异基因造血干细胞移植治疗恶性血液病的效果

目的探讨异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)治疗恶性血液病的效果。方法10例恶性血液病病人进行Allo-HSCT治疗,供者中9例为HLA完全相合的同胞,1例为HLA半相合的同胞。预处理方案包括:马利兰-环磷酰胺、马法兰-足叶乙甙-阿糖胞苷-环磷酰胺、氟达拉滨-阿糖胞苷-马法兰-环磷酰胺、卡莫司汀-足叶乙甙-阿糖胞苷-环磷酰胺。结果全部病人均获得造血重建,中性粒细胞≥0.5×109/L、血小板>20×109/L的中位时间分别是14.51、8.3 d;5例发生急性移植物抗宿主病(GVHD),6例发生慢性GVHD,4例血型不合者均于移植后3个月内血型转为供者型。10例病人28 d时DNA图谱均转为供者型。随访4~23个月尚无复发及死亡病例。结论Allo-HSCT虽然会发生GVHD等严重并发症,但仍然是治疗恶性血液病的最有效的方法。HLA半相合同胞Allo-HSCT的开展解决了供者来源少的难题。     

山茱萸多糖对乳腺癌MCF-7细胞的影响及其通过调控AMPK/SIRT1通路的作用机制研究

目的：探讨山茱萸多糖对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响,并通过观察山茱萸多糖对腺苷酸活化蛋白激酶/沉默信息调节因子1（ AMPK/SIRT1）通路的调控作用探索其可能的作用机制。方法：体外培养MCF-7细胞,随机分为对照组（正常培养基培养）和山茱萸多糖低、中、高剂量组（分别予12.5、25.0、50.0 mg/mL山茱萸多糖培养）以及山茱萸多糖高剂量+AMPK激活剂（ AICAR）组（予50.0 mg/mL山茱萸多糖+2.0 mmol/L AICAR培养）,采用平板克隆形成试验检测MCF-7细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,划痕试验检测细胞迁移情况,Transwell法检测细胞侵袭情况,蛋白免疫印迹法（ Western blot法）检测各组细胞AMPK、磷酸化AMPK（ p-AMPK）、SIRT1蛋白相对表达量。选择BALB/c裸鼠,建立荷瘤裸鼠模型,随机分为对照组（灌胃生理盐水）与山茱萸多糖组（每日灌胃800 mg/kg山茱萸多糖溶液）,每组6只,连续灌胃28 d。每7 d测量2组裸鼠肿瘤体积并做组间比较,灌胃结束后处死各组裸鼠取移植瘤,采用免疫组化法检测各组裸鼠移植瘤组织中AMPK、p-AMPK、SIRT1蛋白表达。结果：体外细胞学实验结果表明,山茱萸多糖低、中、高剂量组MCF-7细胞集落形成数明显低于对照组（ P＜ 0.05）,细胞凋亡率明显高于对照组（ P＜ 0.05）,细胞划痕愈合率、细胞侵袭数明显低于对照组（ P＜ 0.05）,细胞中p-AMPK、SIRT1蛋白表达明显低于对照组（ P＜ 0.05） ;山茱萸多糖高剂量+AICAR组MCF-7细胞集落形成数明显高于山茱萸多糖高剂量组（ P＜ 0.05）,细胞凋亡率明显低于山茱萸多糖高剂量组（ P＜ 0.05）,细胞划痕愈合率、细胞侵袭数明显高于山茱萸多糖高剂量组（ P＜ 0.05）,细胞中p-AMPK、SIRT1蛋白表达明显高于山茱萸多糖高剂量组（ P＜ 0.05） ;山茱萸多糖各剂量对上述指标的影响表现出显著的剂量依赖性（ P＜ 0.05）。荷瘤裸鼠实验结果表明,移植第14、21、28、35 d山茱萸多糖组裸鼠移植瘤体积显著小于对照组（ P＜ 0.05） ;干预结束后,山茱萸多糖组裸鼠移植瘤质量与瘤体组织p-AMPK、SIRT1蛋白阳性表达率均明显低于对照组（ P＜ 0.05）,AMPK蛋白阳性表达率与对照组比较差异无统计学意义（ P＞ 0.05）。结论：山茱萸多糖对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭有一定的抑制作用,并可促进MCF-7细胞凋亡,能抑制裸鼠移植瘤生长,其可能的机制为抑制AMPK/SIRT1通路激活。     

