hTERT基因短发夹状RNA表达载体对肾癌细胞生长的抑制作用

目的观察针对hTERT基因的短发夹状RNA（shRNA）表达载体pSilencer-hTERT对人肾癌细胞及移植瘤生长的抑制作用。方法（1）pSilencer-hTERT转染人肾癌Kerr-3细胞，1、3、5、7d后逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白印迹技术检测hTERTmRNA、蛋白表达，MTT法检测细胞增殖，原位末端标记法检测凋亡。（2）BALB／C-nu裸鼠接种Ketr-3细胞成瘤，瘤内分别注射pSilencer-hTERT（50μg）、空质粒pSilencer1．0-U6（50μg）及等体积（100μg）生理盐水，隔日1次，共7次。治疗结束后第3天处死小鼠，取瘤组织检测肿瘤体积，免疫组织化学染色检测hTERT表达。结果（1）pSilencer-hTERT转染3d后Ketr-3细胞hTERTmRNA表达（43．2±4．4）％、蛋白表达（42．6±5．6）％最低，细胞增殖抑制率（37．3±6．6）％、凋亡细胞阳性率（30．5±4．7）％最高，分别与空质粒对照组[（98．8±4．7）％、（98．0±3．7）％、（3．3±0．9）％、（10．4±2．4）％]比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。（2）pSilencer-hTERT处理组小鼠肿瘤体积（62．4±36．5）mm^3减小，hTERT表达率（65．7±4．7）％降低，分别与空质粒对照组（83．2±38．7）、（90．7±4．2）％比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论pSilencer-hTERT能有效、持续抑制人肾癌Ketr-3细胞及裸鼠肾癌移植瘤生长。     

机械瓣膜置换术后华法林与细胞色素P4502C9和维生素K环氧化物还原酶亚单位1基因多态性的相关性研究

机械瓣膜置换术患者需终生服用华法林抗凝治疗，华法林通过竞争性结合维生素K环氧化物还原酶亚单位1（VKORC1）阻断维生素K依赖性凝血因子生成达到抗凝效果，体内华法林通过肝细胞微粒体中药酶细胞色素P450酶即CYP2C9代谢。我们采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术（PCR-RFLP），探讨华法林维持剂量与VKORC1启动子区1639-A／G（VKORC1-1639A／G）和CYP2C9基因多态的相关性。[第一段]     

Multi-parameter prediction of HLA class Ⅰ restricted cytotoxic T lymphocyte epitopes for human proliferating cell nuclear antigen

Objective To predict the HLA class Ⅰ restricted cytotoxic T lymphocyte epitopes for human proliferating cell nuclear antigen (PCNA). Methods By using 3 epitope prediction databases which including MHC binder ( BIMAS and SYFPEITHI databases) and proteasome cutting site ( PAProC databases), the epitopes of PCNA were predicted by analyzing several parameters and methods. Results After comprehensive analysis,we have obtained two possible HLA-A0201 restricted CTL epitopes SMSAD-VPLV (228-236, score 447 633. 595 ) and LINEACWDI ( 22-28, score 127 966.779);two HLA-A24 re-stricted CTL epitopos DYEMKLMDL ( 113-121, score 563 994.9 ) and EFARICRDL ( 143-151, score 40 540.7);two HLA-A1101 restricted CTL epitopes LTSMSKILK (72-80, score 1334. 2680 ) and DVPLV-VEYK (232-240,score 736.9236). Conclusion The multi-parameter epitope prediction method is feasi-ble for cytotoxic T lymphocyte epitope prediction.     

