Lman1基因复合杂合突变导致的凝血因子Ⅴ、Ⅷ联合缺乏症

凝血因子Ⅴ和Ⅷ(FⅤ、FⅧ)联合缺乏症(F5F8D)是一种罕见的常染色体隐性遗传性出血性疾病。近年的研究发现,该病病因在于基因lman1或mcfd2的突变。本研究的目的是对1名F5F8D先证者及其家系成员的lman1、mcfd2基因进行扩增、测序,以查找潜在的致病突变。采集了先证者及其父母的外周血样本,进行了凝血功能相关检查,包括活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、血浆纤维蛋白原(Fg)、FⅤ促凝活性(FⅤ∶C)、FⅧ促凝活性(FⅧ∶C),并提取基因组DNA,通过PCR法对先证者lman1基因的13个外显子及侧翼序列、mcfd2基因的4个外显子及侧翼序列进行特异性扩增,产物经纯化后直接测序,以检测致病突变。根据先证者突变所在位点,选择性扩增其父、母的相应片段,纯化、测序,以便进行家系分析。结果表明:先证者APTT82.2秒、PT19.6秒、TT18.6秒,Fg2.9 g/l,FⅤ∶C 7.1%,FⅧ∶C 18.7%。先证者及其母亲lman1基因第8外显子区出现杂合性单碱基插入c.912_913insA,导致蛋白序列改变p.Glu305fsX20;先证者及其父亲lman1基因11外显子区出现杂合性无义突变c.1366CT,导致p.Arg456X。结论:先证者lman1基因的复合杂合突变c.912_913insA、c.1366CT是导致其发病的原因;前者继承自其母,后者继承自其父。这种复合杂合突变的组合方式尚未见有报道。     

绒毛组织冷冻切片与靶向超声微泡造影剂的结合特性研究

目的本研究旨在探讨耦合抗β-人绒毛膜促性腺素（β-HCG）抗体靶向超声微泡造影剂（TMCA）的稳定性及其与妊娠绒毛组织冷冻切片的结合特性。方法将制备好的TMCA与异硫氰酸荧光素（FITC）标记兔抗鼠IgG抗体稀释液混匀后,用流式细胞仪器检测不同时间点声诺维（SonoVue）微泡和抗β-HCG抗体的结合率。同时用妊娠绒毛组织冷冻切片、正常子宫内膜组织冷冻切片分别与TMCA、声诺维微泡进行结合反应,比较各组结合率、冲洗前后及抗β-HCG抗体预处理前后的结合率。结果流式细胞仪检测结果显示,声诺维微泡与FITC标记兔抗鼠IgG抗体的结合率随时间变化越来越高。寻靶实验发现,TMCA与绒毛组织、子宫内膜组织的结合率差异有显著的统计学意义[（83.30±2.15）%vs.（13.30±2.58）%,P〈0.01];绒毛组织与TMCA、声诺维微泡的结合率差异有显著的统计学意义[（83.30±2.15）%vs.（15.00±3.07）%,P〈0.01]。磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗前后TMCA与绒毛组织的结合率差异无统计学意义[（83.30±2.15）%vs.（78.30±4.36）%,P〉0.05]。抗β-HCG抗体预处理前后TMCA与绒毛组织的结合率差异有显著的统计学意义[（83.3±2.15）%vs（16.7±2.5）%,P〈0.01）。结论 TMCA与绒毛组织在体外一定条件下能高效率、高强度、高特异性地稳定结合。     

