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1.
目的构建结核分枝杆菌Rv2994基因原核表达载体并进行表达,为进一步研究奠定基础。方法PCR扩增Rv2994基因编码序列,定向克隆入融合蛋白原核表达载体pGEX-1λT获得重组表达质粒pGEX-2994,转化大肠杆菌测序后诱导表达,纯化目的蛋白并免疫新西兰大白兔获取多价抗体。结果从结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA中扩增出Rv2994基因,成功构建了融合表达质粒pGEX-Rv2994,转化大肠杆菌JM109后,经IPTG诱导,表达出约73kDa重组融合蛋白,用Western blotting证实其有良好的抗原性,纯化蛋白免疫新西兰大白兔,获得了高效价的抗体。结论成功构建了原核表达载体pGEX-2994,获得并纯化了GST-Rv2994融合蛋白,制备了高效价的多价血清,为Rv2994基因的功能研究奠定了基础。 相似文献
3.
目的探讨核糖核酸酶抑制因子(RI)与血管生成素(ANG)相互作用对BALB/C裸鼠人膀胱癌(cloladder cancer)移植瘤的生长转移及对PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响。方法构建BALB/C裸鼠人膀胱癌移植瘤模型,通过HE染色、免疫组织化学染色、免疫荧光和免疫印迹法检测相关通路蛋白的表达情况。根据不同的组合分为:BIU-87+ANG,BIU-87+RI,BIU-87+ANG+RI和BIU-87+空质粒组,每组接种6只BALB/C裸鼠。结果接种后一周左右皮下有实体瘤生成,30天后处死BALB/C裸鼠,取出肿瘤并称取其重量。实验组BIU-87+RI和BIU-87+ANG+RI组比对照组的肿瘤重量低,差异具有统计学意义(P0.05)。肺HE染色观察显示实验组肺部转移结节明显比对照组少,BIU87+ANG组中p-mTOR,p-PI3K,p-Akt和p-GSK3β表达升高,BIU87+RI组和BIU-87+ANG+RI组表达下降。结论 RI与ANG相互作用抑制BALB/C裸鼠人膀胱癌移植瘤的生长转移,同时抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路中磷酸化蛋白的水平。 相似文献
4.
目的探讨葡萄糖转运体9(SLC2A9)基因 rs3733591(C>T)的单核苷酸多态性(SNPs)与我国汉族人群痛风发病及血尿酸水平的相关性,并分析其多态性与痛风患者、健康体检者 PBMCs SLC2A9 mRNA 表达的相关性。方法①采用 TaqMan?探针法检测痛风组(297例原发性痛风性关节炎患者)和健康对照组(211名健康体检者) rs3733591(C>T)位点的基因型,χ2检验比较2组基因型及等位基因分布频率,计算比值比(OR)及95%可信区间(95%CI)。②采用实时荧光定量-PCR(RT-qPCR)法检测46例间歇期痛风患者及40名健康对照组 PBMCs SLC2A9 mRNA 的表达水平,非参数检验比较各组变量间的差异,并分析与 rs3733591(C>T)多态性的相关性。结果 rs3733591(C>T)位点的 TT 基因型在痛风组的分布频率显著低于健康对照组(37.7%与48.3%,P=0.017),携带 TT 基因型的个体罹患痛风的相对风险OR 为0.647(95%CI:0.452~0.925)。而等位基因 T 在痛风组中的分布频率为60.9%,显著低于健康对照组的69.2%(χ2=7.324,P=0.007),携带等位基因 T 的个体罹患痛风的相对风险 OR 为0.695(95%CI:0.533~0.905);等位基因 C 在痛风组中的分布频率为39.1%,显著高于健康对照组的30.8%(χ2=1.440,P<0.05)。痛风组中携带 TC 基因型个体的外周血单个核细胞 SLC2A9 mRNA 的表达水平显著高于携带 TT 基因型者,而痛风组及健康对照组携带其他基因型的个体 SLC2A9 mRNA 的表达差异无统计学意义(P>0.05)。有痛风石(30例)痛风患者与无痛风石(190例)痛风患者的基因型及等位基因分布频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论本研究提示 SLC2A9基因 rs3733591(C>T)位点的多态性可能与我国汉族人群原发性痛风的易感性相关,而与痛风患者痛风石形成无关;等位基因 C 可能为痛风发病的风险因子,而 TT 基因型及 T 等位基因可能对痛风发病具有保护作用;其多态性可能通过影响 SLC2A9基因的转录表达水平来参与痛风的发病。 相似文献
5.
