核糖体蛋白S6激酶1基因沉默对高糖刺激下肝细胞固醇调节元件结合蛋白1 c表达的影响

目的 探讨核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)基因沉默后对高糖刺激下小鼠肝细胞固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP1c)表达的影响.方法 将构建的S6K1shRNA重组基因腺病毒(S6K1Ax)注射进db/db小鼠尾静脉,以注射含pU6启动子的腺病毒(pU6Ax)空载体的db/db小鼠作对照组,HE染色观察肝脏病理改变并检测肝脏甘油三酯含量变化.S6K1Ax转染小鼠肝细胞AML12细胞,转染pU6Ax的作为对照组,分别用高糖、高胰岛素,高糖高胰岛素刺激,逆转录聚合酶链式反应分析肝细胞在各种条件刺激后mSREBP1c等的表达,Western blot检测db/db小鼠肝脏及AML12细胞S6K1的蛋白表达.结果 db/db糖尿病小鼠注射S6K1Ax后1周,肝脏S6K1蛋白表达被抑制,对照组与实验组肝脏甘油三酯含量分别为(0.65±0.02)mmol/L和(0.56±0.01)mmol/L,t=4.312,P<0.01,差异有统计学意义.HE染色显示实验组肝细胞胞质含脂肪滴减少,空泡细胞数量减少,脂肪肝得到改善.AML12肝细胞mSREBP1c表达实验组为0.03±0.01,对照组为0.06±0.01,t=5.624,P<0.01,差异有统计学意义.与基础状态相比,给以胰岛素刺激后实验组和对照组mSREBP1c表达均增加,实验组上升至0.06±0.02,t=8.452,P<0.01,对照组上升至0.08±0.02,t=3.591,P<0.05.高糖刺激对实验组和对照组mSREBP1c表达均无明显影响.与高胰岛素刺激组相比,高糖高胰岛素刺激后实验组和对照组mSREBP1c表达均无明显差异.结论 S6K1通过影响脂代谢的关键调控基因mSREBP1c表达参与了脂肪的合成,推测S6K1在脂肪肝的形成中发挥了重要作用.     

稳定表达rhPDGF—BB的CHO细胞系的建立及其生物学特性研究

目的:建立稳定表达人血小板衍化生长因子-BB(PDGF-BB)全长的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞系,并检测表达产物的生物活性.方法:通过脂质体瞬间转染的方法将含有rhPDGF-BB全长的质粒转染CHO细胞系.利用抗生素筛选的方法使转染阳性的细胞扩增和单克隆化,进一步稳定传代.通过Western印迹法挑选高表达克隆,进而使用MTT法检测转染前后细胞增殖活性和转染细胞上清培养NIH 313细胞的增殖情况.反复传代、冻存和复苏鉴定表达的稳定性.结果:获得稳定且高效表达rhPDGF-BB的CHO细胞系;转染前后细胞生长速度存在差异,NIH 3T3细胞的增殖随转染细胞上清的浓度和培养时间的增加而增加.结论:pSELECT-GFPzeo-MCS载体能作为稳定表达的载体用于筛选.稳定表达rhPDGF-BB的CHO细胞具有新的生物学功能,实现了组织工程种子细胞的构建,为研究糖尿病溃疡创面愈合的生物材料提供实验基础.     

胰岛素经VEGF-A/VEGFR2途径促进恒河猴视网膜血管内皮细胞的血管新生

用人胰岛素处理恒河猴视网膜血管内皮细胞系RF/6A,测定其增殖、迁移、管腔形成情况和血管内皮生长因子A(VEGF-A)及其受体(VEGFR)的表达与磷酸化.与空白对照组相比,胰岛素促进RF/6A细胞增殖、迁移和管腔形成(均P＜0.01)、促进VEGF-A mRNA的表达和蛋白的活性(均P＜0.05);促进VEGFR2 mRNA的表达和蛋白的磷酸化(均P＜0.01),而对VEGFR1 mRNA的表达影响无统计学意义(P＞0.05)     

测定糖基化蛋白对判断非胰岛素依赖型糖尿病疗效的意义

本文测定32例正常人和34例应用克糖利(Glutril)治疗的非胰岛素依赖型糖尿病患者的 GHb 和 GSP 浓度。治疗前34例病人 GHb、GSP 及空腹血糖(FBG)值明显高于正常组(P<0.01)。治疗3～6个月后,31例病人(91.2%)GHb、GSP 降至正常,21例病人(61.8%)FBG 降至正常,10例病人(29.4%)FBG 接近正常(116～145 mg/d 1)。疗效差的3例病人(8.8%)GHb、GSP 和 FBG 水平治疗前后无明显变化。据此提出 GHb、GSP 可做为评价糖尿病控制的一项较客观有用的生化指标。     

肿瘤坏死因子α在2型肥胖糖尿病患者中的作用

目的：探讨肿瘤坏死因子α在肥胖的2型糖尿病患者中的作用。方法：用双抗体夹心ELISA法检测肥胖、非肥胖的2型糖尿病患者和健康成人血清中肿瘤坏死因子α的水平。结果：肥胖的2型糖尿病患者血清中肿瘤坏死因子α的表达水平明显高于非肥胖组与对照组，且与体重指数呈明显的正相关，与胰岛素敏感性指数呈负相关。结论：肿瘤坏死因子α在肥胖介导的胰岛素抵抗中起重要作用。     