经食管实时三维超声心动图对比研究不同部位缺血致中度及以上二尖瓣反流瓣环形态及功能变化

目的 采用经食管实时三维超声心动图(RT-3D-TEE)对比分析不同部位缺血致中度及以上二尖瓣反流时二尖瓣瓣环形态及功能的变化规律,为外科成形术提供依据.方法选择前壁或下后壁心肌梗死缺血性心肌病伴中度及以上二尖瓣反流患者各11例(前壁病变组/下后壁病变组)和阵发性房颤患者20例(对照组).对所有患者进行RT-3D-TEE检查,获取完整心动周期内的实时三维超声图像,并使用Qlab软件后处理分析计算二尖瓣瓣环最大投影面积A-max、二尖瓣瓣环投影面积变化率A-change、二尖瓣瓣环最大面积出现于R-R间期的时间点AR-R%、二尖瓣瓣环最大周长C-max、二尖瓣瓣环周长变化率C-change、二尖瓣瓣环最大高度H-max、二尖瓣瓣环高度变化率H-change、二尖瓣瓣环在长轴方向最大位移D、二尖瓣瓣环最大前后径DAP、二尖瓣瓣环最大左右径DAIPm及上述两种径线比值DAIPm/DAP.结果 对照组A-change、AR-R%、C-change、D分别为(22.5±5.7)%、(54.6±5.0)%、(13.9±4.2)%、(15.1±1.8)mm,前壁病变组分别为(18.4±4.1)%、(58.8±5.8)%、(12.5±2.9)%、(11.2±1.6)mm;下后壁病变组分别为(16.0±4.1)%、(62.8±7.1)%、(8.0±2.6)%、(11.1±2.3)mm,3组间的差异均有统计学意义(F=6.780、7.245、9.827、22.346,P＜0.05).前壁病变组、下后壁病变组A-change明显低于对照组,差异均有统计学意义(t=-2.23,P=0.032;t=-3.53,P=0.001),但前壁病变组与下后壁病变组之间的差异无统计学意义(t=1.15,P=0.258).对照组、前壁病变组、下后壁病变组的AR-R%均出现在舒张期,下后壁病变组AR-R%出现的时相较其他各组明显延迟.前壁病变组、下后壁病变组AR-R%均高于对照组,且下后壁病变组与对照组之间的差异有统计学意义(t=3.76,P=0.001),但前壁病变组与对照组之间的差异无统计学意义(t=1.91,P=0.063);同时下后壁病变组AR-R%也高于前壁病变组,但差异无统计学意义(t=1.62,P=0.113).前壁病变组、下后壁病变组C-change均低于对照组,且下后壁病变组与对照组之间的差异有统计学意义(t=4.39,P=0.000),但前壁病变组与对照组之间的差异无统计学意义(t=-1.01,P=0.318);同时下后壁病变组C-change也明显低于前壁病变组,差异有统计学意义(t=-2.98,P=0.005).前壁病变组、下后壁病变组的D明显小于对照组,差异均有统计学意义(t=-5.43,P=0.000;t=-5.57,P=0.000),但前壁病变组与下后壁病变组之间的差异无统计学意义(t=0.12,P=0.903).对照组、前壁病变组、下后壁病变组A-max、C-max、H-max、H-change、DAIPm、DAP、DAIPm/DAP的差异均无统计学意义(F=1.340、1.440、0.391、1.421、0.046、0.926、1.107,P均＞0.05).结论 采用RT-3D-TEE定量评价不同部位缺血致二尖瓣反流时二尖瓣瓣环形态及运动变化规律是可行的.下后壁缺血性心肌病致中度及以上二尖瓣反流患者二尖瓣瓣环运动受损相对更明显,外科可进行针对性二尖瓣成形治疗.     

儿童母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤1例分析

摘要本文分析1例儿童母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤（BPDCN）的诊断经验以提高对该病的认识。通过对该例儿童BPDCN病例进行了确诊分析,结合相关文献总结该疾病临床及实验室检查特点。对患儿皮肤肿物活检后行肿瘤细胞悬液流式细胞免疫荧光分析。结果表明,肿瘤细胞表达浆细胞样树突细胞标记CD123,同时表达CD4、CD56,不表达其它髓系、T细胞、B细胞特异性标记;根据临床资料、实验室检查、皮肤肿物病理及免疫组织化学检查结果,本例患者确诊为母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤。结论：儿童母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤非常罕见,诊断依赖于临床资料、组织病理学和免疫组织化学标记,该病病程呈侵袭性,预后差且发病机制在目前尚未明确。无标准治疗方案。     

