hVEGF121基因转染对人脐静脉内皮细胞生长的作用

目的:构建人血管内皮生长因子(hVEGF)-121的真核细胞复制表达质粒,将hVEGF121基因转染进人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),通过旁分泌作用来加快其生长速度.方法:采用RT-PCR方法,从人胚胎成纤维细胞中克隆hVEGF121前体蛋白全长cDNA,构建重组真核表达质粒pcDNA3-hVEGF121,用FuGENE 6介导转染入HUVEC.收集转染的HUVEC培养上清,用ELISA法定量检测hVEGF蛋白的表达情况;绘制细胞生长曲线,检测hVEGF121促进HUVEC增殖的生物学活性.设转染pcDNA3空质粒载体和不转染任何DNA的HUVEC做对照.结果:(1)成功构建了pcDNA3-hVEGF121真核表达质粒,经测序证明基因序列与GenBank中核酸序列一致,且插入方向正确;(2)转染细胞瞬时表达hVEGF蛋白,于转染1d后每104个细胞每天可分泌hVEGF蛋白59.95 Pg,约为对照组的100倍;之后表达水平先快后慢下降,于转染7d后仍较对照组高近1倍;(3)转染细胞生长速度明显加快,在转染3 d后细胞数与对照组相比即有显著性差异(P＜0.01),细胞倍增时间从对照组的7d以上缩短为3d左右.结论:成功构建了pcDNA3-hVEGF121真核表达质粒;该质粒能在HUVEC中表达有生物活性的hVEGF121蛋白,通过旁分泌作用明显促进HUVEC的分裂增殖.     

硒结合蛋白1通过抑制超氧化物歧化酶增强奥沙利铂的细胞毒作用

目的:探讨人硒结合蛋白1(SBP1)在结直肠癌DLD-1细胞中的表达水平对超氧化物歧化酶(SOD)的影响及其引起的DLD-1细胞对奥沙利铂的敏感性变化,揭示SBP1的部分抗肿瘤作用机制。方法:MTS法检测不同浓度奥沙利铂处理SBP1siRNA或SOD1siRNA转染细胞后的细胞存活率,CuZn/Mn-SOD活性检测试剂盒检测SBP1siRNA转染对DLD-1细胞SOD酶活性的影响;实时荧光定量PCR检测下调SBP1后,SOD1和SOD2mRNA水平的变化;Western blot法检测下调SBP1或SOD1后DLD-1细胞内SBP1、SOD1及SOD2蛋白水平的变化;超氧化物阴离子荧光探针DHE染色法检测抗肿瘤药物引起的细胞内超氧化物阴离子的水平。结果:下调SBP1后,奥沙利铂对DLD-1细胞的毒性作用[半数毒性浓度IC50为(36.7±1.6)μmol/L]相比对照组[IC50为(17.5±0.8)μmol/L]明显减小(P<0.05);同时下调SBP1和SOD1后,奥沙利铂对DLD-1细胞的毒性作用[IC50为(16.8±1.0)μmol/L]相比对照组[IC50为(17.3±1.2)μmol/L]无明显变化(P>0.05);下调SBP1分别在转录水平、蛋白水平及酶活性水平上调了SOD,并减少了由奥沙利铂引起的DLD-1细胞内产生的超氧阴离子。结论:下调SBP1能上调SOD的水平,进而减小了奥沙利铂对DLD-1细胞的毒性作用,故SBP1能通过抑制SOD增强奥沙利铂对DLD-1细胞的毒性作用。     

