14-3-3σ调控p27抑制Rat1-Akt细胞增殖

目的： 研究腺病毒介导14-3-3·σ（Ad-14-3-3·σ）对Akt过表达Rat1-Akt细胞增殖的影响，并探讨其作用是否通过调控p27而实现。 方法： 通过5-溴-2′脱氧尿嘧啶（BrdU）实验检测Ad-14-3-3·σ对Rat1-Akt细胞增殖的影响，并通过激酶分析法和免疫荧光实验探讨Ad-14-3-3·σ对p27磷酸化水平及其在细胞内定位的影响。 结果： Ad-14-3-3σ转染的细胞BrdU阳性率（45%）低于PBS处理组（100%）或Ad-β-gal转染的对照组细胞（98%）。14-3-3σ可降低磷酸化p27的水平和减少Akt介导的p27在胞浆中的定位。 结论： 转染14-3-3σ基因能抑制Akt过表达细胞株Rat1-Akt增殖，14-3-3σ通过降低Akt激酶磷酸化p27的活性，阻断Akt介导的p27胞浆错位，从而发挥其抑制Rat1-Akt细胞增殖。     

抗人喉癌/抗VEGF双功能抗体制备及应用研究

目的：研制抗人喉癌／抗血管内皮因子（VEGF）双功能克隆抗体，用于喉癌抗血管生成治疗。方法：采用二次杂交瘤技术制备抗人喉癌／抗VEGF双功能抗体。经酶联免疫吸附试验法和SP法检测喉癌及癌前病患者血清及癌组织中VEGF的含量表达。结果：获得6株分泌抗人喉癌／抗VEGF双功能抗体的杂交瘤，经免疫组化证实与喉癌细胞特异性结合率为93％，而与血管内皮细胞结合率为89％。血清中VEGF含量表达，喉癌组与癌前病组及正常对照组相比差异均显著。IgG亚型鉴定为IgG2aBSAb抗体效价为1：25 600倍（ELISA法）。结论：二次杂交瘤法制备的双功能抗体具有均匀性、可控性、效价高、稳定性好，可用于喉癌抗血管生成治疗，动态检测可作为判断喉癌预后的客观指标。     

八肽胆囊收缩素对TNF-α诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364 IL-6的作用及其可能的分子机制(英文)

目的: 观察硫酸化八肽胆囊收缩素（sCCK-8）对TNF-α诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364 IL-6 mRNA 表达及核因子NF-κB的影响及其可能的受体机制。方法: 大鼠滑膜细胞株RSC-364经TNF-α(10　μg/L)、sCCK-8(10^-8-10^-6 mol/L)、CCK受体拮抗剂丙谷胺（2 mg/L）及溶剂单独或联合孵育3 h，用RT-PCR检测细胞IL-6、CCK-AR及CCK-BR mRNA的表达，孵育1 h，用电泳迁移率检测NF-κB活性，孵育30 min，用Western blotting检测胞浆IκB蛋白表达。结果: RSC-364细胞固有表达CCK-A/B受体，sCCK-8（10^-8-10^-6 mol/L）使IL-6、CCK-AR和CCK-BR mRNA表达进一步增高，明显增加TNF-α诱导的NF-κB活性，降低胞浆中IκB蛋白水平，并可被丙谷胺所拮抗。结论: sCCK-8通过NF-κB途径上调TNF-α诱导的大鼠滑膜细胞IL-6 mRNA表达，此作用可能通过滑膜细胞上的CCK受体实现，提示CCK-8在类风湿性关节炎（RA）发病过程中可能具有调控作用。     

卵巢低反应者体外受精-胚胎移植的临床结局分析

目的评估首次体外受精-胚胎移植时表现为卵巢低反应的患者接受再次体外受精-胚胎移植治疗的实际意义和调整临床处理过程的价值。方法回顾性分析2004年1月至12月间在北京大学第三医院生殖中心进行体外受精-胚胎移植的206个卵巢低反应病例,共288个周期的临床资料。结果206例卵巢低反应病例首次IVF-ET时临床妊娠率为22%。其中82例接受了再次IVF-ET,临床妊娠率为40.6%,高于首次IVF-ET,经统计学检验差异有显著性(P<0.05),再次IVF-ET的E2峰值,取卵数以及移植胚胎数均高于首次IVF-ET,经统计学检验差异有显著性(P<0.05)。结论首次IVF-ET卵巢低反应的患者经过调整促排卵方案,接受再次IVF-ET时临床妊娠率有所提高。     

人参二醇组皂甙及游泳训练对大鼠股四头肌α-肌动蛋白mRNA表达的影响

目的:观察大鼠7周大负荷游泳训练及人参二醇组皂甙(PDS)对大鼠股四头肌α-肌动蛋白mRNA表达的影响。方法:采用Northernblot分析7周大负荷游泳训练后恢复期大鼠股四头肌α-肌动蛋白mRNA表达水平及PDS对其影响。结果:α-肌动蛋白mRNA杂交信号的扫描积分光密度值(A),运动·盐水组较安静组略强;运动·PDS,扫描积分光密度值(A)显著强于运动·盐水组和安静组,运动·甲睾组与运动·盐水组表达无明显差异。结论:PDS可提高长期耐力运动大鼠股四头肌α-肌动蛋白mRNA表达,从而提高耐力运动能力;长期应用外源性雄激素对耐力训练大鼠股四头肌α-肌动蛋白无明显提高,这可能与外源睾酮对内源性睾酮分泌的抑制有关。     