目的探讨老年胆道疾病临床特点及其治疗方法.方法回顾性分析我院收治的36例老年胆道疾病患者的治疗情况,分析患者并存病的类型,治疗方式的选择及并发症.结果72%患者存在不同类型的并存病,所有病例都行手术治疗,其中急症手术12例.术后并发症发生率11%,其中切口感染7例,切口裂开2例,胆瘘2例,肺部感染4例,多器官衰竭2例.无手术治疗死亡病例.结论做好围手术期处理及合理选用手术方式,是老年胆道疾病外科治疗的关键. 相似文献
6.
目的构建结核分枝杆菌假想药物外排泵蛋白编码基因Rv2994的重组穿梭质粒pMV-2994,并对其进行鉴定。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,应用PCR技术扩增Rv2994基因编码序列,定向克隆入融合蛋白原核表达载体pGEX-1λT,获得重组表达质粒pGEX-2994,测序鉴定。酶切该基因片段,定向重组入大肠杆菌-分枝杆菌穿梭载体pMV261,构建重组质粒pMV-2994,通过限制性内切酶酶切及PCR鉴定。结果从结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA中扩增出的Rv2994基因与GenBank公布的序列一致,经过酶切及PCR鉴定,表明Rv2994基因成功插入了pMV261穿梭载体。结论成功构建了重组穿梭质粒pMV-2994,为进一步研究Rv2994基因功能奠定了基础。 相似文献
7.
目的 观察丹参对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者成纤维样滑膜细胞中Fas/FasL mRNA表达的影响.方法 RA患者关节滑液经原代培养,获取成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLSs),分别用终浓度为0、0.2 mg/ml和0.4 mg/ml的丹参作用24 h后,提取总RNA并逆转录成cDNA保存.随机选取正常人外周血,通过分离单个核细胞提取总RNA并逆转录成cDNA保存作为阳性对照.分别采用RT-PCR和SYBR Green适时荧光定量PCR方法检测Fas/FasL mRNA的表达.结果 RT-PCR结果显示,FasL只在外周血标本上有表达,而在各浓度处理的RA FLSs没有检测到;Fas无论在外周血还是不同浓度处理的RA FLSs上均有表达.定量PCR结果显示,Fas的表达量随丹参浓度增加而增加,并且在丹参浓度为0.4 mg/ml时具有统计学差异(P<0.05).Fas mRNA的表达与相应浓度下RA FLSs的凋亡率存在相关性(r=0.998,P<0.05).结论 丹参可体外诱导RA患者成纤维样滑膜细胞Fas mRNA表达上调;未检测到FasL mRNA在RA患者FLSs中的表达.Fas mRNA的上调可能与丹参诱导RA FLSs凋亡有关. 相似文献
8.
随着医学科学的进步,临床对疾病的诊断和鉴别诊断越来越离不开检验医学,而传统的检验医学技术已不能满足临床的需要,分子生物学检验已成为检验医学重要的组成部分,并发挥着越来越重要的作用。分子生物学检验以聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术为核心,广泛地运用于临床,如感染性疾病的诊断、白血病融合基因检测、 相似文献
10.
目的:利用脂多糖刺激家蝇胚胎细胞产生并提取抗菌蛋白,对比研究家蝇胚胎细胞抗菌蛋白和高三尖杉酯碱(HHT)对人髓样白血病细胞K562和正常人体细胞的抑制杀伤作用。方法采用含20mg/L脂多糖的无血清M3培养基作用于处于对数生长期的家蝇胚胎细胞16h,提取上清液中的抗菌蛋白,将抗菌蛋白配制为40、80、160、320和640μg/mL5个浓度组,采用MTT法测定各浓度抗菌蛋白对K562和人脐静脉血管内皮细胞的抑制作用。将处于对数生长期的K562细胞和人脐静脉血管内皮细胞配制成相同浓度的HHT组、家蝇胚胎细胞抗菌蛋白组,两种细胞均采用自身设置对照组。采用流式细胞术测定K562细胞和人脐静脉血管内皮细胞3组药物的有效杀伤率。结果MTT法检测显示,5种浓度抗菌蛋白对K562细胞均具有明显抑制作用,各浓度抗菌蛋白对人脐静脉血管内皮细胞均无抑制作用。对照组、HHT组及家蝇胚胎细胞抗菌蛋白组对K562细胞的有效杀伤率分别为(28.16±2.14)%、(81.41±1.95)%和(82.90±3.03)%;对人脐静脉血管内皮细胞的有效杀伤率分别为(41.13±2.51)%、(82.20±2.57)%和(36.68±1.86)%。结论家蝇胚胎细胞抗菌肽与常用的白血病化疗药物相比,优点在于能有效杀伤白血病细胞又不损伤正常人体细胞。 相似文献