2型糖尿病患者糖尿病肾病危险因素分析

目的：分析糖尿病肾病(DN)相关危险因素。方法：随机抽取糖尿病(DM)患者1211例，根据24h尿白蛋白排泄率(UAER)将其分3组。结果：(1)相关分析示UAER与年龄、病程、餐后血糖(PBG)、收缩压(SBP)、舒张压(DBF)，血清尿酸(SUA)、甘油三酯(TG)、纤维蛋白原(FIB)，餐后胰岛素(PINS)、胰岛素抵抗指数(IR)和24h尿尿酸(UUA)等多变量呈正相关。(2)回归分析示病程、24hUUA、TC、FIB、IR为DN的独立危险因素。结论：DN的危险因素有多种，主要与胰岛素抵抗，血胆固醇(TC)、FIB及24hUUA排量增加有关。     

初诊2型糖尿病患者性别及年龄对心率变异性的影响

目的探讨初诊2型糖尿病患者的性别及年龄对心率变异性(HRV)时域指标的影响。方法初诊2型糖尿病患者391名,男183例,女208例,年龄40～70岁。分为40岁～、50岁～、60岁～年龄组。24 h动态心电图检查,测定心率变异性时域指标:全部正常窦性R-R间期值的标准差(SDNN);全程按5 min分成连续的时间段,先计算每5 min正常R-R间期的平均值,再计算所有平均值的标准差(SDANN);全程按5 min分成连续的时间段,先计算每5min正常R-R间期的标准差,再计算所有标准差的平均值(SDNNI)。采用SPSS 10.0软件进行统计学分析。结果初诊2型糖尿病患者SDNN、SDANN、SDNNI男性高于女性,在40岁～年龄组和50岁～年龄组中差别有统计学意义(P<0.01),在60岁～年龄组中差别无统计学意义。女性年龄与SDNN(r=-0.374)、SDANN(r=-0.319)、SDNNI(r=-0.271)呈负相关,差别有统计学意义(P<0.01)。男性年龄与SDNN(r=-0.273)、SDANN(r=-0.293)、SDNNI(r=-0.369)、全部相邻R-R间期差的均方根(rMSSD,r=-0.317)、24 h内差值超过50 ms的连续正常获得R-R间期数所占的百分数(PNN50,r=-0.264)呈负相关,差别有统计学意义(P<0.01)。结论初诊2型糖尿病患者的性别和年龄与心率变异性时域指标经统计学分析,差别有统计学意义。     

对2型糖尿病肾病患者氧化应激与尿MCP-1的临床研究

目的:探讨2型糖尿病不同肾病分期患者血中抗活性氧(ROS)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)及尿单核细胞趋化蛋白-(1MCP-1)的水平变化及与肾功能指标的相关性。方法:将160例2型糖尿病患者根据24h尿UMA水平分为3组,并根据血肌酐水平进一步对临床蛋白尿期分组,分别进行不同肾病分期组间抗ROS活性、GSH-PX及尿MCP-1的水平的测定及比较。抗ROS活性、GSH-PX检测采用分光光度计法,尿MCP-1测定采用ELISA法。结果:在不同分期的2型糖尿病肾病组中,抗ROS活性随糖尿病肾病的进展而活性下降(P<0.05);GSH-PX在早期阶段随肾功进展呈下降趋势(P<0.05),进入临床蛋白尿阶段后不同组间差异无统计学意义(P>0.05);尿MCP-1则呈持续上升趋势(P<0.05)。抗ROS活性、GSH-PX及尿MCP-1分别与24h尿蛋白(r分别为-0.71、-0.22和0.45)、Ccr(r分别为0.39、0.34和-0.47)密切相关。结论:ROS合成增加、GSH-PX的活性下降均参与了糖尿病肾脏的损伤,并使代表肾脏炎症反应的尿MCP-1随尿排出增加,推测ROS介导的炎性反应在糖尿病肾病的发生、发展中发挥了作用。     

线粒体基因异质性突变的检测技巧

目的：探讨提高线粒体基因异质性突变tRNA^leu（UUR）3 243A→G检出率的方法.方法：采用经测序证实的纯合突变菌株质粒DNA配制不同比例的模板,以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）分析检测灵敏度.结果：常规琼脂糖凝胶电泳对3 243A→G突变检测的灵敏度为12%的异质比例,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测灵敏度为8%的异质比例,扩大酶切体系可使前者提高到2%的异质比例.结论：增加PCR产物比例,扩大酶切体系,可提高线粒体基因异质性突变的检出率,尽量减少假阴性结果,可应用于临床检测.     

己酮可可碱对老年糖尿病肾病早期治疗作用的研究

目的探讨血液流变性改善剂己酮可可碱对老年糖尿病肾病早期的治疗作用.方法将106例Ⅱ型糖尿病伴有微量白蛋白尿患者随机分为2组治疗,己酮可可碱组66例,卡托普利(开博通)组40例,治疗期为6个月.结果2组治疗后尿总蛋白(UTP)及尿白蛋白排泄率(UAER)均明显降低[己酮可可碱组UTP从(0.21±0.06)g/24h降至(0.12±0.04)g/24h,P＜0.01;UAER从(132.65±53.58)μg/min降至(55.82±27.17)μg/min,P＜0.01.卡托普利组UTP从(0.19±0.06)g/24h降至(0.13±0.05)g/24h,P＜0.01;UAER从(115.26±53.35)μg/min降至(75.62±43.34)μg/min,P＜0.01].肌酐清除率(CCr)有所改善[己酮可可碱组从(1.37±0.16)ml@s-1@1.73m-2增到(1.48±0.22)ml@s-1@1.73m-2,P＜0.05;卡托普利组从(1.33±0.27)ml@s-1@1.73m-2)增到(1.43±0.34)ml@s-1@1.73m-2,P＜0.05],治疗后2组间比较无明显差异(P＞0.05).2组对血压和血脂都有一定良好的影响.结论己酮可可碱有减少尿蛋白、改善肾功能的作用,对老年Ⅱ型糖尿病早期肾病有确切的治疗作用.