婴儿双歧杆菌/胞嘧啶脱氨酶肿瘤靶向性基因治疗系统的构建(英文)

目的构建婴儿双歧杆菌/胞嘧啶脱氨酶靶向性基因治疗系统。方法 PCR 扩增 CD 基因,EcoR Ⅰ,BamH Ⅰ对 CD 基因和 pGEX-1LamdaT 质粒同时进行双酶切,获得4.9 kb、1.3 kh 两个 DNA 片段。T4 DNA 连接酶连接这两个片段构建重组的CD/pGEX-1LamdaT 质粒,然后用电穿孔法将重组质粒转染婴儿双歧杆菌。从阳性转染的婴儿双歧杆菌中提取重组质粒,双酶切后检测切取片段长度,采用 Sanger 双脱氧链终止法对提取的重组质粒中的插入片段进行测序。结果从阳性转染的婴儿双歧杆菌中获得了6.2 kb大小的重组质粒,该质粒经双酶切后,得到了4.9 kb 和1.3 kb 两个长度的片段,其长度分别与 pGEX-1LambdaT 及 CD 基因的长度相同。测序结果显示,提取的重组质粒中插入的基因片段全长及核苷酸序列与 CD 基因完全相同。结论外源性 CD 基因被准确插入 pGEX-1LambdaT 质粒并转入婴儿双歧杆菌中,婴儿双歧杆菌/胞嘧啶脱氨酶靶向性基因治疗系统被成功构建。     

塞来昔布对人鼻咽癌CNE-2细胞生长抑制及放射增敏研究

Objective To investigate the growth inhibition and radiosensitization of Celecoxib in hu-man nasopharyngeal carcinoma cell line CNE-2. Methods CNE-2 growth inhibition by Celecoxib was eval-uated by MTT method. Apoptosis-related changes in morphology were observed by transmission electron mi-croscopy (TEM). Cell cycle distribution and apoptosis rate were measured by flowcytometry (FCM). The ex-pression of COX-2 protein was observed by SP method after the treatment of Celecoxib. Cells were randomly planted into four groups: irradiation control(Ci), drug group(Cd), irradiation group(R), and Celecoxib plus irradiation group(D+R). Single irradiation of 2,4,6,8,and 10 Gy were administered for colonogenic assay. Cell cycle distribution and apoptosis rate were analyzed at 6 Gy irradiation. Results The growth of CNE-2 cell was inhibited by celecoxib in a dose-and time-dependent manner, the IC50 was 80 μmol/L After the treatment, cell ratio of GO and G, phases was increased (47.03±2.76 vs 56.17±1.95, t=4.68, P= 0.010), whereas the ratio of S and G2/M phases was decreased (33.07±1.86 vs 24.87±1.76, t=5.54, P = 0.010; 19.30±0.53: 17.73±0.83, t=2.75, P=0.050), and the apoptosis rate was increased (1.57±0.47:10.47±0.31, t = 27.39, P = 0.000) in a dose-dependent manner. Apoptosis with nuclear chromatin condensation, fragmentation and cell shrinkage was found by TEM. SP method showed that Celeib decreased COX-2 expression (17.48±0.34 vs 12.82±0.51,t=13.20,P =0.00). The sensitivity ratio(D0) was 1.15. FCM showed that the percentage of cells in G2/M phase was significanty more in R and D+R groups than in Ci and Cd groups (68.00±1.65,54.27±5.74,17.60±0.80,14.86±1.23, t=47.70,P=0.000; t=11.63, P=0.000), and also significantly different between R group and D + R group (t=3.99, P= 0.020). The apoptosis rate was higher in R and D + R groups than Ci and Cd groups(4.83±0.97,9.50± 1.35,1.33±0.86 and 2.28±0.42,t=4.67,P=0.010;t=8.81, P=0.000), D + R group than R group(t =4.85,P=0.010). Conclusions Celecoxib can markedly inhibit the growth and induce apoptosis in CNE-2 cells,which may depend on COX-2 pathway. Celeeoxib potently enhances the radiosensitivity of CNE-2 cells,which may due to the repair inhibit of radiation-induced DNA damage, inhibit of cell proliferation,and enhancement of cell apoptosis after irradiation.     

