弓形虫ROP2基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的 :构建弓形虫棒状体蛋白 (ROP2 )基因重组质粒并在大肠杆菌中表达 ,用于筛选弓形虫新的诊断抗原和疫苗分子。方法 :根据ROP2基因已知序列 ,设计合成一对引物 ,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出ROP2基因片段 ,再克隆到pGEX 4T 1质粒 ,重组质粒经酶切及PCR鉴定 ,而后进行测序 ;重组质粒在大肠杆菌BL2 1 (DE3)中进行ITPG诱导表达 ,表达产物经SDS PAGE及WesternBlot分析。结果 :ROP2基因PCR产物大小与预期相符 ,约 1 0 4 3bp ,重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子 ,测序结果与已知序列基本吻合 ;SDS PAGE及免疫印迹显示ROP2融合蛋白表观分子量约为 5 5kDa ,表达产物约占菌体总蛋白1 7% ,具有一定的免疫反应性。结论 :克隆并表达了弓形虫ROP2基因 ,为下一步弓形虫诊断及疫苗研究奠定了基础     

Islet-1 在乙酰化调控网络中特异性辅助C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化

 目的 筛选并分析转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞转化为心肌样细胞过程中与Islet-1 相互作用的组蛋白乙酰化酶（HATs）和组蛋白去乙酰化酶（HDACs）,明确Islet-1在C3H10T1/2细胞分化为心肌样细胞乙酰化调控网络中的关键枢纽作用。方法 培养转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞,观察细胞形态。免疫荧光和免疫印迹检测Islet-1的表达部位和最高表达时间点。免疫共沉淀沉淀与Islet-1结合的蛋白。免疫印迹验证Islet-1 相互作用的HATs和HDACs。结果 诱导组细胞形态出现心肌样细胞改变。各组Islet-1主要在胞浆表达。诱导组Islet-1表达量在诱导后3周最高（0.782±0.015）。诱导组Islet-1表达量显著高于空白对照组和C3H10组（分别为0.819±0.026,0.127±0.006和0.126±0.001）（P<0.05）,免疫共沉淀技术可行。与Islet-1相互作用的HATs和HDACs有GCN5、P300/CBP和HDAC4。结论 Islet-1 与GCN5、P300/CBP和HDAC4相互作用特异性辅助C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化。     

基于混频去除和矩阵算法的多尺度特征提取方法分析fMRI数据

由于采用单尺度重构和迭代重复算法,小波特征提取方法在分析海量性质的fMRI数据时存在着致命的混频干扰及耗时过长的缺陷。把混频去除方法引入小波变换,并设计矩阵算法代替迭代重复算法来提高小波运算速度,由此构造一种全新的小波特征提取方法。利用该方法分析了一个被试的听觉fMRI数据,并同基于迭代重复算法的小波特征提取方法和国际上权威的SPM8方法进行比较。结果表明,所提出方法的运算速度最快,检测性能与基于迭代重复算法的相同而远优于SPM8,是一种实用性更强的分析fMRI数据的特征提取方法。而且,用小波变换分析其他种类的信号时也可采用所给出的矩阵算法,以提高其运算速度。     

GDF5基因rs224331多态性与汉族青少年体格发育指标关联分析

目的探讨中国汉族青少年GDF5基因rs224331位点多态性与身高、体重和BMI的相关性。方法采集江苏省某技校1790名17～22岁青少年的身高、体重指标并计算BMI。采用Taqman探针real-timePCR方法检测GDF5基因rs224331位点的单核苷酸多态性,并分析该基因位点与男女生身高、体重和BMI的相关性。结果 97.9%（1754/1790名）基因分型成功,男生859名,女生895名。rs224331位点频率最高的基因型为AA（51.7%）,其次为AC（39.6%）,CC最少（8.7%）。rs224331的基因型分布与男生、女生的身高无显著关联（P分别为0.728和0.723）;rs224331不同基因型间的男生体重和BMI差异均有统计学意义（P均〈0.01）,男生AC基因型体重和BMI均显著高于AA基因型（P=0.002）,女生中未发现类似的相关性（P分别为0.713和0.921）。结论 GDF5基因rs224331位点多态性在本研究的汉族人群中与身高无明显关联,提示该多态性位点可能存在种族特异性。rs224331位点多态性与男生体重和BMI存在相关性。     

基于rDNA序列的酵母整合载体的构建及应用

目的构建一个基于rDNA序列的酵母整合载体。方法通过PCR扩增得到酿酒酵母rDNA序列;通过常规分子生物学技术构建以rDNA序列为整合位点的酵母整合载体。为了确证该载体的效能,将青蒿紫穗槐-4,11-二烯合酶基因克隆到该载体上,构建了含紫穗槐-4,11-二烯合酶基因的整合型酿酒酵母工程菌。提取该工程酵母的基因组,通过紫穗槐-4,11-二烯合酶基因的特异引物进行扩增,确认紫穗槐-4,11-二烯合酶基因是否已整合到酵母基因组上。发酵酵母工程菌,对发酵产物进行GC—MS检测,确认是否产生紫穗槐-4,11-二烯。结果构建了1个酵母整合载体,具有如下特点：①能将外源基因表达盒序列整合到酿酒酵母rDNA序列上,增加目的基因的拷贝数;②选择标记能反复应用,方便获得多拷贝的整合形式;③整合片段不需要酶切线性化,节省了内切酶,而且简化了操作程序。酵母基因组PCR结果表明,紫穗槐-4,11-二烯合酶基因已经整合到了酵母基因组上。以朱栾倍半萜为标准品,对该酿酒酵母工程菌的代谢产物进行GC—MS检测,发现其能产生紫穗槐-4,11-二烯,产量达到（91．33±7．57）mg／L朱栾倍半萜当量。结论初步成功构建了一个基于rDNA序列的酵母整合载体。     