The kyphoscoliotic type of Ehlers-Danlos syndrome (type VI): differential effects on the hydroxylation of lysine in collagens I and II revealed by analysis of cross-linked telopeptides from urine

The kyphoscoliotic type of Ehlers-Danlos syndrome (EDS type VIA) (OMIM 225400) is an autosomal recessive connective tissue disorder that results from mutations in the lysyl hydroxylase 1 gene (PLOD1) causing underhydroxylation of lysine residues in tissue collagens, particularly of skin. Previous studies have shown that the pool of collagen cross-linking amino acids, hydroxylysyl pyridinoline (HP) and lysyl pyridinoline (LP) excreted in urine has an abnormally low HP/LP ratio, which is diagnostic of the condition. Here we isolated cross-linked peptides containing these residues from the urine of a child with EDS VIA homozygous for a mutation that results in a stop codon and effective null expression of PLOD1 enzyme activity. Peptides that had originated from bone type I collagen and cartilage type II collagen were identified. A cross-linked N-telopeptide fraction that is derived from bone type I collagen contained only LP, no HP, which means that the helical lysines at residues 930 of alpha 1(I) and 933 of alpha 2(I) of the collagen triple-helix had not been hydroxylated. The equivalent peptide fraction from a normal child's urine gave a ratio of HP to LP of 1.5:1 typical for normal bone collagen. A second cross-linked peptide that is derived from the C-telopeptide domain of cartilage type II collagen showed both HP and LP in a 2:1 ratio, compared with 18:1 for the equivalent peptide from a normal child's urine. The results show that in EDS VIA, bone type I collagen is more markedly underhydroxylated than cartilage type II collagen, at least at those helical sites that form cross-links. The residual fraction of HP found in the urine of EDS VI patients therefore appears to be contributed in significant part by the degradation products of cartilage. Since PLOD1 is null, other PLOD genes must be responsible for the helical hydroxylation activity that results in HP. The presented approach of analyzing urinary cross-linked C-telopeptide fragments of type II collagen may allow the detection of chondrodysplasias due to genetic defects in lysyl hydroxylase isoforms active in cartilage.     

抗人肝癌单链抗体的基因克隆和分泌型表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ技术，从分泌抗人肝癌单克隆抗体的杂交瘤细胞ＨＡｂ１８中，扩增出抗体ＶＨ和ＶＬ连接肽基因，将ＶＨ和ＶＬ连接成ＳｃＦｖ基因，并进行序列测定，结果表明，ＶＨ，ＶＬ，ｌｉｎｋｅｒ拼接正确，基因全长为７２６ｂｐ。用噬菌粒表达载体ｐＣＡＮＴＡＢ ５Ｅ在大肠杆菌中表达了可溶性的ＳcＦｖ融合蛋白，经流式细胞仪分析表达产物可特异地与肝癌细胞结合，而不与正常肝细胞及胃癌细胞结合。     

携带hIL-2cDNA的逆转录病毒载体的构建及其在人肝癌细胞中的特异表达研究

将人白细胞介素２（ｈＩＬ-２）ｃＤＮＡ克隆到逆转录病毒载体ＭＮＳＭ的ＰＬ位点　，分别构建了转录受ＳＶ４０早期启动子和人甲胎蛋白增强子调控的重组逆转录病毒载体ＭＮＳＩ和ＭＮＳＩＡ。用脂质体转染法将ＭＮＳＩ和ＭＮＳＩＡ分别转导ＰＡ３１７包装细胞，测质粒转染率为（５～２０）×１０~(－３)克隆／μｇＤＮＡ·１０~６细胞，病毒感染率为（５．４～４５０）×１０~４ＣＦＵ／ｍｌ。重组病毒在４μｇ／ｍｌ ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ存在条件下感染人肝癌细胞、肾癌细胞和黑色素瘤细胞，Ｎｅｏ~Ｒ克隆经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析证明ｈＩＬ－２ｃＤＮＡ转入人肿瘤细胞并整合，　Ｒ　ＮＡ斑点杂交及ＩＬ－２活性表达分析证明，人甲胎蛋白增强子可促进异源启动子启动ｈＩＬ－２ｃＤ－ＮＡ在合成甲胎蛋白的人肝癌细胞中高效特异转录和表达。该研究对肝癌特异性免疫增强基因治疗有重要意义。     

基于形态学的均值平移算法的神经元干细胞图像的自动分割

在神经元干细胞的图像分析中,准确快速的图像分割是干细胞分化增值自动追踪系统的基础。为了准确地分割低对比度的灰度神经元干细胞图像,本研究提出一种基于形态学运算和均值平移算法的神经元干细胞分割方法,称其为形态学的均值平移算法。此算法可以快速地获得任意形状细胞的图像,并且能检测到图像中多连接边缘不封闭的细胞。将此方法应用于神经元干细胞序列图像分割中并且将其与门限分割、水线分割和活动轮廓进行对比。实验结果证明,与其它的方法相比,此方法获得的细胞分割形状更接近于真实细胞的形状,并且能获得或接近于原始图像中准确的独立细胞数目。此方法可以获得正确的分割结果,为进一步图像处理奠定了良好的基础。