结节性甲状腺肿内非典型增生病变的克隆性和CK19表达临床意义分析

目的分析结节性甲状腺肿内非典型增生病变的克隆性,探讨高级别非典型增生与CK19表达和甲状腺癌的关系。方法收集2010-06-01-2011-06-30中国人民解放军第153中心医院(20例)和河北省邯郸市中心医院病理科(27例)的女性甲状腺疾病组织47例,包含9例乳头状癌、4例滤泡癌、12例滤泡型腺瘤和22例结节性甲状腺肿,利用巢式PCR技术对47例甲状腺疾病组织进行AR、PGK基因的多态性筛选。对有多态性的标本(包括9例乳头状癌、4例滤泡癌、7例滤泡型腺瘤和11例结节性甲状腺肿)应用激光显微切割获取肿瘤性病变和18个非典型增生病变(取自11例结节性甲状腺肿和3例乳头状癌)进行AR、PGK基因的克隆性检测,再采用免疫组化技术分析CK19的表达。结果甲状腺癌和腺瘤均为单克隆性。83.3%(15/18)的非典型增生病变是单克隆性增生,具有肿瘤性质,光镜下细胞核具有甲状腺乳头状癌细胞核的部分特征,核呈毛玻璃样,有异型性,可见核仁、核沟和核重叠,无纤维间质反应,是高级别非典型增生。3个取自乳头状癌的高级别非典型增生与对应癌组织具有相同的单克隆起源。多克隆性增生的非典型增生镜下核浆比增加,核染色质增粗、颗粒状分布,仅个别细胞核呈毛玻璃样改变,未见核沟,是低级别非典型增生,属于有可能逆转的反应性增生。CK19表达在乳头状癌呈弥漫一致的强阳性,在高级别非典型增生呈弥漫但强度不均一的阳性,在低级别非典型增生阴性或仅灶性阳性,腺瘤部分阳性,正常甲状腺阴性。结论结节性甲状腺肿中出现的具有甲状腺乳头状癌细胞核部分特征的非典型增生是高级别非典型增生,呈单克隆性增生,其CK19弥漫阳性表达,具有癌前病变性质,可进一步进展为乳头状癌。对伴此类病变的甲状腺良性病变,病理医师和临床医师应高度重视,并加强密切随诊。     

乳腺癌患者外周血NKG2A、NKG2D检测的临床意义

背景与目的:机体自身免疫功能与肿瘤的发生、发展有密切的关系.自然杀伤(natural killer,NK)细胞在天然免疫和获得性免疫中均发挥重要作用.目前已发现多种NK细胞表面受体,根据功能可分为抑制性受体和活化性受体二大类.抑制性受体NKG2A和活化性受体NKG2D对NK细胞的杀瘤功能发挥着相反的调节作用,在发生肿瘤的情况下,二者是如何表达以及与肿瘤免疫逃逸的关系尚不明确.本研究旨在探讨乳腺癌与乳腺良性疾病患者外周血NK细胞表面受体NKG2A与NKG2D的平衡状态,分析宿主NK细胞受体与肿瘤免疫逃逸的关系.方法:应用流式细胞术对37例乳腺癌患者和30例乳腺良性疾病患者血样标本行NKG2A、NKG2D检测,同时检测患者细胞免疫功能.结果:乳腺癌患者与乳腺良性疾病患者相比,NKG2A明显上调,NKG2D表达降低;CD3+、CD4+、CD56+细胞百分比更低(p＜0.05).在乳腺癌患者中,细胞免疫功能低下组及腋淋巴结转移数≥4枚组中,NKG2D表达更低(P＜0.05).Ⅲ+Ⅳ期及C-erbB2高表达乳腺癌患者,NKG2A表达更高(P＜0.05).NKG2A、NKG2D表达率在乳腺癌不同病理类型及组织学分级之间的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:外周血NKG2A、NKG2D的测定对于了解肿瘤患者机体免疫功能的状态、估计病情及判断预后具有一定的临床价值.     

