胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸-脱氧寡核苷酸抑制疟原虫红前期发育

目的 观察胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸-脱氧寡核苷酸（cytidine-phosphate-guanosine oligodeoxynucleotide,CpG ODN）对疟原虫红前期发育的影响。 方法 通过构建约氏疟原虫BY265株18S rRNA外标准品质粒,与小鼠三磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）内标准品共同组成TaqMan RT-PCR分析模型。用不同剂量（0.05×10⁵ 、0.1×10⁵、0.5×10⁵、1×10⁵和2×10⁵个）约氏疟原虫唾液腺子孢子感染BALB/c小鼠,42 h后处死小鼠取其肝脏,制备约氏疟原虫cDNA进行TaqMan RT-PCR反应,以小鼠肝脏虫荷指标检验模型的有效性。将12只BALB/c小鼠随机均分为CpG组、CpG对照组和PBS对照组,CpG组和CpG对照组小鼠分别尾静脉注射脱氧寡核苷酸1826（ODN1826）及其对照（ODN1826 control）各30 μg,PBS对照组注射0.01 mol/L PBS溶液 200 μl。24 h后各组每鼠感染100个子孢子,于感染后42 h处死小鼠取肝脏,制备约氏疟原虫cDNA进行TaqMan RT-PCR,定量分析感染疟原虫24 h前CpG ODN预处理小鼠肝脏虫荷的变化。 结果 构建的约氏疟原虫外标准品质粒所插入的BY265株18S rRNA基因与17XNL株18S rRNA基因相似性为98%,它与小鼠GAPDH内标准品共同组成的TaqMan RT-PCR分析模型能够正确反映小鼠肝脏虫荷与唾液腺子孢子感染量的正比关系。感染疟原虫24 h前给予CpG ODN处理,CpG组小鼠肝脏虫荷为CPG对照组的1/5（0.28/1.33）,两者差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 本实验建立的TaqMan RT-PCR分析模型适用于红前期疟原虫（肝脏）虫荷指标的研究。CpG ODN能显著抑制红前期疟原虫的发育。     

蚊期和红内期持续表达绿色荧光蛋白的重组约氏疟原虫

目的 构建蚊期、红内期持续表达绿色荧光蛋白（GFP）的约氏疟原虫BY265株。 方法 用SacⅡ酶酶切含有伯氏疟原虫ssu-rrna基因和GFP基因的重组质粒pl0017使之线性化,用电转化的方法将该重组质粒转化入红内期约氏疟原虫BY265株,获BY265-EGFP重组疟原虫,尾静脉注射感染昆明小鼠,24～30 h后用乙胺嘧啶饲喂小鼠5～6 d,鼠尾静脉采血涂片观察原虫感染率。以疟原虫基因组DNA为模板,PCR鉴定转染重组质粒pl0017的约氏疟原虫。斯氏按蚊叮咬感染BY265-EGFP重组疟原虫的小鼠,按蚊血餐后第7天和第16天解剖蚊胃和唾液腺,观察疟原虫能否在蚊体内正常发育。 结果 荧光显微镜观察到呈绿色荧光的红内期各期形态正常的约氏疟原虫。PCR检测结果表明,GFP和ssu-rrna基因已成功整合到约氏疟原虫基因组中。按蚊感染实验证实重组BY265株能在蚊体内正常发育。 结论 构建了蚊期、红内期持续表达绿色荧光蛋白的约氏疟原虫。     

不同种鼠对实验脑型疟发生的影响研究

目的比较昆明小鼠和C57BL/6小鼠作为种鼠对实验脑型疟模型的影响。方法分别以伯氏疟原虫ANKA株感染C57BL/6小鼠和昆明小鼠作为传代用种鼠,当种鼠原虫率为5%～15%时接种子代C57BL/6小鼠,观察两组小鼠原虫率、脑型疟发生率以及死亡率。同时,通过脑组织切片和脑部淋巴细胞的流式检测,观察两组发生脑型疟小鼠的脑部微血管中感染疟原虫红细胞和CD8＋T细胞的粘附情况,另外,通过感染CD8＋TKO小鼠,证实CD8＋T细胞在两组小鼠发生脑型疟中的作用。结果用昆明小鼠作为种鼠的实验组的原虫率和脑型疟发生率均明显高于用C57BL/6小鼠作为种鼠的实验组,发生脑型疟小鼠的脑部组织切片发现,脑部微血管可见明显的感染疟原虫红细胞的粘附和CD8＋T淋巴细胞浸润;而用昆明小鼠作为种鼠感染CD8＋T细胞缺失的C57BL/6小鼠并不能诱导实验脑型疟的发生。结论与C57BL/6小鼠相比,昆明小鼠作为种鼠的实验组的脑型疟发病率更高,而且感染疟原虫红细胞和CD8＋T细胞在脑部微血管内的粘附也是该脑型疟发生的主要因素,因此,更适合用于实验脑型疟模型的建立及其机制的探讨。     