心安颗粒中苦参碱含量测定方法的研究

目的:对心安颗粒中指标成分苦参碱含量测定方法进行研究。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱 Phenomenex Luna C_(18)(4.6mm×150mm,5μm);流动相为甲醇-水-三乙胺(50∶50∶0.04);流速1.0mL·min~(-1),检测波长220nm。结果:本法平均回收率97.00%(n=6)。结论:建立了一种操作简便、重复性良好的高效液相色谱法测定心安颗粒中苦参碱,该法可用于心安颗粒质量控制。     

川芎配方颗粒剂的制备工艺研究

目的　通过考察川芎配方颗粒剂的含量稳定性,确定最佳制剂工艺。方法　将制剂置于恒温恒湿条件下,按规定时间取样,考察主要有效成分含量。结果　制剂Ⅱ含量稳定性优于制剂Ⅰ。结论　将川芎挥发油制成β环糊精包合物,稳定性好,可推广至其它中药配方颗粒剂的制备。     

4-[4-(吡啶-3-基)咪唑-1-基]丁胺的合成

以3-乙酰基吡啶为起始原料,经肟化、磺酰化、氧化、环合、还原得到3-(咪唑-4-基)吡啶,再经与N-(4-溴丁基)邻苯二甲酰亚胺缩合及肼解等反应制得抗菌剂泰利霉素的特定侧链化合物4-[4-(吡啶-3-基)咪唑-1-基]丁胺,总收率24%.     

COX基因多态性与缺血性卒中的相关性研究

【摘要】 目的 探讨环氧合酶(COX)代谢通路基因多态性及其与缺血性卒中发病率的关系。方法 将2013年2月~2015年11月在德阳市人民医院和温州医科大学第三附属医院神经内科住院经头颅CT和MRI检查确诊的299例急性缺血性卒中患者,根据彩超结果分为颈动脉易损斑块组（VP）94例、稳定斑块组（SP）74例和无斑块组（NP）131例;同时再分为颈动脉内膜增厚组（IT）108例和非内膜增厚组（NT）191例。使用聚合酶链反应和质谱分析测定基因多态性,包括前列腺素合酶1(PTGS1 rs1236913)、前列腺素H合酶2(PTGS2 rs689466)、血栓素A2合酶(TBXAS1 rs2267679、rs41708、rs194149)、前列腺素E合酶(PTGES2 rs6478818)、环前列腺素合成酶(PTGIS rs5602、rs5629)。结果 在易损斑块组和无斑块组之间TBXAS1 rs194149 GG基因型(P=00281),PTGIS rs5602 CT基因型(P=00319)存在显著差异。内膜增厚组和非内膜增厚组之间PTGS2 rs689466 GG基因型(P=00216)显示显著差异。多元回归分析显示,PTGIS的AA基因型(P=00308,OR:0275,95%CI:0079～0955)和PTGS2的AG+ GG基因型(P=00065,OR:2162,95%CI:1232～3795)是内膜增厚的破坏性因素。结论 COX的单核苷酸多态性(SNP)与脑梗死的发病率存在相关性,PTGIS和PTGS2基因多态性与内膜增厚脑卒中患者相关。     

PAX2在肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的 揭示核转录因子（PAX2）在肾小管上皮细胞转分化过程中的可能作用。方法 38例病例组肾组织按间质病变程度分为轻、中、重3组,其中轻度病变15例,中度病变11例,重度病变12例;对照组为5例外伤后肾切除组织。采用免疫组化法评定肾组织PAX2的表达率和肾小管上皮细胞转分化率。对肾间质病变轻、中、重3组组内肾小管上皮细胞转分化率、PAX2表达率作方差分析,对PAX2表达量与肾小管上皮细胞转分化率作相关分析。结果 正常对照组肾小管上皮细胞只表达角蛋白（CK）,不表达平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及PAX2。病例组肾间质病变轻、中、重3组肾小管上皮细胞均不同程度表达α-SMA及PAX2;不同肾间质病变组,肾小管上皮细胞转分化率及PAX2表达量差异均有统计学意义。相关分析表明,PAX2表达量和肾小管上皮细胞转分化率呈正相关（r=0．886,P〈0．05）。结论 PAX2回归表达可能导致肾小管上皮细胞转分化。     