红色荧光蛋白和荧光素酶双报告基因转基因小鼠的建立

背景与目的:活体动物体内光学成像(optical in vivo imaging)主要采用生物发光与荧光两种技术。生物发光是用荧光素酶(luciferase,Luc)基因标记细胞或DNA,而荧光技术则采用荧光报告基团(GFP、RFP、Cyt及dyes等)进行标记,利用一套非常灵敏的光学检测仪器,能够直接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为,生物发光成像具有高的灵敏度和特异性,同时生物发光信号可用于精确定量,而荧光成像具有方便、便宜、直观、标记靶点多样和易于被大多数研究人员接受的优点。本研究基于慢病毒介导的转基因方法制备红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)和Luc双报告基因转基因小鼠(即RL转基因小鼠),将这两种技术融为一体。方法:制备携带RFP和Luc基因(简写RL基因)的慢病毒,然后将携带RL基因的慢病毒注入小鼠单细胞受精卵卵周隙以感染受精卵,胚胎移植进假孕母鼠以获得仔鼠,应用小动物活体成像仪、体视荧光显微镜和PCR等在蛋白和DNA水平上筛选和鉴定,并获得RL转基因小鼠。结果:移植卵周隙注射有慢病毒的胚胎125枚给6只假孕母鼠,其中4只假孕母鼠怀孕,共生仔鼠20只;利用小动物活体成像仪检测RFP和Luc表达,在蛋白水平证实20只F0代中,3只高表达RFP和Luc;DNA水平检测证实,3只RFP和Luc阳性的小鼠基因组中确实整合有外源转基因RL,预示基因型鉴定结果很好验证了小动物活体成像仪筛选和鉴定结果。此外,RL转基因首建鼠基因组中整合的RL转基因可稳定遗传至下一代,并能正常表达。RL转基因小鼠主要脏器均可见红色荧光和Luc信号,但不同脏器间荧光和Luc强度有差异。结论:成功制备RL双报告基因转基因小鼠,为后续研究干细胞在肿瘤发生、发展和转移中的作用和造血重构等提供双报告基因标记的各种移植用供体细胞,并对此供体细胞及其在体内衍生的细胞进行灵敏的非损伤、实时可视化体内跟踪。     

RNAi沉默GTPBP4基因对结肠癌RKO细胞增殖及凋亡的影响

 目的 探讨GTPBP4基因沉默后,RKO细胞增殖和凋亡等生物学行为的改变。方法 将慢病毒GTPBP4-siRNA及CON053阴性病毒转染结肠癌RKO细胞株,以Real-time PCR 和Western blot检测敲减效率。Cellomics细胞计数检测细胞生长,MTT法检测细胞增殖,FACS法进行细胞周期检测,并进行细胞克隆形成实验,AnnexinⅤ-APC单染法流式细胞仪检测细胞凋亡。 结果 慢病毒成功感染RKO细胞,mRNA和蛋白检测均显示GTPBP4基因敲减成功。GTPBP4基因敲减后,RKO细胞增殖速率受到显著抑制,MTT值比值（即增殖倍数）减小,G_0/1、G₂/M期细胞显著增多,S期明显减少,细胞克隆集落数目减少,凋亡峰值明显高于对照组,且峰值出现时间早于对照组。 结论 GTPBP4基因可能通过促进肿瘤细胞增殖、抑制凋亡而影响结肠癌的发生发展。     

周细胞的研究进展

周细胞是一种多能细胞,可以向骨、软骨等组织分化;具有收缩能力,从而调节微环境的灌流量和通透性;还能和内皮细胞相互作用,参与血管形成和创伤愈合。周细胞的功能失调和许多微血管疾病以及肿瘤的扩散相关。一直以来,对周细胞的存在以及功能有所忽略,最近才对其有一定的认识。本文就周细胞的定位、结构、标记物、功能、相关的信号通路以及在肿瘤中所起的作用做一简单的介绍。     

新疆维吾尔族霍奇金淋巴瘤HLA—A高分辨基因多态性分析

目的：研究人类白细胞抗原（humanleukocyteantigen,HLA—A）高分辨等位基因型与新疆地区维吾尔族霍奇金淋巴瘤（hodgkin’Slymphoma,HL）易感性的关系,以揭示遗传因素在HL发病中的作用。方法：采用病例一对照的研究设计和DNA测序分型（SBT）法,对45例维吾尔族HL患者和110名健康者进行HLA—A基因座位的精确分型,计算HLA_A基因座位等位基因的相对频率（RF）及基因频率（AF）。结果：1）病例组共检出33个高分辨等位基因型,对照组中共检出44个高分辨等位基因型,HLA-A基因座位上等位基因频率分布均满足Hardy-Weninberg遗传平衡检验,P=0．61。2）与新疆地区维吾尔族人群比较,维吾尔族HL患者中等位基因HLA-A＊01：01：01：01（45．48％＂US16．04％）、A＊03：01（39．68％VS18．35％）、A＊01：01（33．91％vs18．35％）、A＊02：07（28．18％VS13．73％）高分辨等位基因分布频率较高,差异有统计学意义,P〈0．01。HLA—A＊02：01（69．05％vs85．47％）和A＊1l：01（16．81％VS32．34％）则相对较低,差异有统计意义,P〈0．01。3）新疆地区维吾尔族HL患者与维吾尔族健康人抗原型均以A2最为多见,各型在病例组与对照组之间分布差异无统计学意义,P〉0．05。结论：HLA-A＊01：01：01：01、A＊03：01、A＊01：01和A＊02：07基因型与维吾尔族HL存在阳性关联,可能为维吾尔族HL发病的易感基因,而HLA-A＊02：01、A＊ll：01可能为维吾尔族HL发病的拮抗基因。     

