K562细胞转染HLA-B分子对NK细胞杀伤功能的影响

为了研究不同HLA B分子对NK细胞杀伤活性的影响 ,我们分别构建pcDNA3 HLA B 390 5 2、B 2 70 4、B 5 1 0 2 2基因真核表达载体 ;借助脂质体将各质粒转染入K5 6 2细胞 ,经G4 1 8筛选 ,分别获得阳性表达细胞株 ;并应用LDH法检测转染细胞对不同个体外周血NK细胞杀伤活性的抑制效应。结果显示 :与转染了空质粒的对照组相比 ,外周血NK细胞对K5 6 2 B39的杀伤率无明显影响 ,而对K5 6 2 B2 7,K5 6 2 B5 1的杀伤率降低。当使用针对NK细胞受体KIR3DL1的单抗DX9封闭NK细胞后 ,此抑制效应大部分消失。提示靶细胞表达HLA Bw4分子可明显抑制NK细胞的杀伤效应 ,而表达HLA Bw6分子对NK细胞杀伤功能无明显影响     

肝素涂层体外循环管道抗凝血性能的研究

目的 评测3种离子键肝素涂层体外循环管道的抗凝血性能和稳定性。方法 用PT和APTT对不同浓度肝素—氯烃基二甲基代苯甲胺(HBC)复合物涂层体外循环管道的凝血性能进行评测，同时测试体外转流对3种肝素涂层管道抗凝血性能的影响。结果 3种肝素涂层方法均能够将肝素分子结合于材料表面并具有抗凝活性，其中HBC复合物和肝素—聚乙烯亚胺复合物处理的体外循环管道经体外转流96h后仍具有较佳的抗凝血活性。结论 离子键肝素涂层因结合物质不同其稳定性也不同；HBC复合物和肝素—聚乙烯亚胺复合物处理的体外循环管道肝素分子结合较牢固，能够满足临床短期使用需要。     

实时定量RT-PCR的原理及方法

实时定量RT-PCR广泛应用于定量检测mRAN表达水平,为基础研究、分子药物学和生物技术研究提供了一种有力的方法。该法具有易操作、高通量、敏感性高和特异性强的特点,随着新酶、新探针和新仪器的发展而得到快速的发展。本文将对实时定量RT-PCR的定量原理、仪器应用、探针种类的研究进展以及细胞因子mRNA表达水平检测上的应用作一综述。     

金属表面TiO2薄膜的溶胶-凝胶法制备及其血液相容性研究

通过溶胶 凝胶法制备TiO2 薄膜对 316L不锈钢和NiTi形状记忆合金进行表面改性处理。研究发现 ,经 5 0 0℃处理 1h的薄膜结构致密 ,膜层均匀平滑 ,薄膜主要由锐钛矿相TiO2 构成 ,随热处理温度的提高 ,锐钛矿相逐渐转变为金红石相。电化学腐蚀和动态凝血时间及溶血率测试表明 ,通过溶胶 凝胶法制备TiO2 膜进行表面改性的 316L不锈钢和NiTi合金的抗模拟体液腐蚀性提高 ,动态凝血时间延长 ,溶血率下降 ,说明溶胶 凝胶法制备TiO2 膜可以提高金属植入物的血液相容性     

NK细胞在小鼠异基因骨髓移植中的作用

目的:研究自然杀伤(NK)细胞在异基因骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)、移植排斥、骨髓植入及造血重建的影响。方法:以近交系小鼠C57/6j(H-2^b)为供鼠、BALB/c(H-2^d)为受鼠,在移植物中增加供者的外周T细胞和/或NK细胞进行异基因骨髓移植,用流式细胞仪检测受鼠的CD₃₄^＋细胞计数和H-2K^b＋细胞表达水平,血细胞自动分析仪检测外周血白细胞计数,并结合临床表现和病理检查,比较不同移植组的存活率、GVHD、植入水平及造血重建等。结果:增加NK细胞组的小鼠存活率显著大于不增加NK细胞组,小鼠出现GVHD的数量少、程度轻,外周血白细胞及骨髓CD₃₄^＋细胞恢复快、H-2K^b＋细胞表达水平高。结论:NK细胞抑制小鼠异基因骨髓移植中的GVHD和移植排斥,促进骨髓植入及造血重建。     

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白抑制狼疮肾炎患者外周血单个核细胞B7分子表达及

目的探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白(CTLA-4Ig)对活动期狼疮肾炎(LN)患者外周血单个核细胞(PBMC)细胞表面B7-1(CD80)和B7-2(CD86)表达的影响及其对抗双链DNA(dsDNA)抗体和免疫球蛋白产生的影响。方法将18例活动期LN患者的抗凝血标本随机分为LN的CTLA-4Ig处理组(LN-T组9例)和普通培养组(LN-NC组9例)。另以14例正常人的抗凝血标本为对照,随机分为正常人的CTLA-4Ig处理组(NC-T组7例)和普通培养组(NC-NC组7例)。用密度梯度离心法分离PBMC。处理组加入CTLA-4Ig(10ng/L)、普通培养组加入等量普通培养基37℃孵育72h后,采用流式细胞仪技术检测PBMC细胞表面B7-1和B7-2分子的表达;ELISA法检测孵育液中抗dsDNA抗体、IgG及IgM水平。结果活动期LN患者CTLA-4Ig处理组与普通培养组比较,PB-MC表面B7-2分子表达明显下降(P<0.01);B7-1分子表达无显著变化(P>0.05);孵育液中抗dsD-NA抗体、IgG及IgM的生成均明显减少(P<0.01)。而正常人的两组间各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论CTLA-4Ig可抑制活动期LN患者的PBMC表面B7-2分子的表达,并可减少其抗dsDNA抗体、IgG及IgM的分泌。     

