抗早孕因子单克隆抗体的制备与鉴定

目的建立分泌抗EPF(Early pregnancy factor,早孕因子)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,纯化单抗并鉴定.方法用本实验室已纯化的早孕和肿瘤源性EPF作为抗原刺激Balb/c小鼠,用免疫后的小鼠脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞(NS-1)融合,经4次克隆化,获得可稳定分泌抗EPF单克隆抗体的细胞株,注入Balb/c小鼠腹腔制备腹水型单抗,Protein-A亲和层析纯化,SDS电泳和Western-blot等方法分析纯化结果.结果融合后获得一株稳定分泌抗EPF抗体的细胞株(C3D11),克隆化后,获得稳定分泌抗EPF单克隆抗体的细胞株,将增殖后的细胞注射Balb/c小鼠腹腔获得腹水型单抗,以亲和层析法纯化,SDS-PAGE分析显示纯化后去掉了大部分杂蛋白,免疫印迹分析抗体纯度较高,与抗原匹配性良好.结论本研究制备的EPF单克隆抗体为特异性抗EPF抗体.     

人白细胞介素12在哺乳动物细胞中的稳定表达及其生物活性的研究

目的采用遗传基因工程方法获得具有生物活性的人白细胞介素12,探索其治疗肿瘤和慢性肝炎的可行性。方法采用已克隆的国人IL-12基因序列,利用内部核糖体切入位点(IRES)完成IL-12P35、P40双亚基共表达载体的构建,通过转染CHODHFR缺陷细胞,双抗夹心ELISA法筛选阳性克隆,MTX加压扩增,PCR检测其基因整合,T淋巴细胞增殖和诱生γ干扰素实验检测其生物活性。结果获得了稳定高效表达人IL-12的工程细胞系,表达产物为70×103左右的糖蛋白。结论本研究得到的基因重组人IL-12具有良好的生物活性,有强的诱导产生γ干扰素的能力和诱导活化T淋巴细胞增殖能力。     

肿瘤转移抑制基因nm23—H1 mRNA在乳腺癌中的转录表达

目的：探讨nm23—H1基因mRNA在乳腺患组织中的表达及其与临床的关系．方法:采用半定量RT—PCR方法，检测30例乳腺患组织nm23—H1的表达．结果:①淋巴结阳性的原发灶组织nm23—H1 mRNAA表达明显低于淋巴结阴性的原发灶组织，Ⅲ期乳腺患组织nm23—H1 mRNA水平较Ⅰ、Ⅱ期的明显低．②多因素分析发现淋巴结转移与nm23—H1 mRNA的表达有显著性相关．结论nm23—H1基因mRNA表达强度与淋巴结转移呈负相关．在乳胰患转移过程中，nm23—H1 mRNA起重要的作用。     

重组风疹病毒外膜蛋白E1的表达及其在血清学中的初步应用

目的 在大肠埃希菌中表达重组风疹病毒外膜蛋白E1,用其作为包被抗原,建立一种用于诊断风疹病毒感染的ELISA检测方法 .方法 通过基因重组的方式构建表达质粒并在大肠埃希菌中表达风疹病毒外膜蛋白E1,蛋白纯化后作为包被抗原,用ELISA的方法 检测世界卫生组织(WHO)的风疹检测质控血清以及来自广西桂林的未知血清样本.结果 采用WHO用于风疹检测的质控血清对所表达的重组抗原的抗原性进行鉴定,通过试验,特异性、敏感性均为100%.用表达的抗原对来自我国广西的200份未知血清样本进行风疹病毒外膜蛋白抗体的检测,阳性率为93%,与文献报道的我国其他地区风疹病毒抗体阳性率基本一致.结论 通过实验我们表达了具有良好抗原性的风疹病毒外膜蛋白E1,为进一步研究风疹病毒感染的实验室诊断技术奠定了基础.     

