临床微生物学检验实验教学综合改革与实践

以临床微生物学检验实验教学应进一步适应临床实际需要、提高学生综合能力为目的,通过调整实验教学模式、修订实验教学大纲、优化实验内容、编写简练实用的实验教材、改进实验教学方法和手段、确立实验考核内容和方式等一系列改革与实践措施,使学生全面掌握临床微生物学的基本实验技能。     

结核分枝杆菌ESAT-6诊断抗原基因的克隆及同源性分析

目的 获得结核分枝杆菌ESAT-6抗原基因,进行DNA测序、同源性分析,为筛选结核病候选诊断抗原基因奠定基础.方法 以结核菌标准菌株H37Rv为模板,通过PCR技术扩增出结核分枝杆菌ESAT-6抗原基因,将其重组到pGEM-T载体后进行序列测定和生物信息学分析.结果 成功扩增出结核分枝杆菌ESAT-6抗原基因,测序表明该片段开放阅读框由288bp组成,与已发表基因核苷酸序列相比,同源性为99%,推导编码氨基酸序列同源性为90%.结论 成功克隆结核分枝杆菌ESAT-6基因,测序结果表明该片段阅读框完整.     

细粒棘球蚴 GST 抗原表位的生物信息学预测?

目的：应用生物信息软件分析细粒棘球蚴谷胱甘肽 S-转移酶(EgGST)的蛋白二级结构并预测 B 淋巴细胞表位和 T淋巴细胞表位,为后续表位疫苗的设计研究提供基本的数据和资料。方法采用 DNAstar 软件、ProPred MHC Class-Ⅱ Binding Peptide Prediction Server 和 Biosun 软件对 EgGST 的 B 淋巴细胞表位和 T 淋巴细胞表位进行预测。结果预测 EgGST 存在8个 B 淋巴细胞表位区域和7个 T 淋巴细胞表位。结论分析预测的 EgGST 抗原表位将对后续的表位疫苗研究具有重要意义。     

复发性阿弗他溃疡患者外周血淋巴细胞亚群指标、免疫球蛋白及补体水平的变化及意义

目的 探讨免疫因素与复发性阿弗他溃疡(RAU)发病的关系.方法 选取2019年10月至2020年9月在宁夏医科大学总医院就诊的RAU患者123例作为RAU组.另外,选取同期体检的健康者120例作为对照组.采用流式细胞术检测淋巴细胞亚群指标CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+百分比,CD4+/CD8+,CD3-CD16+CD56+、CD3-CD19+百分比;采用免疫散射比浊法检测体液免疫相关指标免疫球蛋白IgA、IgG、IgM及补体C3、C4水平.采用SPSS20.0统计软件对上述指标的检测结果进行组间比较.结果 RAU组与对照组外周血淋巴细胞CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+百分比,CD4+/CD8+,CD3-CD16+CD56+、CD3-CD19+百分比比较,差异均无统计学意义(P>0.05);RAU组免疫球蛋白IgA、IgG和补体C3、C4水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 RAU患者的细胞免疫与体液免疫功能均存在异常,免疫因素可能参与了RAU的发生和发展过程.     

类风湿关节炎患者血清IgG及亚类的水平和临床意义

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者血清IgG及亚类的水平和临床意义。方法选择2018年10月至2019年6月该院风湿免疫科收治的RA患者54例纳入RA组,选择同期36例健康体检者纳入对照组。采用双抗体夹心法ELISA检测血清IgG亚类水平;采用免疫散射比浊法检测免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)、补体(C3、C4)和类风湿因子(RF)水平;采用流式点阵免疫发光法检测抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体水平。比较两组各检测指标水平,分析RA患者血清IgG亚类与IgG、IgA、IgM、C3、C4、RF及抗CCP抗体之间的相关性。结果RA组血清IgG、IgA、RF和抗CCP抗体水平显著高于对照组(P<0.05),但IgM、C3和C4水平差异无统计学意义(P>0.05)。RA组血清IgG1和IgG3水平显著高于对照组(P<0.05),两组血清IgG2和IgG4水平差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,RA组IgG1/IgG和IgG3/IgG显著升高(P<0.05),而IgG2/IgG显著下降(P<0.05)。Spearman相关分析显示,RA组患者血清IgG1水平与IgG呈高度正相关(r=0.865,P<0.05);IgG2、IgG3水平与IgG均呈中度正相关(r=0.613、0.644,P<0.05);IgG4水平与IgG呈低度正相关(r=0.271,P<0.05);IgG2水平与IgA呈低度正相关(r=0.399,P<0.05);IgG3水平与IgM呈低度正相关(r=0.343,P<0.05)。IgG各亚类与RF、抗CCP抗体之间均无相关性(P>0.05)。结论RA患者血清IgG水平显著升高,并且存在IgG亚类水平变化。IgG亚类检测对RA早期诊断价值有限。     

