干血片荧光法检测苯丙氨酸用于苯丙酮尿症患者的监测

苯丙酮尿症 (phenylketonuria ,PKU )是由于肝脏苯丙氨酸羟化酶缺乏所致的一种常染色体隐性遗传性疾病。由于苯丙氨酸 (phenylalanine ,Phe)在体内不能转化为酪氨酸 ,而蓄积在体液中 ,大量的Phe及其异常的代谢产物抑制脑组织的谷氨酸代谢 ,同时也使神经递质5 -羟色胺的生成量减少 ,损害脑细胞的正常生理功能 ,并对神经系统功能造成损害。自20世纪80年代以来 ,我国已将PKU列入新生儿筛查项目之一 ,筛查方法经历了由细菌抑制法向干血片荧光法的转变。目前我国PKU患者的治疗监测基本采用静脉血高效液相法或血清荧光法 ,由于上述方法检测所…     

天津及周边地区苯丙氨酸羟化酶基因突变谱和新突变分析

目的 分析天津地区人苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase gene,PAH)基因突变谱,明确本地区该基因突变类型和特点,为遗传咨询和产前基因诊断提供科学依据.方法 用聚合酶链反应-单链构象多态、变性高效液相色谱法和DNA测序法对天津及河北等地99例已确诊各种类型苯丙酮尿症患儿基因组DNA进行PAH全基因13个外显子分析.结果 全基因共检出41种突变,含错义突变22种、无义突变7种、剪接位点突变9种和缺失突变3种.其中新突变6种(IVS3nt+1g→a、A165D、Q301X、G344D、P362L和R413G).198个PAH等位基因突变总检出率为93.94%.结论 天津及周边地区PAH基因突变谱广、遗传异质性高,一些常见突变的发生频率与以往报道的地域分布略不同.     

苯丙酮尿症杂合子高危人群基因型与生化表型相关性

目的:用分子生物学方法对可疑PKU/HPA杂合子进行PAH突变基因分析,以验证生化筛查PKU/HPA杂合子方法的可行性。方法:利用PCR、SSCP和DNA测序等方法对152例已知PKU/HPA杂合子(阳性组)和29例可疑PKU/HPA杂合子(可疑组)的PAH基因部分外显子进行分析。并与健康体检者对照(对照组)结果:152例已知PKU/HPA杂合子中发现26种基因突变,突变检出率为80.9%(123/152)。29例可疑“PKU/HPA杂合子”发现5例突变,检出率为17.2%(5/29)。对照组与可疑PKU/HPA杂合子组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:生化方法与分子生物学方法有一定相关性,提示生化筛查法用作PKU杂合子的初筛是可行的。     

脆性X综合征12例分析

脆性 X综合征〔fra( X)〕由于在儿童期缺乏典型的临床特征 ,且遗传方式独特 ,极易漏诊。因此 ,我们对因智力低下做染色体检查的患儿 ,不论其是否具备脆性 X综合征的临床表现 ,均进行染色体脆性部位的检查 ,共计 2 4 2例 ,检出阳性患儿 13例 ,确诊 12例。1　对象与方法1.1　对象。1990年 1月～ 1999年 12月来自儿保遗传咨询门诊及学习困难门诊的智力低下儿童 ,剔除产科因素 ,代谢性疾病 ,Down氏综合征及 Turner氏综合征共 2 4 2例 ,男 172例 ,女 70例。1.2　方法。取外周血 0 .5ml肝素抗凝 ,加入含 5%小牛血清的 TC199培养液中 ,37℃恒温…     

苯丙氨酸羟化酶突变基因型与生化表型分析

目的 探讨苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)患者苯丙氨酸羟化酶基因(phenylalanine hydroxylase,PAH)突变基因型与生化代谢表型的相关性.方法 用聚合酶链式反应-单链构象多态性、变性高效液相色谱分析和DNA测序法对102例治疗前血清苯丙氨酸(phenylalanine,Phe)高于120 μmol/L患儿基因组DNA进行PAH基因分析,观察突变基因型与生化代谢表型的相关性.结果 (1)生化代谢表型为经典型PKU(Phe>1200μmol/L)69例,中度PKU(Phe 600-1200 μmol/L)31例,轻度PKU(Phe400~600 μmol/L)2例.(2)共检出基因突变41种,基因型75种.(3)纯合突变基因型共9例(8.8%),含R111X/R111X基因型3例,IVS4-1G>A/IVS4-1G>A基因型1例,R243Q/R243Q基因型3例和V399V/V399V基因型2例.9例纯合突变中除1例RZ43Q/R243Q基因型患者的生化代谢表型属中度PKU外,其余8例生化代谢表型均属经典型苯丙酮尿症.(4)复合突变基因型共91 例(89.2%),生化代谢表型属经典型苯丙酮尿症的61例、中度PKU的29例和轻度PKU的1例.(5)复合突变基因型R111X/R243Q和EX6-96A>G(Y204C)/R243Q均可见于经典型苯丙酮尿症和中度PKU生化代谢表型;均属于无效突变等位基因的R111X/V399V基因型、EX6-96A>G/Y356X和EX6-96A>G/V399V生化代谢表型为中度PKU.含不同无效突变相同错义突变的R111X/A165D和R176X/A165D基因型分别表现为中度PKU和经典型苯丙酮尿症表型.结论 本研究中多数患者的突变基因型属复合突变.因突变等位基因的自由组合,使患者的基因型和生化表型之间关系复杂化.虽然大多数突变基因型与生化表型相关,但仍有个别与规律不一致的现象.因此,在PKU的遗传咨询中,依据患者的突变基因型分析评估预后要慎重.同样的基因型,患者表现出不同的生化代谢表型的现象,提示在苯丙氨酸的代谢过程中可能存在还没有被认识的其它影响因素.