孕酮预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的 探讨孕酮预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤(focal cerebral ischemic and reperfusion injury,fCIRI)的作用及机制.方法 在建立大鼠fCIRI模型前96、48、1h分别给予孕酮(8mg/kg)1次性腹腔注射.建立大鼠fCIRI模型,在fCIRI后第3～8天,检查大鼠的空间记忆功能和缺血侧海马CA1区存活神经元数量.检测孕酮预处理后1～96 h的海马细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)磷酸化水平和活化ERK1/2核转移.结果 造模前48、1h经孕酮预处理的大鼠海马CA1区神经元存活数量(mm-1)较造模后明显增多(164.3±11.0、218.5±9.1与142.7±12.1,F=29.45,P＜0.01);造模前48、1h经孕酮预处理的大鼠能明显缩短脑缺血导致的水迷宫逃避潜伏期(s)延长(32.4±14.3、10.3±11.1与19.2±9.6;F=35.84,P＜0.01).海马CA1区ERK1/2磷酸化水平在孕酮给药后的12 ～48 h明显增强,96 h恢复基线.核内ERK1/2磷酸化水平在孕酮给药后2h增加,并持续到48 h.孕酮增加胞质ERK1/2及胞核内ERK1/2磷酸化的水平能被RU486阻断.结论 孕酮预处理对缺血引起的海马CA1区神经元死亡有保护作用,并能改善空间记忆功能;孕酮预处理的神经保护作用有48 h以上的有效时间窗;在孕酮的神经保护作用依赖于孕酮受体介导的ERK1/2信号通路.     

支气管动脉化疗与化疗栓塞治疗中晚期肺癌(附214例报告)

目的　分析介入化疗及化疗栓塞对中晚期肺癌的疗效。方法　中晚期肺癌 2 1 4例 ,均经病理证实。先行支气管动脉造影确认为肿瘤供血动脉后 ,A组经导管注入化疗药物 ,B组在灌注化疗后经导管注入 5 -Fu载药微囊 ,C组在灌注化疗后经导管注入明胶海绵微粒。结果　A组有效率为 63 .8% ,B组有效率为 88.7% ,C组有效率为 82 .1 % ,3组间治疗效果有显著差异 (χ2 =1 3 .73 =2 ,P <0 .0 1 ) ,经 χ2 分割B组与C组无显著性差异 (χ2 =0 .57, =1 ,P >0 .449) ,A组与B组、C组间有显著性差异 (χ2 =1 3 .1 2 , =1 ,P <0 .0 0 1 )。结论　经支气管动脉介入化疗栓塞比单纯介入化疗对中晚期肺癌具有更好的疗效     

子宫平滑肌瘤病经静脉延伸至右侧心腔的影像学诊断

目的 探讨子宫平滑肌瘤病经静脉延伸至右侧心腔的影像学特点及诊断。方法 对5例子宫平滑肌瘤病经静脉延伸至右侧心腔的病例进行回顾分析，5例均行胸部X线平片、超声心动图，3例行电子束CT(EBCT)检查，2例行MRI和DSA检查。结果 3例行EBCT检查者中2例诊断为子宫平滑肌瘤(肉瘤可能)，肿瘤经静脉延伸至右侧心腔并侵及肺动脉(1例病理诊断为子宫平滑肌瘤病，1例未手术)，另1例诊断为子宫平滑肌瘤经静脉延伸至右侧心腔(未手术)；2例行MR和DSA检查诊断为子宫平滑肌瘤经静脉延伸至右侧心腔。5例患者中3例病理诊断为平滑肌瘤病。结论 子宫平滑肌肿瘤可以经静脉延伸至右侧心腔，罕见，称为子宫平滑肌瘤病，临床有一定特点。CT、MRI、DSA有相应的征象，影像学表现常呈生物学恶性征象，但积极手术治疗仍可得到良好临床效果。     

高血压家族史对原发性高血压左室形态的影响

 目的 利用超声心动图技术检测有家族史与无家族史高血压患者左室形态变化,为高血压的临床防治和早期诊断提供依据.方法 对92例有家族史高血压患者和97例无家族史高血压患者应用超声心动图测定左室舒张末期内径(LVIDd)、室间隔厚度(IVST)及左室后壁厚度(LPWT),并计算左室重量指数(LVMI)及相对室壁厚度(RWT).结果 有家族史的高血压患者LVIDd、IVST、LPWT、LVMI普遍比无家族史患者大.结论 家族史对左室形态具有一定影响,在向心性肥厚型和离心性肥厚型中表现较明显.