以趋化因子受体4为靶点的恶性肿瘤靶向特异性磁共振对比剂的构建及体外成像

  目的  构建以趋化因子受体4(C-X-C motif chemokine receptor 4, CXCR4)为靶点的磁共振靶向对比剂并通过体外恶性肿瘤细胞的靶向磁共振成像探讨磁共振信号变化与肿瘤细胞CXCR4表达量的相关性。  方法  用细胞免疫荧光法和流式细胞计数法分别观察和测定3种恶性肿瘤细胞株(胰腺癌PANC-1、乳腺癌MCF-7和肺癌A549)的CXCR4表达, 并验证新型多肽Pep12与3种恶性肿瘤细胞表面的CXCR4特异性结合的能力。化学合成超顺磁性纳米氧化铁颗粒(ultra-small paramagnetic iron oxide nanoparticle, USPIO-Np), 并与Pep12实现共轭联接。动态光散射法测定Pep12-USPIO的水和直径; 用MTS细胞增殖与毒性检测试剂盒测定其细胞毒性; 磁共振成像检测不同浓度Pep12-USPIO溶液的T2/T2^*信号变化。普鲁士蓝染色验证Pep12-USPIO与3种肿瘤细胞的特异性结合, 磁共振成像验证Pep12-USPIO所致磁共振信号变化与3种肿瘤细胞CXCR4表达量的相关性。  结果  3种恶性肿瘤细胞株均有不同水平的CXCR4表达, 流式细胞计数的CXCR4阳性细胞百分比分别为PANC-1:18.7%;A549:2.9%;MCF-7:1.7%。多肽Pep12与3种恶性肿瘤细胞均能特异性结合, 并且结合量与CXCR4表达量呈正相关性(r=0.999, P=0.027)。自行合成的Pep12-USPIO在室温下长时间保持稳定的胶体状态, 水和直径为(86.60±1.48)nm。Pep12-USPIO细胞毒性较低, 铁浓度低于25 μg/ml时, ΔR2值和ΔR2^*值与铁浓度呈现良好的线性正比关系(△R2:R²=0.996;△R2^*:R²=0.977)。普鲁士蓝染色证实Pep12-USPIO能够与3种恶性肿瘤细胞实现靶向结合, 磁共振成像证实Pep12-USPIO能够造成肿瘤细胞悬液磁共振T2/T2^*值降低(P < 0.01), 并且ΔR2/ΔR2^*值与肿瘤细胞CXCR4表达水平呈显著的正相关(ΔR2:r=0.997, P=0.050;ΔR2^*:r=1.000, P=0.019)。  结论  Pep12-USPIO物理性质稳定, 细胞毒性较低, 能够与不同恶性肿瘤细胞株上的CXCR4特异性结合并实现磁共振T2/T2^*信号的减低, 并且磁共振信号的变化与细胞株CXCR4的表达量呈正相关。     

运用白质地图分析皮质下缺血性血管病患者胼胝体损害与认知功能的关系

目的 采用基于白质地图的DTI分析方法(ABA)探讨皮质下缺血性血管病(SIVD)患者胼胝体损害与认知功能的关系。方法 对18例血管性认知障碍(VCI组)和22例无认知障碍(NCI组)的SIVD患者进行神经心理学和MR检查,采用白质地图DTI比较两组患者胼胝体各分区的FA、平均扩散率(MD)的差异,并分析上述DTI参数与蒙特利尔认知评估量表(MoCA)得分的相关性。结果 与NCI组比较,VCI组在胼胝体膝部、体部、压部、右毯部和左毯部的FA值明显减低,MD明显增高(P均<0.05)。SIVD患者胼胝体膝部、体部、压部、右毯部和左毯部的FA值与MoCA得分呈正相关,胼胝体膝部、体部、压部、右毯部的MD值与MoCA的得分呈负相关。结论 认知障碍的SIVD患者存在胼胝体损害,且损害与认知功能改变相关;采用ABA可以评价疾病的严重程度。     