Fas配体诱导淋巴细胞凋亡与肾癌免疫攻击作用

目的　探讨Fas配体 (FasL)诱导淋巴细胞凋亡与肾癌免疫攻击作用的关系。　方法　采用免疫组化技术检测 4 4例肾癌组织FasL表达及肿瘤周围浸润淋巴细胞 (TIL)凋亡情况 ,并应用肾癌细胞株 786 0、GRC 1与JurkatT淋巴细胞共培养检测T细胞凋亡率。SP法检测Ki6 7表达 ,评价肾癌预后。　结果　 (1) 4 4例肾癌组织FasL表达阳性率 4 6 .5 % ,高于正常肾组织的 2 3.2 % ,差别有显著性意义 (P <0 .0 1)。随肾癌分期增加 ,FasL表达阳性率增加。肾癌FasL表达率与Ki6 7表达率呈显著正相关 (r =0 .93,P <0 .0 1)。 (2 )肾癌组织TIL凋亡率为 33.9% ,高于正常肾组织的3.5 % ,差别有显著性意义 (P <0 .0 1)。肾癌FasL表达率与TIL凋亡率呈显著正相关 (r =0 .96 ,P <0 .0 1)。 (3) 786 0FasL表达率 18.6 % ,GRC 1表达率 2 .3% ,二者差别有显著性意义 (P <0 .0 1)。Ju rkat细胞与 786 0细胞共培养的凋亡率 14 .9% ,与GRC 1共培养的凋亡率 1.3% ,二者差别有显著性意义 (P <0 .0 1)。中和抗体NOK 2中和 786 0细胞FasL后 ,与之共培养的Jurkat细胞凋亡率显著减少 (P <0 .0 1)。　结论　肾癌组织FasL表达增高 ,以此诱导淋巴细胞凋亡 ,实现对宿主的免疫攻击。     

缺氧大鼠主要脏器钾钠钙含量的变化

目的 为进驻高原部队制定营养卫生保障措施提供资料。方法 Wist大鼠60只,按体重随机均分成缺氧10d组、缺氧20d组和对照组。缺氧组大鼠在7000m人体低压舱内模拟缺氧1.5h,每天1次,连续20d。第10d后缺氧10d组和对照组断头取血、心、肾。20d后缺氧20d组大鼠以同样方式处置。用原子吸收分光光度计测定各种组织的钾钠钙含量。结果 缺氧组血浆和肾脏及心脏组织中钙台量较对照组明显低;钾含量在血浆和肾组织中降低1Jb脏组织中升高。两缺氧组血浆中钠含量较对照组明显高,肾脏组织中明显低。结论 慢性缺氧可使血浆、肾和心组织钙含量降低。     

腹腔镜下左肝外叶切除治疗肝胆管结石25例临床分析

目的 探讨腹腔镜下左肝外叶切除治疗肝胆管结石的临床价值.方法 选取我院2002年11月至2009年10月实施的25例腹腔镜下行左肝外叶切除的肝胆管结石患者作为实验组(腹腔镜组),同时期39例满足腹腔镜治疗但自愿选择开腹手术的患者作为对照组(开腹组).观察指标包括手术时间、术中出血量、术后住院天数、术后并发症、术后生化指标(T-BIL、ALT和ALT)及术后住院天数.结果 两组患者在年龄、性别,术前结石类型及生化指标等方面差异无统计学意义(P>0.05).腹腔镜组术后有1例并发肝创面胆漏,开腹组切口感染3例,肺部感染1例.与开腹组相比,腹腔镜组术中出血量差异无统计学意义(P=0.075);腹腔镜组手术时间明显长于开腹组[(270.4±125.9)min与(156.1±76.2)min(P<0.001)];腹腔镜组与开腹组在术后住院天数[(8.4±2.5)d与(14.0±3.7)d(P<0.001)]、术后血清T-BIL[(14.1±3.8)IU/L与(16.7±1.5)IU/L(P=0.003)],ALT[(128.1±71.7)IU/L与(185.5±85.9)IU/L(P=0.007)]和AST[(143.2±67.1)IU/L与(187.7±93.3)IU/L(P=0.043)]变化等方面差异有统计学意义.结论 腹腔镜下左肝外叶切除治疗肝胆管结石是一项有前途的微创外科技术,具有创伤小、并发症少、住院时间短、恢复快等优点,值得推广.