E-Cad、G-17、HER-2与胃癌术后复发风险的相关性

目的探讨血清上皮型钙黏蛋白(E-Cad)、胃泌素-17(G-17)水平和肿瘤组织中人类表皮生长因子受体2(HER-2)表达与胃癌患者术后复发风险的相关性。方法选取行胃癌根治术治疗的胃癌患者92例,检测术前血清E-Cad、G-17水平和肿瘤组织HER-2的表达。对所有患者随访5年,以胃癌复发或随访满5年为随访终点。以胃良性病变患者92例作为对照组。收集所有胃癌患者的临床资料(性别、年龄、临床分期、分化程度、复发情况等)。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估各项指标判断胃癌复发的效能。采用Cox回归分析评估影响胃癌患者复发的危险因素。采用Kaplan-Meier生存曲线评估胃癌患者的5年复发情况。结果胃癌组血清G-17水平和肿瘤组织HER-2阳性率均显著高于对照组(P=0.000),血清E-Cad水平显著低于对照组(P=0.000)。血清E-Cad、G-17水平及肿瘤组织HER-2阳性率与胃癌的TNM分期、分化情况及是否复发有关(P<0.05),与性别无关(P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,E-Cad、G-17、HER-2单项检测与联合检测判断胃癌复发的曲线下面积(AUC...     

人工锌指蛋白真核表达载体的构建及表达

目的 构建人工锌指蛋白ZFP基因的真核表达载体,检测其在真核细胞的表达情况,从而探讨人工锌指蛋白作为人工转录因子DNA结合域的可能性.方法 全基因合成人工锌指蛋白(putative zinc finger protein,ZFP)的核酸序列并克隆入pEGFP-N1及pIRES2-EGFP真核表达载体中,构建重组质粒pEGFP-N1/ZFP及pIRES2-EGFP/ZFP-Flag,通过酶切、菌落PCR及测序来鉴定重组载体的正确性.脂质体DOTAP体外转染重组质粒于COS-7细胞中,用荧光显微镜、RT-PCR、Western blot方法鉴定ZFP在该细胞中的表达.结果 正确构建了pEGFP-N1/ZFP、pIRES2-EGFP/ZFP-flag重组表达质粒,并且在COS-7细胞中成功进行了人工锌指蛋白ZFP的表达.结论 采用生物信息学手段获得的假定的锌指蛋白基因序列可以在真核细胞内正常表达.     

鲍曼不动杆菌对抗生素的耐药性监测

目的调查鲍曼不动杆菌（acinetobacter baumannii,Ab）对16种抗生素的耐药情况。方法收集我院2005年1月至2006年6月分离的288株鲍曼不动杆菌,其中社区感染株（community acquired infection,CAI）237株,医院感染株（hospital acquired infection,HAI）51株。按《全国检验技术操作规程》要求操作,用细菌鉴定仪鉴定菌种,采用K-B法做药敏试验。结果Ab对几乎所有半合成青霉素、头孢菌素、碳青霉烯类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类均具有较高水平的耐药性,对其他酶抑制剂复合制剂亦不敏感。对亚胺培南敏感率最高为68.5%,其余抗生素的敏感率都〈54.5%。绝大多数病原菌医院内感染株的耐药率高于社区感染株,两者之间差别有统计学意义（P〈0.01）。结论近期我院经验性治疗首选阿莫西林/舒巴坦＋左氧氛沙星＋阿米卡星或SMZCO组合治疗方案。     

运用输送盘牵张成骨术重建猴下颌髁突的实验研究

目的研究在猴颞下颌关节（TMJ）缺损动物模型上运用输送盘牵张成骨术重建髁突的可行性及其整复效果。方法选取6只成年恒河猴,手术截除其双侧关节髁突与关节盘,在下颌升支部行“L”形骨切开术,形成骨输送盘,并安置自行研制的牵张器。按每次0.4 mm,每次间隔12 h的牵张速率向上牵引输送盘至关节窝。牵张结束后第4、12、24周各处死2只动物。通过影像学分析和组织学检查评价输送盘改建与牵张间隙内新骨生成情况。以术中切除的髁突作为正常对照组。结果术后所有动物都有不同程度的咬合错乱,牵张结束后咬合基本恢复正常。骨输送盘形态基本接近正常髁突,其下方可见大量软骨细胞;牵张间隙内新骨生成良好。结论输送盘牵张成骨术可以重建一个形态和功能都基本接近正常的髁突,这种技术可以作为一种整复TMJ缺损的新方法。     