高场MRI诊断周围型肝内胆管细胞癌

目的探讨高场MRI对周围型肝内胆管细胞癌(IHPCC)的诊断和鉴别诊断价值。方法对18例经病理证实的IHPCC的MR资料进行回顾性分析。所有患者均接受MR平扫及多期增强扫描。观察MR平扫和各期强化特点,测量病灶和正常肝实质的ADC值。结果所有病灶T2WI主体均呈不均匀高或稍高信号,其中11例中心可见斑片状或星芒状低或略低信号。12例病灶动脉期呈环状强化,门静脉期及延迟期强化范围向中心扩展;3例动脉期周边及中心均不规则强化,门静脉期及延迟期强化范围扩大;1例动脉期未见强化,门静脉期边缘强化,延迟期中心强化;2例动脉期和门静脉期呈环状强化,延迟期中心未见强化。DWI病灶均呈不均匀高或稍高信号。病变区和正常肝实质ADC值为(1.42±0.13)×10-3mm2/s、(1.26±0.08)×10-3mm2/s(P<0.05)。结论高场MRI的T2WI、DWI、ADC值及多期增强扫描相结合对IHPCC的诊断具有重要价值。     

阿米卡星耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶基因的研究

目的了解阿米卡星耐药鲍曼不动杆菌中16S rRNA甲基化酶基因的分布情况。方法收集2010年1月—2012年4月临床标本中分离的阿米卡星耐药鲍曼不动杆菌54株。5种16 S rRNA甲基化酶基因(armA、rmtA、rmtB、rmtC和rmtD)的检测采用聚合酶链反应(PCR)方法,PCR产物采用琼脂糖凝胶电泳分析并将阳性扩增产物进行测序。抗菌药物的药敏试验采用纸片扩散法进行,WHONET5.5软件进行统计分析。结果 54株阿米卡星耐药鲍曼不动杆菌中40株检出16S rRNA甲基化酶基因armA,检出率为74.1%,未检出rmtA、rmtB、rmtC及rmtD基因。54株阿米卡星耐药鲍曼不动杆菌对米诺环素、亚胺培南和美罗培南耐药率分别为38.9%、63.0%和64.8%,对其余14种抗菌药物耐药率均在85.0%以上。结论阿米卡星耐药鲍曼不动杆菌主要携带armA型16S rRNA甲基化酶耐药基因,除米诺环素对该菌有较好的抗菌活性外,该菌对其他16种抗菌药物耐药严重。     

彩色多普勒超声对输卵管间质部妊娠的诊断价值

目的：探讨彩色多普勒超声对输卵管间质部妊娠的诊断价值。方法：分析输卵管间质部妊娠的彩色多普勒超声图像特点。结果：33例患者术前行彩色多普勒超声检查诊断为输卵管间质部妊娠,其中27例与手术及病理组织学符合,超声诊断符合率为81.8%,其中1例合并宫内早孕;误诊6例,位于宫角处妊娠2例、输卵管峡部妊娠1例、输卵管残端妊娠1例、卵巢妊娠1例、腹腔妊娠1例。结论：彩色多普勒超声检查对输卵管间质部妊娠具有较高的诊断价值。     

全自动生化分析仪测定血清高密度脂蛋白胆固醇分析性能评价

目的对在日立7600全自动生化分析仪上用均相测定法检测高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的分析性能进行评价。方法参考国内外有关性能评价的文件和报道,结合临床工作实际,对全自动生化分析仪测定血清HDL-C的精密度、正确度、分析测量范围、分析干扰和生物参考区间5项分析性能进行验证和评价。结果HDL-C测定在3个不同浓度水平的批内和天间不精密度都小于厂家规定的不精密度要求;5个不同批号的室间质控品检测结果与靶值的相对偏倚均小于允许偏倚;分析测量范围为0～5.21mmol/L,略宽于厂家给定的范围;生物参考区间验证结果均在设定的范围之内;不同浓度游离胆红素、结合胆红素、乳糜物、血红蛋白对HDL-C检测不产生影响。结论日立全自动生化分析仪测定HDL-C的分析性能与厂家声明基本一致,符合临床的要求,可以应用于临床。