腹腔镜肾上腺全切术与部分切除术治疗肾上腺醛固酮腺瘤的对比研究

目的 探讨经腹腔途径腹腔镜单侧肾上腺全切与部分切除治疗肾上腺醛固酮腺瘤的围手术期及长期血压预后结果之间有无差别。方法 2004年4月至2009年6月共收治103例肾上腺醛固酮腺瘤患者,其中69例(67%)患者行腹腔镜肾上腺全切术(单侧肾上腺全切组),34例(33%)患者行腹腔镜肾上腺部分切除术(肾上腺部分切除组)。回顾性分析所有患者的临床资料,并随访其术后血压恢复情况及血浆醛固酮、血钾的变化。结果 103例手术均获成功,无中转开放手术患者。两组患者在手术时间、手术出血量、术中及术后并发症、术后醛固酮、术后血钾差异无统计学意义(P均>0.05)。在中位时间为37(9~82)个月的随访期内,单侧肾上腺全切组44例患者血压恢复正常,24例患者血压好转,1例患者血压治疗无效;肾上腺部分切除组21例患者血压恢复正常,9例患者血压好转,4例患者血压治疗无效。两组间行χ2检验差异无统计学意义。肾上腺部分切除组3例患者在术后血压曾好转,但分别在8个月、1.5年、3年血压重又升高至术前水平,且伴有血浆醛固酮的重新升高。其余100例患者的血钾及血浆醛固酮水平在术后6个月复查时均恢复到正常范围内。结论 肾上腺部分切除术治疗醛固酮腺瘤与单侧肾上腺全切术相比在术后激素不足发生率及改善术后血压等方面并无明显差别,但是肾上腺部分切除术存在复发的可能,相比之下单侧肾上腺全切术疗效更为确切,因此对于单侧肾上腺腺瘤应选用单侧肾上腺全切术。     

肺癌组织中p63和Survivin蛋白的表达及其意义

[目的]研究p63和survivin两种蛋白在肺癌组织中的表达及其临床意义。[方法]通过免疫组织化学染色检测77例肺癌组织和10例非肿瘤性肺组织中的p63和survivin两种蛋白的表达及其与肺癌的组织类型、分化程度、复发转移和预后的关系。[结果]①10例非肿瘤性肺组织中,仅在支气管的假复层柱状上皮中见到P63的表达,未见survivin表达。②肺癌组织中p63的阳性细胞百分数为(51.7±32.7)％;其在无淋巴结转移组的阳性细胞百分数明显较淋巴结转移组低(P=0.010);p63的阳性细胞百分数与肿瘤大小、组织类型、分化程度、临床分期、复发和预后均无关(P>0.05)。③肺癌组织中survivin的阳性表达率为53.2％;其在复发组和淋巴结转移组的阳性表达率均明显高于无复发组和无淋巴结转移组(P=0.025和0.015);survivin(++～+++)组的生存期明显较(-～+)组短。[结论]p63和survivin均与肺癌的发生发展有关,survivin尤其与肺癌的复发、淋巴结转移有着密切关系,它的高表达提示肿瘤患者预后不良。     

中药杏香兔耳风对大鼠宫颈粘膜EGF表达的影响

目的:探讨中药杏香兔耳风治疗宫颈炎的作用机理。方法:建立大鼠宫颈炎动物模型,分别于给药4天、10天后观察杏香兔耳风不同剂量组对大鼠宫颈粘膜表皮生长因子(EGF)表达的影响,并进行病理组织学检查。结果杏香兔耳风高、中剂量组对苯酚胶浆造成的实验性大鼠宫颈炎模型,给药4天后,可明显升高宫颈粘膜EGF表达,与模型对照组比较具有显著性差异(其中高剂量组P<0.01,中剂量组P<0.05);给药10天后,各组宫颈粘膜EGF表达无明显差异;病理组织学检查结果也表明,杏香兔耳风高、中剂量组对大鼠宫颈炎有一定的治疗作用,以高剂量组最为明显。结论:杏香兔耳风对大鼠宫颈炎治疗作用与其促进大鼠宫颈粘膜EGF的早期表达有一定关系。     