无望抑郁症状问卷(HDSQ)的中文版修订

目的：翻译和修订无望抑郁症状问卷，并测试中文版的信效度。方法：用翻译的无望抑郁症状问卷和Beck抑郁量表对大学生进行两次测试。结果：①修订的无望抑郁症状问卷中文版的探索性主成分分析显示，无望抑郁症状问卷由8个因子组成，累计贡献率为62．733％，因素负荷为0．548～0．937；②验证性因素分析显示，本问卷的8个因子可以合并成一个高阶因子，二阶因子模型是拟合度最优的模型；③各分量表与问卷总分的相关系数在0．524-0．810之间（P〈0.01），各分量表之间的相关系数在0．328～0．660之间（P〈0．01）；④本问卷内部一致性系数为0．8724，分半系数为0．7223，重测信度为0．8322。结论：修订的中文版无望抑郁症状问卷的信度和效度指标符合心理测量学的要求。可作为大学生的无望抑郁测量工具。     

细胞裂解法对单细胞PCR扩增效率的影响

目的研究细胞裂解法对单细胞PCR扩增效率的影响,寻求较好的细胞裂解方法.方法应用显微分离技术分离单个淋巴细胞,分别使用冻融变性和蛋白酶K裂解法处理单细胞,应用多重PCR同时扩增X染色体特异重复序列(DXZ1)和Y染色体特异重复序列(DYZ1)对单细胞进行性别诊断,比较其扩增效率.结果使用显微操作法获得80个男性淋巴细胞.采用冻融变性处理单细胞,40个淋巴细胞经多重PCR扩增后有32个产生DXZ1和DYZ1两条电泳带,正确率为80%.采用蛋白酶K裂解法,40个淋巴细胞经多重PCR扩增后均产生DXZ1和DYZ1两条电泳带,正确率为100%.两者的扩增效率有显著的差异性(χ2=6.81,P<0.01).结论 Rechitsky等的蛋白酶K裂解法比较简便,费时短,扩增效率高,适合细胞裂解及PCR扩增模板的制备.     

Expression of inducible nitric oxide synthase induced by lipid-associated membrane proteins of Ureaplasma urealyticum is regulated by nuclear factor κB-mediated mechanism in murine macrophages

U.urealyticumisthesmallestprokaryoticorgan ismcapableofself replication.Thetinymicroor ganismcouldbeisolatedfromurogenital,placen tasandtherespiratorytractsofpreterminfants.Moreover,U.urealyticuminfectionmaybein volvedinnon specificurethritis(NSU),prostati tis,postpartumfever,infertility,pelvicinflamma torydisease,neonatalpneumoniaandevenchronic lungdisease(CLD)[1].ItisknownthatU.urealyticumlackscellwallstructureandcontains abundantmembraneproteins,butitspathogenicity isstillunknownclearly.…     

表面磁性膜医用316L不锈钢支架的生物相容性

目的 对表面磁性膜血管内支架进行生物相容性研究,为该支架的临床应用提供实验依据.方法 通过溶血实验、动态凝血时间实验、急性全身毒性实验、皮内刺激实验、细胞毒性实验、热源实验、过敏实验、体内植入实验综合评价表面磁性膜血管内支架的生物相容性.结果 表面磁性膜血管内支架无溶血反应及凝血功能的改变,无急性全身毒性反应,无热源反应,支架材料中不存在致敏性物质;支架材料动物体内植入在初期有轻度的炎性反应,12周后炎性反应基本消失,未见炎性细胞浸润积聚现象.结论 表面磁性膜血管内支架具有良好的生物相容性,其应用于临床具有可行性和安全性.     

Effect of Gardenia extract ZG on the adsorption quantity of herpes simplex virus type 1 （HSV-1）

To observe the effect of Gardenia extract ZG on the adsorption quantity of herpes simplex virus type 1 (HSV-1) so as to explore the mechanism of its antiviral activity, fluorescein isothiocyanate (FITC) was used as the fluorescent probe to label viruses and heparin sodium was used as control. Meanwhile , the effect of Gardenia extract ZG on the adsorption quantity on the surface of Hep-2 cells was determined by flow cytometry. It was demonstrated that adsorption of HSV-1 on the surface of Hep-2 cells exhibited the character of saturation and specificity and heparin sodium could prevent attachment of viruses on these cells. These results are in accord with those reported previously. It was also proved that the manner of drug-use prior to adsorption or simultaneous use of drug and adsorption was better than adsorption prior to drug-use, and the inhibition rates of the former and latter manner were 84. 76% and 82.92% respectively. Three manners of drug-use with Gardenia extract ZG were all effective to reduce the adsorption quantity of viruses, especially the manner of simultaneous use of drug and adsorption with an adsorption inhibition rate of 68.46% . From the above observation, it is apparent that the mechanism of anti-viral activity of Gardenia extract ZG may be via several steps involved in the HSV-1 adsorption.