反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞MTA1基因表达及侵袭性影响的研究

目的:合成人肿瘤转移相关基因(MTAl)的反义脱氧寡核苷酸,观察其转染后对人骨肉瘤MG-63细胞系中MTA1表达及骨肉瘤侵袭性的影响.方法:免疫细胞染色观察人工合成正义、反义及无意义MTA1基因片段转染人骨肉瘤细胞MG-63后,人肿瘤转移相关基因的表达;RT-PCR和蛋白质印迹法检测MTA1基因mRNA和蛋白质表达水平的变化;Boyden小室体外侵袭实验检测转染前后细胞侵袭力的变化.结果:反义寡核苷酸处理骨肉瘤细胞后,MTA1 mRNA的表达下降(吸光度之比为25.09±0.21),与正义链组、无意义链组和空白对照组(35.19±0.17、33.20±0.23和37.17±0.18)相比差异有统计学意义,P<0.05.Boy-den小室体外侵袭实验检测显示,反义寡核苷酸处理后骨肉瘤细胞的透膜能力明显下降.结论:MTA1同骨肉瘤的转移能力密切相关,反义寡核苷酸的转染可阻遏骨肉瘤细胞中MTA1的表达,并因此有可能限制骨肉瘤的侵袭和转移.     

晚期恶性肿瘤患者临床漏 /误诊分析 - - 附 35例尸解报告

目的：在诊断方法、技术不断进步的情况下,确定恶性肿瘤临床与尸检 诊断的不一致率。方法：对本院肿瘤科5年来（1994－1999年）所有尸检进行回顾性研究。结果：共尸检35例,男性24例,女性11例,中位年龄64岁（29－84岁）。35例被尸解的尸体中共发现41个恶性肿瘤,其中10例、16个恶性肿瘤被误诊或漏诊。该10例中6例死亡原因为恶性肿瘤。在本研究中,临床与尸检诊断的不一致率为39％。结论：恶性肿瘤临床与尸检诊断的不一致率依然很高,本结果证实了尸检的重要性。     

后程加速超分割放射治疗I～II期鼻咽癌的疗效观察

目的：观察后程加速超分割放射治疗早期鼻咽癌的临床疗效、毒副反应及后遗症。方法：将108例I～II期鼻咽癌患者随机分为常规分割放疗组(常规组)和后程加速超分割放疗组(后超组),每组54例。常规组照射2Gy/次,5次/周,总量为70Gy/7周。后超组前3.5周照射同常规组,然后开始1.5Gy/次,2次/日,间隔6h,总量为69Gy/6周。结果：鼻咽部肿瘤消退率：常规组为70.97％(22/31),后超组为89.47％(34/38),但两组差别无显著性意义(P=0.05);颈部淋巴结完全消退率：常规组为86.67％(26/30),后超组为90.91％(30/33),两组差别无显著性意义(P>0.05);两组1、2、3年生存率分别为96.12％、80.97％、78.55％和98.13％、93.95％、90.87％(P=0.06),无明显的统计学差异;两组放疗毒副反应及后遗症也无显著性差别(P>0.05)。结论：I～II期鼻咽癌后程加速超分割放疗疗效未见优于常规分割放疗,但未加重放疗毒副反应及增加放疗后遗症,有必要扩大病例并作长期随访研究。     

老年人非小细胞肺癌三维适形放疗的疗效分析

目的探讨三维适形放射治疗（3DCRT）对老年人非小细胞肺癌（NSCLC）的临床疗效和毒副反应。方法58例非小细胞肺癌患者采用三维适形放射治疗,照射剂量DT2．0Gy／次,5次／周,DT总量64Gy-70Gy;放疗后1—3个月行胸部CT检查评价疗效。结果58例患者中,完全缓解（CR）17例,部分缓解（PR）33例,稳定（SD）6例,进展（PD）2例,总有效率86．2％（50／58）;毒副作用以放射性食管炎及放射性肺炎为主,但均可耐受。结论三维适形放射治疗对老年人非小细胞肺癌患者的近期疗效较好,且不良反应较轻,可耐受。