携带肝细胞生长因子基因重组质粒在大鼠体内的组织分布研究

目的 研究携带肝细胞生长因子基因的重组质粒（pUDKH）经肌肉注射给药后在大鼠体内的组织分布及其与大鼠基因组DNA的整合情况。 方法 二级Wistar大鼠雌雄各20只，按体重和取样时间的不同随机分为12h、24h、3d、7d、14d、21d的各实验组（给予pUDKH，2．0mg／kg）和注射后3d取样的对照组（给予PBS，200ul／只），依次将各组大鼠摘眼球取血后脱臼处死，按脑、心、肺、胸腺、肝、肠系膜淋巴结（MLN）、脾、肾、生殖腺、左腿肌肉、右腿肌肉的顺序取样。经典酚／氯仿抽提法提取各组织总DNA，应用紫外分光光度计测定其浓度和纯度，PCR方法检测其中的D肌动蛋白基因；巢式PCR检测各组织总DNA中pUDKH的分布情况；ApnL I酶切分离pUDKH分布阳性各组织中的pUDKHDNA和基因组DNA，巢式PCR检测pUDKHDNA与基因组DNA的整合情况。 结果 各组织总DNA浓度与纯度均符合实验需要，并适于采用PCR或巢式PCR方法进行体内组织分布及基因组DNA整合情况检测。巢式PCR检测显示，在各时间点的右腿肌肉与外周血、注射后3和7d的肝脏、3和14d的生殖腺、7d的胸腺、7和14d的MLN与左腿肌肉等组织中pUDKH分布均呈阳性，而在各时间点的脑、心、肺、脾、肾等组织中pUDKH分布均呈阴性。pUDKH分布阳性的各组织中均未检测到pUDKHDNA与基因组DNA的整合。 结论 pUDKH经肌肉注射给药后，在各时间点大鼠体内各组织中呈现不同的分布谱。在pUDKH分布阳性的各组织中，pUDKHDNA与基因组DNA发生随机整合的概率较低。     

艾芬地尔干预后氯化锂-匹罗卡品致(癎)大鼠的慢性期脑电图特征

目的:了解艾芬地尔干预对氯化锂(LiCl)-匹罗卡品(Pilo)致(癎)大鼠脑电图随时间变化的特征.方法:通过腹腔注射LiCl-Pilo建立癫(癎)动物模型.60只雄性Wistar大鼠分为对照组、模型组和艾芬地尔干预组,分别在造模后第7、15、30、60天四个时间点观察各组大鼠行为、脑电图改变,每一个时间点5只大鼠.结果:对照组无NFDA1性发作,经过4-20天的潜伏期后,干预组及模型组的脑电图波幅及频率骤然减低,在慢性期干预组较模型组的波幅逐渐增高,频率逐渐增快,但仍未达发作当时的水平,且两组间比较差异无统计学意义.干预组较模型组更早更快趋于正常化.结论:艾芬地尔在LiCl-Pilo致(癎)大鼠模型中具有抗惊厥作用,慢性期脑电图有特征性改变.     

小鼠FoxP3基因腺相关病毒的制备与鉴定

目的:构建携带小鼠FoxP3基因的重组腺相关病毒,并检测其在NIH3T3细胞的表达情况。方法:将FoxP3通过内部核糖体进入位点(IRES)与报告基因增强型绿色荧光蛋白连接,构建同时含有目的基因和报告基因的重组腺相关病毒(rAAV)表达质粒,通过磷酸钙沉淀法共转染HEK293细胞,收获并通过肝素亲和层析法纯化病毒,并对病毒纯度和滴度进行鉴定。利用携带FoxP3基因的重组病毒体外感染小鼠NIH3T3细胞,体外观察感染效率和目的基因转录情况。结果:包装成功的rAAV/FoxP3经纯化后获得了高纯度的rAAV/FoxP3,实时定量PCR检测rAAV/FoxP3的病毒滴度达到5.0×1012vg/mL,体外感染NIH3T3细胞,流式细胞术测定感染效率可达92.88%,实时PCR测定细胞内存在高水平FoxP3mRNA。结论:获得携带FoxP3-IRES-EGFP的rAAV,并可有效感染NIH3T3细胞,为进一步研究FoxP3的生物学功能提供了有效工具。     

肿瘤转移抑制基因nm23—H1 mRNA在乳腺癌中的转录表达

目的：探讨nm23—H1基因mRNA在乳腺患组织中的表达及其与临床的关系．方法:采用半定量RT—PCR方法，检测30例乳腺患组织nm23—H1的表达．结果:①淋巴结阳性的原发灶组织nm23—H1 mRNAA表达明显低于淋巴结阴性的原发灶组织，Ⅲ期乳腺患组织nm23—H1 mRNA水平较Ⅰ、Ⅱ期的明显低．②多因素分析发现淋巴结转移与nm23—H1 mRNA的表达有显著性相关．结论nm23—H1基因mRNA表达强度与淋巴结转移呈负相关．在乳胰患转移过程中，nm23—H1 mRNA起重要的作用。