基质细胞衍生因子在不同的急性髓系白血病细胞系的迁移、黏附和细胞凋亡中的生物学作用

本研究探讨基质细胞衍生因子（stromal cell derived factor 1，SDF-1）在急性髓系白血病（AML）细胞的迁移、黏附和细胞凋亡中的生物学作用及有关的信号转导。采用流式细胞术检测AML的细胞系KG1a、ML1、U937细胞表面标记物的表达；以免疫荧光技术检测SDF-1对肿瘤细胞膜表面分子的影响；通过微孔细胞转移实验检测SDF-1对AML细胞的趋化作用及磷脂酰肌醇3激酶（P13K）在趋化过程中的作用；用蛋白免疫印记技术检测P13K信号途径有关的细胞凋亡分子BCL—XL在SDF-1活化此途径后的变化。结果表明：3种AML细胞系不同程度表达CD34（KG1a=95．6％、ML1=4．6％、U937=4．8％）、CD45（KG1a=98．3％、U937=97．5％、NIL1=17．8％）、CXCR4（ML1=85．4％、U937=43.6％、KG1a=3．8％）、ICAM（KG1a=75．8％、U937=41．8％、ML1：46.3％）。SDF-1能促进CXCR4高表达的ML1和U937细胞在基质细胞的黏附并能够诱导此类细胞的迁移，上述作用被G蛋白抑制剂pertussistoxin（PTX）、P13K抑制剂渥曼青霉素（wortmannin）明显抑制；而对CXCR4低表达的KG1a细胞则无上述作用。SDF通过此途径还促进肿瘤细胞存活；此作用同样可被P13K抑制剂明显抑制，加用wortman—nin后促肿瘤细胞调亡显著增加。蛋白免疫印记检测phospho—AKT、BCL—XL显示，在SDF组明显增强，加用PTX、wortmannin组则减弱。结论：SDF-1能触发CXCR4高表达的ML1和U937细胞的极化形态的建立及诱导黏附分子的重新分布，从而通过P13K信号途径促进此类AML细胞的迁移，减少肿瘤细胞的调亡，而对CXCR4低表达的KG1a细胞则无上述作用。上述作用可以被P13K信号途径阻断剂和G蛋白抑制剂所阻断。     

Phoenix-100全自动微生物鉴定/药敏系统检测肠球菌方法评估

目的用Phoen ix-100全自动微生物鉴定/药敏系统(简称Phoen ix-100系统)检测肠球菌并评估此检测系统。方法收集50株临床分离肠球菌,用Phoen ix-100系统进行鉴定及药敏试验,通过与API鉴定系统、药敏纸片法和E-test法[筛选耐万古霉素肠球菌(VRE)]比较,对Phoen ix-100系统进行评估。结果与API鉴定系统相比,Phoen ix-100系统鉴定肠球菌的一致率为90.0%。与药敏纸片法相比,Phoen ix-100系统检测肠球菌对庆大霉素(筛选耐高浓度氨基糖苷类抗生素肠球菌)、氨苄西林、环丙沙星、红霉素、呋喃妥因、万古霉素和肽可霉素药敏结果的完全符合率分别为94.0%、94.0%、88.0%、94.0%、70.8%、64.0%和92.0%。与E-test法相比,Phoen ix-100系统筛选VRE的完全符合率为84.0%;未出现极大错误,大错误率为12.0%,小错误率为4.0%。结论用Phoen ix-100系统检测肠球菌是一种简便、快速和比较准确可靠的方法。     

IS256与医院感染表皮葡萄球菌耐氨基糖苷类抗菌药物的关系

目的了解医院感染表皮葡萄球菌对不同类型氨基糖苷类抗菌药物的敏感特征，分析插入序列（IS）256与表皮葡萄球菌耐氨基糖苷类抗菌药物的关系。方法收集2007年2月至2007年7月外科病区中引起医院感染的表皮葡萄球菌48株，利用纸片扩散法测定细菌对4种氨基糖苷类抗菌药物（庆大霉素、奈替米星、链霉素和阿米卡星）药敏特征；构建IS256特异性引物，利用聚合酶链反应（PCR）检测48株细菌中IS256分布状况。结果48株临床分离的表皮葡萄球菌对4种氨基糖苷类抗菌药物的药敏特征分别为：对庆大霉素的耐药率为69％，敏感率为31％；对奈替米星的耐药率为8％，敏感率为79％，中介率为13％；对链霉素的耐药率为42％，敏感率为35％，中介率为23％；对阿米卡星的耐药率为15％，敏感率为75％，中介率为10％。全部临床分离株中，有25株细菌检出IS256。在庆大霉素耐药菌株中，IS256检出率高达70％，与敏感菌相比差异具有统计学意义（P〈0．01）；而对其他3种抗菌药物耐药的菌株中，IS256的检出与耐药无明显相关性（P〉0．05）。结论表皮葡萄球菌临床分离株对氨基糖苷类抗菌药物存在不同程度耐药。IS256与表皮葡萄球菌对庆大霉素耐药密切相关。     

以市级统筹为基础提高医疗保险统筹层次的探索:以沈阳经济区的改革为例

提高统筹层次有利于提高医疗保险的公平和效率,也是深化医药卫生体制改革的发展要求。本研究以沈阳经济区的改革为例,阐述了提高医疗保险统筹层次的必要性,分析了以市级统筹为基础提高统筹层次对于解决医疗保障差异的作用,同时论证了沈阳经济区以市级统筹为基础提高统筹层次各项任务的逻辑关系,并提出了开展提高医疗保险统筹层次的政策建议。