新生儿窒息的复苏及护理体会

<正>新生儿窒息是产科中最常见的新生儿危象,是新生儿神经发育异常和围生儿死亡的主要原因,严重窒息缺氧还可造成新生儿不可逆的脑损害[1]。实行正确、及时、有效的新生儿窒息复苏技术是降低围生儿病死率和伤残率的关键。现将我院近两年来对新生儿窒息复苏及护理体会简述如下。     

大鼠脊髓半横断损伤后Versican及其受体CD44的表达变化

目的探讨大鼠脊髓半横断(hemisected spinal cord injury,hSCI)损伤后14d硫酸软骨素蛋白多糖Versi-can及其受体CD44的表达变化。方法10只成年SD大鼠随机分为正常对照组和术后14d组。建立成年SD大鼠脊髓半横断(T9~T10)模型。14d后取损伤位点头尾段T9、T10节段制作冰冻切片,运用Versican、CD44抗血清进行免疫组化ABC法染色。分别观察并计数脊髓腹角和Ⅰ、Ⅱ板层内Versican、CD44的免疫反应阳性细胞数。结果Ver-sican主要分布于正常大鼠脊髓腹角,CD44主要分布于正常大鼠脊髓Ⅰ、Ⅱ板层和腹角。损伤后14d腹角Versican阳性细胞数较正常组明显下降(P<0.05),Ⅰ、Ⅱ板层和腹角的CD44阳性细胞数也较正常组明显下降(P<0.05)。而手术组损伤侧与未损伤侧Versican和CD44表达水平均无明显差异(P>0.05)。结论大鼠脊髓半横断损伤14d后Versican、CD44表达均明显下降,提示脊髓半横断损伤对脊髓灰质内细胞表达Versican、CD44有影响。     

佛山地区小儿G6PD常见基因突变型的临床研究

目的　探讨佛山地区小儿G6PD缺乏症患儿基因突变类型。方法　使用突变特异性扩增系统 (ampliticationre fractorymutationsystem ,ARMS)方法测定经G6PD/ 6磷酸葡萄糖酸脱氢酶 (6PGD)比值法二次验证的患儿 4 0例静脉血。结果　4 0例G6PD缺乏症标本男 39例 ,女 1例。经ARMS方法分析 3种已知突变。其中G1388A突变 17例 ,占 4 5 % ;G1376T突变 10例 ,占 2 5 % ;A95G突变 3例 ,占 7.5 % ,未定型 10例 ,3种常见突变共计 30例 ,占 75 %。结论　G6PD基因突变型G1388A、G1376T及A95G也是佛山地区G6PD缺乏症的常见基因突变型 ,以G1388A最多见。     

脑电图检查在新生儿缺氧缺血性脑病诊断中的应用

新生儿缺氧缺血性脑病（ＨＩＥ）不仅可引起围产期新生儿死亡,而且是造成儿童伤残主要原因之一［１］。脑电图（ＥＥＧ）检查对ＨＩＥ的病情判断及预后评估有重要意义［２］。本文对４５例ＨＩＥ患儿ＥＥＧ进行分析,以评价ＥＥＧ在ＨＩＥ中的诊断价值。１资料与方法１?..     

长期服用避孕药致多脏器梗塞死亡1例

1　病例介绍患者 ,女 ,40岁 ,因左肢体活动障碍、说话不清 ,口角歪斜于 1996年 5月 10日 10∶ 0 0 Am入院 ,无头痛 ,恶心、呕吐及二便失禁。既往无高血压、心脏病、糖尿病风湿等病史 ,有服避孕药 1号 8年史。近半年来因月经量多 ,为减少出血量自行在月经期每日服避孕 1号 2片。入院后查体 :神智清楚 ,语言欠清 ,T36 .2℃ ,BP16 .2 / 10 .5 k Pa,心率 80 / min,颈软 ,双瞳孔等大等圆 ,光反射灵敏 ,视力正常 ,左鼻唇沟变浅 ,口角右歪。左上肢肌力 3级。下肢肌力 2级 ,左肢体健反射亢进。巴彬斯基氏征 ( ) ;感觉减退 ;右肢体正常。心律整齐 ,…     

基于化学发光磁微粒免疫分析技术检测血清Lp- PLA2浓度

目的 建立一种脂蛋白相关性磷脂酶A2(Lp-PLA2)直接化学发光免疫分析方法并进行性能评价。方法 根据双抗夹心法原理,将磁珠-Lp-PLA2抗体1(MAb, Coating)与血清中的Lp-PLA2抗原以及吖啶酯-Lp-PLA2抗体2(MAb, Labeling)反应形成免疫复合物,磁场吸附清洗,加入预激发液和激发液后仪器检测反应过程中相对发光单位(RLU),通过标准曲线方程计算样本中Lp-PLA2浓度,并对试剂各项性能进行评估。结果 本方法空白限为0.5ng/mL,线性范围为5～1 000ng/mL,回收率在85%～115%范围内,批内精密度为2.26%～3.80%,批间精密度为3.82%～4.63%,特异性和抗干扰能力符合要求,与热景Lp-PLA2检测试剂盒比对相关系数r=0.9874。结论 本方法各项性能指标均达到临床检验质量要求,与现有试剂盒比对结果具有较好的一致性,可供广大研究者借鉴参考。