超敏C反应蛋白与尿β2微球蛋白联合检测对诊断早期糖尿病肾病的临床价值

目的探讨尿β2微球蛋白（β2-MG）和血超敏C反应蛋白（HS-CRP）联合检测对糖尿病早期肾损伤的应用价值。方法用全自动生化分析仪测定89例2型糖尿病患者和50例健康人的血超敏C反应蛋白和尿β2微球蛋白含量。结果糖尿病组β2-MG和HS-CRP明显高于健康人组（P〈0．01），且联合检测阳性率达89．9％，明显高于单项检测。结论尿β2-MG与血HS-CRP是糖尿病早期肾损伤的敏感指标，联合检测更为敏感。     

抗人肝癌单克隆抗体嵌合Fab在巴氏毕赤酵母中的高效分泌表达

目的:通过分步整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌单克隆抗体(mAb)HAb18的嵌合Fab(cFab)片段。方法:将抗人肝癌mAbcFab/HAb18基因的原核表达载体pET32a/cFab中的CL和Fd段基因,分别亚克隆到酵母表达载体pPIC9K和pPICZαA中,构建重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd并测序鉴定。将重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd分步整合到酵母菌GS115的染色体上,经G418和Zeocin筛选高拷贝的转化子及鉴定Mut表型后,用含5mL/L甲醇的培养基诱导表达。结果:成功地表达抗人肝癌mAbHAb18的cFab,表达水平为26mg/L。Westernblot鉴定证实,表达产物具有良好的与HAb18结合的活性和特异性。结论:cFab/HAb18在巴氏毕赤酵母获得表达,为对其进一步大规模的生产和临床应用奠定了基础。     

肝细胞培养过程中酸碱度和溶解氧的关联控制

目的在生物型人工肝支持系统(BAL)中,设计一种能够精确控制溶解氧(D0)与酸碱度(pH)的控制方案.方法根据肝细胞培养过程中所需要的物料衡算,采用比例积分(PI)算法结合开关量控制、预测控制等方案,通过工控机构建关联控制系统,使得D0与pH的值相互关联.结果DO控制范围0%～200%,精度达到±5%;pH控制范围6～8,精度达到±0.05.结论经实验证实,本控制方案工作稳定,无静态误差,解决了培养过程中DO与pH相互影响的问题,可用于BAL中对肝细胞培养环境的控制.     

卵巢切除对大鼠子宫雌激素受体亚型表达的影响

目的 通过对去卵巢大鼠雌激素受体亚型在子宫表达的观察，研究卵巢切除对大鼠子宫影响的机制。方法 选择成年Wistar大鼠30只，10只为正常组，10只为假手术组，10只为模型组(去卵巢组)。6周后处死大鼠，分离摘取子宫，常规石蜡包埋、切片，分别进行ERα、ERβ抗体的免疫组织化学染色。结果 1．ERα在正常组、假手术组及模型组子宫的上皮细胞、间质细胞及肌细胞核均有表达，其中以腺上皮细胞表达最强。图像分析表明，模型组腺上皮ERα表达较其他2组弱。2．ERα在去卵巢子宫中未见明显表达，只在正常组和假手术组子宫腺上皮细胞核中表达，且较ERα表达弱。结论卵巢切除后明显影响大鼠子宫ERα、ERα的表达，尤其对ERα的影响较为显著。     

7个非综合征型耳聋家系患者的mtDNA A1555G突变分析

目的探讨非综合征型耳聋家系患者mtDNA A1555G突变及其临床特征。方法应用聚合酶链反应、限制性核酸内切酶酶切和DNA测序技术对7个非综合征型耳聋家系112个成员的mtDNA A1555G突变进行检测，并分析听力临床资料。结果7个家系中所有受检的母系成员mtDNA A1555G突变均为阳性，突变性质含同质性和异质性二种；非母系成员及配偶该突变为阴性。突变的性质与临床表型的有关。结论mtDNA A1555G突变可导致非综合征型耳聋和氨基糖苷类抗生素致聋，其突变性质含均质性和异质性两种，且与临床表型相关。     

脊柱胸腰段薄层断层解剖及临床意义

目的：明确脊柱胸腰段冠状、矢状和横断面解剖学特点，探索薄层断层切片在观测各髓节及脊神经根走行过程的临床应用价值。方法：采用40具成人脊柱胸腰段标本经改良火棉胶包埋法处理，制作16具冠状、8具矢状和16具横位的0．25mm厚连续切片，观察脊神经根走行于侧椎管和椎间管不同区段的解剖关系和椎间孔韧带分布特征，并直接测量相关结构参数。结果：观测了脊柱胸腰段A、B、C、D经4区横断层面、经椎间管内口矢状层面、经两侧椎弓根中心冠状层面的形态和相关参数。结论：三种方位断层切片可较好显示诸多结构位置关系，对脊髓或脊神经源性疾病诊疗和正确辨认手术视野所见具有重要价值。     

