基因组序列测定,分析其基因组特征。方法使用针对乙脑病毒全基因组测序引物进行PCR扩增基因组片段,PCR产物直接测序,拼接后获得全基因组序列。利用生物信息学软件进行核苷酸序列及氨基酸序列分析和病毒的系统进化分析。结果新分离乙脑病毒JX0939株基因组全长10965个核苷酸,从97位到10392位,共10296个核苷酸编码一个开放阅读框,编码3432个氨基酸。与GenBank中登录的所有59株乙脑病毒全基因组序列比较发现,其核苷酸总体差异率为1%～17%,氨基酸总体差异率为0.1～5%。与目前使用的减毒活疫苗株SA-14-14-2株相比较,只有88%的核苷酸同源性,全基因组共存在1237个核苷酸差异,83个氨基酸差异。提取GenBank登录的及本实验室测定的不同省份的乙脑病毒全基因组序列,进行全基因组序列系统进化分析显示JX0939株属于基因1型乙脑病毒。结论新分离的乙脑病毒JX0939株属于基因1型,与2007年中国分离株SH17M-07进化关系最接近,与疫苗株SA-14-14-2相比关键位点氨基酸未见变异。     

2006年山西省南部地区虫媒病毒分离鉴定

目的了解山西省南部地区虫媒病毒的种类及分布特征。方法使用诱蚊灯捕蚊,通过组织培养法分离病毒,并对病毒分离物进行血清学和分子生物学鉴定。结果2009年9月在山西省运城市、临汾市和阳泉市的3个标本采集点采集到3属4种共3436只蚊虫标本,从中分离到5株病毒分离物,鉴定结果显示有3株(SX0621、SX0633、SX0635)为淡色库蚊浓核病毒,其余2株分离物有待进一步鉴定。对CppDNV非结构蛋白NS1和NS2的部分核苷酸序列分析显示,3株山西省新分离株的同源性为100%;与中国其他省市的分离株同源性在99.9%～100.0%之间。系统进化分析提示所有中国分离株均位于一个相对独立的进化分支中,并且与AaeDNV的进化关系较近。结论在山西省首次分离到淡色库蚊浓核病毒,与中国其他地区的分离株同源性较高。     

甘肃省分离的版纳病毒具有显著地域特征

目的对2007年在甘肃省平凉地区农村人房、猪舍和牛棚采集的蚊虫中分离的版纳病毒进行鉴定并对病毒基因组第12片段进行测序和分析。方法2007年8月在平凉市采集蚊虫标本,对标本进行病毒分离并对分离物进行系统鉴定,测定分离到的版纳病毒第12片段序列,以软件进行病毒的序列比对、同源性和系统发生分析。结果共采集到蚊虫标本2926只,从中分离到11株致C6/36细胞产生规律病变的分离物,其中3株能引起BHK-21细胞病变。鉴定结果显示共分离到9株版纳病毒。RNA-PAGE结果显示9株版纳病毒基因组带型与对照株BJ95-75的一致,但第6片段与对照相比稍小。新分离版纳病毒第12片段核苷酸序列同源性在99.5%～100%之间,与其他分离株的同源性为88.6%～97.6%(核苷酸)和85.5%～97.1%(氨基酸)。基于版纳病毒第12片段核苷酸序列的系统发生分析显示,甘肃省分离株处于中国株进化支中的一个独立分支,与其它地区分离株具有明显的差异。结论再次从甘肃省的蚊虫标本中分离到多株版纳病毒,基因序列和系统发生分析显示甘肃省分离株在进化上相对独立,具有显著的地域特征,可能属于版纳病毒中的一个新亚型。     

我国分离的两株病毒为重组甲病毒

目的 明确我国分离的XJ－90260和XJ－91006病毒的分类地位、种系发生和遗传型。方法 特异引物逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）扩增两株病毒的NSP4、E1基因区和3′端非编码区,测序,进行核苷酸序列同源性比较和3′端非编码区核苷酸序列分析,并结合同属其他病毒这些基因区的核苷酸序列进行种系进化分析。结果 两株病毒的核苷酸序列同源性为100％,与西方马脑炎病毒的核种酸序列同源性最高,具有西方马脑炎病毒3′端非编码区结构特征,其NSP4基因区与东方马脑炎病毒同源,E1基因区与辛德毕斯病毒同源,两株病毒均位于西方马脑炎病毒B组,与西方马脑炎病毒俄罗斯分离株进化关系最近。结论 我国分离的XJ－90260和91006病毒属于西方马脑炎病毒同一遗传型,均为重组甲病毒。     

四川省流行性乙型脑炎病毒优势基因型的研究

目的了解四川省乙脑主要流行区乙脑病毒的分子生物学特性,为防治提供依据。方法对2007-2010年间分离到的13株乙脑病毒进行PreM和E基因区扩增,采用MEGA5生物学软件完成氨基酸序列和病毒进化树分析。结果基因分型显示13株均属于基因I型。13株病毒之间比较,PreM基因核苷酸和氨基酸同源性为97％-100％和98．7％-100％,E基因核苷酸和氨基酸同源性为97．8％～99．9％和99．6％～100％,其同源性极高。13株病毒与2004年四川分离株比较E基因核苷酸同源性在97．7％～99．6％之间,氨基酸同源性在98．6％-100％之间;PreM基因的核苷酸同源性在96．2％-99．1％之间,氨基酸同源性在97．5％-98．7％之间;与疫苗株P3和SA14—14—2比较E基因核苷酸和氨基酸同源性分别为87．6％～88．3％和97％～97．8％;PreM基因核苷酸和氨基酸同源性分别为84．1％～85．8％和93．7％-96．2％。13株病毒E基因的8个氨基酸毒力位点均没有发生改变。结论四川省乙脑病毒已呈现基因I型为优势型别的态势,其PreM和E区核苷酸和氨基酸高度保守,关键的氨基酸毒力位点没有变化,提示目前使用的疫苗对流行株的感染具有保护作用。