小鼠急性肺损伤后糖皮质激素受体的活性改变与热休克蛋白的关系

目的 研究急性肺损伤(ALI)后机体内糖皮质激素受体(GR)的配体结合活性显著下降与其分子伴侣热休克蛋白(Hsps)改变的关系.方法 以小鼠油酸急性肺损伤为模型,用Western blotting和受体的放射配体结合试验动态观察伤后GR、Hsp90、Hsp70和GR的结合容量和亲和力变化.结果 伤后小鼠肺组织水肿、肺体指数和肺含水量显著升高;GR在伤后1 h升高,然后显著下降,在12 h达最低点;Hsp90和Hsp70在伤后的表达逐渐升高,在12 h达最高点.配体结合试验显示在伤后GR Bmax逐渐下降,Kd值升高,与Hsp90/GR的变化趋势一致.结论 急性肺损伤后的GR配体结合活性的改变可能与Hsp90的变化有关.     

成都市学龄儿童的睡眠状况调查

目的 了解成都市学龄儿童的睡眠状况及其相关因素.方法 2005年9月～11月在成都5个城区随机抽取2848名学龄儿童,进行家庭社会环境与睡眠健康的问卷调查.结果 成都市学龄儿童的睡眠时间随年龄增加而逐年减少,各年龄组比较差异有统计学意义(P<0.05).睡眠障碍的发生率为58.08%.其中遗尿发生率为5.65%,梦呓为16.15%,睡眠不安为34.34%,梦游为2.84%,磨牙为22.86%,打鼾为10.92%,呼吸暂停为0.77%,呼吸困难为3.12%,梦魇为11.76%.男童梦游、打鼾的发生率明显高于女童,睡眠不安、磨牙的发生率有年龄差异.影响儿童发生睡眠障碍的因素有是否参加补习班、特长班;是否服用影响神经系统的食物、药物;是否经常从事兴奋性活动;抚养人,母亲孕期及产后是否有情绪低落;是否患有食物或药物过敏等.结论 目前成都市学龄儿童的睡眠时间普遍减少,睡眠障碍的发生率较高,这一现象应得到社会各方面的关心和重视.     

苇茎汤儿科临床应用经验

介绍了苇茎汤加味治疗咳嗽、慢性扁桃体炎、鼻窦炎、牙槽脓肿、便秘等儿科常见病的证治经验.认为临床凡有痈、肿、脓、痰、闭见症,伴舌红苔黄腻、证属湿热蕴结、病程较长者均可应用苇茎汤治疗.     

后胡桃夹综合征的多层螺旋CT血管造影诊断

目的研究与探讨使用多层螺旋CT血管造影(MSCTA)对后胡桃夹综合征进行诊断的方法。方法选择20例(病变组)已确诊的PNCS患者的肾血管MSCTA与60例(正常组)正常人进行D1、D2、D2/D1、S1、S2、S1/S2比较分析。结果病变组与正常组MSCATC比对显示,病变组LRV受压狭窄,回流受阻,近肾端管腔明显扩张。测量结果指标显示,两组在D1、D2/D1、S1、S2、S1/S2指标上均有显著性差异,差异有统计学意义(P<0.05)。结论使用MSCTA对PNCS进行诊断,能明显观测LRV的形态及其立体走向,测量截面积准确,能准确评估LRV受压程度,是一种新型的、无创的PNCS诊断方法。     

马齿苋的不同部位在体内外抗氧自由基作用的比较研究

目的本实验旨在研究马齿苋的叶、茎、根等不同部位在体内外的抗氧自由基作用。方法体外实验用邻二氮菲-Fe2 氧化法测定.OH,用改进的邻苯三酚自氧化法测定O-.2;体内实验以家兔为研究对象,分别喂马齿苋的叶、茎、根,10周后测定兔血清超氧化物歧化酶(SOD)及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)。结果体外实验显示马齿苋的叶、茎、根均有清除氧自由基的作用,并且茎和根的作用强于叶,有高度显著性差异;家兔体内实验表明马齿苋的茎和根有较强的抗氧自由基作用,而马齿苋叶未显现出这种作用。结论马齿苋的茎和根在体内外均有较强的抗氧自由基作用,马齿苋叶只在体外显示有一定的抗氧自由基作用。