双歧杆菌对早产儿食道pH值的影响及临床意义

目的为探讨双歧杆菌对早产儿食道pH值的影响，及其对早产儿易发生的消化道疾病的防治意义。方法我们采用便携式24hpH值自动记录仪，对61例早产儿进行了食道pH值的动态监测。结果口服双歧杆菌活菌制剂组的30例早产儿，食道pH值明显高于未服药的对照组，t=2．4093，P＜0．05。总pH值＜4的时间占总观察时间的百分比显著小于对照组。并且治疗组发生消化道疾患的人数也较对照组少。结论早产儿口服双歧杆菌活菌制剂可以减少胃食道反流等消化道疾病的发生。     

pGenesil-siHBV X 对 HepG2.2.15 细胞 HBV 表达和复制的抑制效果研究

 目的 研究针对HBV X基因区设计的小干扰RNA（siRNA）表达载体质粒pGenesil-siHBV X 对HepG2.2.15细胞HBV表达和复制的抑制效果及特异性。方法 针对HBV X区设计siRNA表达载体质粒pGenesil- siHBV X。分别用培养液（空白对照）、脂质体Metafectene、pGenesil 空载体、pGenesil-siHK（阴性对照）、pGenesil-siAFP（特异性对照）、pGenesil-siHBV X处理或转染HepG2.2.15细胞各3次。于每次转染后24 h，取各组细胞培养上清液，用时间分辨荧光免疫测定技术检测上清液中HBsAg和HBeAg含量，用化学发光法检测AFP含量，用PCR荧光定量技术检测HBV-DNA复制水平。 结果 pGenesil-siHBV X转染能抑制HepG2.2.15细胞对HBV标志物的表达，且抑制作用随转染次数增加而增强。第3次转染后，pGenesil-siHBV X组细胞上清液中 HBsAg、 HBeAg和HBV-DNA检测结果分别为（6.26 ± 1.07）ng/ml 、（0.13 ± 0.05）Ncu/ml和（3.01 ± 0.40）×107拷贝/ml，与空白对照组的（22.50 ± 1.39）ng/ml、（1.12 ± 0.11）Ncu/ml和（12.33 ± 1.28）×107拷贝/ml比较，差异有统计学意义（t值分别为12.80、12.21、9.71，P < 0.05）；pGenesil-siHBV X 转染不影响细胞对AFP的表达（t = 0.18，P = 0.86）。结论 pGenesil-siHBV X可以有效和特异地抑制HepG 2.2. 15细胞HBV-DNA的复制及HBsAg和HBeAg表达。     

pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1融合蛋白诱导特应性抗肿瘤免疫应答的研究

目的:构建重组表达载体pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1,研究人B7.2/MAGE-1基因修饰的食管癌细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用.方法:通过RT-PCR扩增B7.2和MAGE-1的cDNA,以pEGFP-C3为载体,构建pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1重组载体,通过脂质体转染技术转染人食管癌细胞株EC9706,外周血来源的树突状细胞(DC)负载肿瘤抗原后,与自体T淋巴细胞共培养3天,获得细胞毒性T淋巴细胞(CTL),用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL对转染和未转染pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1的食管癌细胞EC9706的杀伤活性.结果:CTL对转染pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1的肿瘤细胞的杀伤活性大于转染pEGFP-C3和未转染细胞的杀伤活性(P＜0.05).结论:成功构建了真核共表达载体pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1,人B7.2/MAGE-1基因修饰的EC9706肿瘤细胞瘤苗,可诱导出明显的抗EC9706细胞的免疫效应.     

IFN-α诱导HuH7细胞固有免疫分子APOBEC3G的表达

目的了解IFN-α对HuH7细胞固有免疫分子APOBEC3G表达的影响及其机制。方法HuH7细胞给予不同浓度的IFN-α(0 U/ml、100U/ml、400U/ml、800U/ml and 1200U/ml)刺激,10h后提取细胞总RNA,RT-PCR和实时定量RT-PCR检测HuH7细胞内APOBEC3G的mRNA水平变化,Western blot分析APOBEC3G蛋白水平的表达;分别构建不同长度的含有IRF-E(IFN regulatory factor element)位点的APOBEC3G起始密码上游序列报告质粒、不含IRF-E和IRF-E位点突变的虫荧光素酶报告质粒,报告基因分析IFN-α刺激后APOBEC3G起始密码上游IPF-E位点对APOBEC3G表达的影响。结果IFN-α上调HuH7细胞APOBEC3G mRNA和蛋白水平的表达,并具有剂量依赖的效应。序列分析发现APOBEC3G起始密码上游的-298～-283和-57～-47位碱基分别存在IRF-E和ISRE(IFN stimulated re- sponse element)序列。报告基因分析结果显示,干扰素使含有IRF-E序列的APOBEC3G启动子报告质粒的虫荧光素酶的活性增加6～8倍,而不含IRF-E序列和IRF-E位点突变的报告质粒的虫荧光素酶活性在干扰素刺激后几乎没有变化。结论IFN-α可通过IRF-E位点上调APOBEC3G mRNA和蛋白水平的表达,从而发挥抗病毒效应。