儿童哮喘过敏原检测及临床意义

目的 探讨皮肤过敏原点刺试验、血清过敏原检测在儿童哮喘病因诊断、治疗的临床意义。方法 应用粉尘螨及屋尘螨过敏原对121例哮喘患儿及111例对照组儿童进行皮肤点刺试验,其中59例哮喘患儿应用免疫条带印记法进行血清过敏原检测。结果 ①121例哮喘患儿尘螨过敏原皮肤点刺试验总阳性率为28．10％,高于对照组（P〈0．05）。②粉尘螨过敏原阳性33例（27．27％）;屋尘螨过敏原阳性32例（26．45％）。③粉尘螨及屋尘螨过敏原皮肤点刺试验结果与哮喘急性发作严重程度有关。④59例哮喘患儿血清过敏原检测阳性46例（77．97％）,其中猫毛26例（44．07％）。狗毛23例（38．98％）,粉尘螨13例（22．03％）,屋尘螨12例（20.34％）,海鲜组合10例（16．95％）。⑤皮肤点刺试验与血清过敏原检测的尘螨过敏原检出率,差异无统计学意义。结论 皮肤点刺试验可作为儿童哮喘过敏原检测优先选用的方法。     

MR扩散加权像在急性病毒性肝炎中的初步应用

目的探讨MR扩散加权像在急性病毒性肝炎患者中对肝功能评价的价值。方法健康志愿者20例作为对照组,急性病毒性肝炎（AVH）患者56例（其中肝功能正常组26例,肝功能异常组30例）作为研究组。分别测量各例的表观扩散系数（ADC）并与转氨酶对比分析。结果在扩散敏感系数（b值）取200、400、600 s/mm2时肝功能正常组及异常组的ADC值均高于对照组,差异有统计学意义。肝功能异常组的ADC值与转氨酶呈正相关。结论在急性病毒性肝炎患者中,DWI是一种具有潜力无创的评价肝功能的重要手段,有待于进一步的探索和提高。     

血脂相关指标测定方法的比较研究

目的对比研究肝素抗凝、方法选择等因素对血脂指标测定值的影响。方法⑴随机抽样体检者130人,采血后离心分离血浆(肝素抗凝)和血清。按试剂盒方法(直接法),分别测定两组的甘油三酯(TG),总胆固醇(TC),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),载脂蛋白A(ApoA),载脂蛋白B(ApoB)等指标,并对两组差异进行统计性分析。⑵随机抽样心血管患者320人,按直接法测定血清TG,TC,LDL-C,HDLC,ApoA,ApoB等指标。将患者分为TG<1.5mmol/L(n=170),1.5≤TG<2.5mmol/L(n=96),2.5≤TG<3.5mmol/L(n=29),3.5≤TG<4.5mmol/L(n=10),TG≥4.5mmol/L(n=15)等5组,根据Friedewald、Planella公式,分别计算两组的LDL-C值,并与直接法比较统计学差异。结果⑴血浆、血清测定指标中,TG分别为2.63±2.03mmol/L,2.56±2.06mmol/L,P<0.05;TC,LDL-C,HDLC,ApoA,ApoB相互比较,P>0.05。⑵Friedewald公式所得的5组LDL-C值与直接法比较,P<0.01;Planella公式所得的5组LDL-C值与直接法比较,P>0.1,P<0.01,P<0.002,P<0.01,P>0.05。结论直接法测定TC,LDL-C,HDLC,ApoA,ApoB时,可用肝素抗凝的血浆替代血清,但直接法测定TG及公式法计算LDL-C时不能替代;Friedewald、Planella公式计算LDL-C误差较大,TG<1.5mmol/L时可采用Planella公式,TG>1.5mmol/L时建议采用直接法。