人载脂蛋白M野生型和突变型表达载体的构建及鉴定

目的: 构建人载脂蛋白M (APoM)野生型和突变型原核表达载体PGEX-KG-APoM及真核表达载体PcDNA3.1(+)-APoM。方法: Trizol法抽提HePG2细胞总RNA,RT-PCR扩增APoM全长基因,将基因片断重组到PMD18-T质粒中构建PMD18-T-APoM重组质粒载体,转化到大肠埃希菌JM109后筛选阳性克隆,提取质粒酶切和测序鉴定。采用Sited-directedMutagenesis定点诱变试剂盒对APoM基因进行体外定点诱变,DNA测序鉴定定点诱变成功与否。用双酶切方法分别将APoM野生型和突变型基因定向连接到原核表达载体PGEX-KG和真核表达载体PcDNA3.1(+)中,构建野生型和突变型PGEX-KGAPoM重组体和PcDNA3.1(+)-APoM重组体,分别转化到大肠埃希菌DH5α内,提取质粒酶切鉴定和测序鉴定。结果: 成功克隆了APoM并构建了野生型和突变型原核表达载体和真核表达载体。结论: 通过RT-PCR,定点诱变及基因重组技术成功构建野生型和突变型重组表达质粒PGEX-KG-APoM和PcDNA3.1(+)-APoM,为进一步研究APoM的功能奠定了基础。     

蚌埠地区乙型肝炎病毒基因分型及临床意义

目的 了解蚌埠地区乙型肝炎患者的病毒(HBV)基因型分布情况,并探讨其临床意义。方法 选择在我院就诊的乙型肝炎患者268例,采用荧光定量PCR测定乙肝患者的病毒载量并进行基因分型,同时分析基因型与患者年龄及HBeAg的关系。结果 268份血清标本中有202株为C基因型,占75.37%(202/268),46株为B基因型,20株为B+C型;C基因型的病毒载量和HBeAg阳性率明显高于其他基因型,B基因型感染者的年龄相对较轻。结论 蚌埠地区的乙型肝炎患者基因型以C型为主,B基因型次之,基因型与乙肝患者HBeAg阳性率、年龄等临床指标有一定的相关性。     

海藻玉壶汤治疗附件囊肿临床研究

目的 观察海藻玉壶汤治疗附件囊肿的临床疗效。方法 将120例附件囊肿患者随机分为对照组和观察组;对照组予安慰剂治疗,观察组给予海藻玉壶汤治疗;治疗3个疗程后,从囊肿疗效、中医症状评分等方面进行评价。结果 与对照组相比,观察组治愈率、总有效率明显更高,中医症状评分明显更低(P <0.01)。结论 海藻玉壶汤治疗附件囊肿临床疗效显著,能明显改善临床症状。     

HMGA1在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

目的探讨高迁移率族蛋白A1（high mobility group protein A1,HMGAl）在人类甲状腺乳头状癌组织中的表达及临床意义。方法应用RT—PCR检测32例甲状腺乳头状癌组织及相应的癌旁正常组织和15例甲状腺腺瘤组织中HMGAl mRNA的表达情况;应用免疫组织化学法检测石蜡包埋的60例甲状腺乳头状癌组织和20例甲状腺腺瘤组织中HMGAl的蛋白表达水平。结果HMGAl mRNA在甲状腺乳头状癌组织中的表达量显著高于癌旁正常甲状腺组织（P〈0．01）及甲状腺腺瘤组织（P〈0．05）。HMGAl蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的阳性表达率显著高于甲状腺腺瘤组织（P〈0．01）,在有淋巴结转移组的阳性表达率高于无淋巴结转移组（P〈0．05）;HMGAl蛋白的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、包膜侵犯及TNM分期均无关（P〉0．05）。结论HMGAl的异常表达可能与甲状腺乳头状癌的发生发展和淋巴结转移有关,有望成为甲状腺乳头状癌诊治中的一个新的标志物。