钙调蛋白基因缺陷HIS3酵母菌株的构建和鉴定

目的：构建白念珠菌钙调蛋白基因（CMD1）缺陷HS3酵母菌体,为进一步探讨钙调蛋白基因突变对真菌生长周期及致病性的影响奠定基础。方法：首先将含cmd1::TRP1置换序列的质粒I转化二倍体酵母菌株YPH501(his3trplural）,经Soutthern印迹法筛选出含TRP1序列的菌株。其次,将含CMD1序列的质粒Ⅱ转化以上TRP1阳性菌株,进行减数分裂后选择得到TRP1阳性酵母菌株单倍体。最后,将含trp1:HIS3置换序列质粒Ⅲ转化上述TRP1阳性单倍体菌株,用不含His培养基培养得到钙调蛋白基因缺陷HIS3酵母菌株。结果：经Southern印迹法证实cmd1：TRP1基因置换克隆;减数分裂后选择得到了TRP1阳性酵母菌株单倍体;质粒Ⅲ转化单倍体后经不含His培养基培养得到CMD1缺陷HIS3菌株,接种于不含Trp倍养基上未见有菌落生长,说明质粒Ⅲ转化单倍体后已将his3TRP1转换成HIS3trp1。结论：成功构建了钙调蛋白基因缺陷HIS3酵母菌株,基因型为cmd1trp1HIS3。     

氧化低密度脂蛋白功能性调节人内皮细胞的生长调节致癌基因α

目的　探讨oxLDL对人内皮细胞的CXC亚家族趋化因子GROα的调节作用及生理意义。方法　超高速离心得LDL ,氧化后得oxLDL。逆转录PCR分析人内皮细胞系ECV30 4细胞GROαmRNA。GAPDH被用作PCR中正常改变的对照物。酶联免疫检测仪测定ECV30 4细胞表面连接及分泌到溶液中的GROα蛋白。静态细胞粘附试验测定ECV30 4细胞表面连接的GROα蛋白的生理意义。结果　正常ECV30 4细胞不表达GROαmRNA ;OxLDL显著调节其表达 ,诱导效应首先出现在处理后 1h ,最大在 2h ,在 4h时下降。相比较 ,LDL对其mRNA表达没有影响。正常ECV30 4细胞低水平表达细胞表面的GROα蛋白。OxLDL呈浓度依赖性、时间依赖性地上调其表面的GROα蛋白。相比较 ,LDL对其表面表达的GROα蛋白无调节作用。OxLDL对ECV30 4细胞分泌到细胞溶液中GROα蛋白很少有影响。 4 0 μg/mloxLDL处理ECV30 4细胞 2 4h ,造成显著的人单核细胞系U937细胞粘附到ECV30 4细胞数目的增加。用GROα抗体预处理oxLDL刺激的ECV30 4细胞 ,可显著减低U937细胞粘附到ECV30 4细胞的U937细胞数目 (大约 2 / 3)。结论　oxLDL可能功能性上调内皮细胞GROα的表达。     

不同术后镇痛方法对血浆肾素—血管紧张素Ⅱ—醛固酮系统的影响

目的：观察不同术后镇痛方法对子宫切除术患血浆肾素－血管紧张素－醛固酮（R－A－A）系统的影响。方法：将36例ASAⅠ－Ⅱ级子宫切除术患,随机分为持续硬膜外输注镇痛（CEA）组、持续静脉输注镇痛（CLA）组和哌替啶肌注镇痛（MA）组,每组12例。分别于麻醉前（T0）、术毕使用镇痛药前（T1）、术后4小时（T2）和术后第一天晨7时（T3）采静脉血测定血浆肾素、血管紧张素Ⅱ和醛固酮浓度。结果：与T0比较,肾素水平CEA组、CLA组在T3同,MA组在T2显降低（P＜0.01）;血管紧张素ⅡCEA组在T2、T3和MA组在T3均显降低（P＜0.01）;醛固酮CEA组在T3显降低（P＜0.01）,MA组在T2升高（P＜0.01）,而T3时降低（P＜0.01）。组间比较,CEA组、MA组在T2和T3时肾素、血管紧张素Ⅱ、在T3时醛固酮浓度显低于CIA组（P小于0.05或0.01）。结论：CLA患R－A－A系统较稳定,CEA患R－A－A系统被抑制。     

人体胆结石高能震波碎石的动物实验

目的　研究人体 3种胆结石在一定能量下 ,冲击次数和能量的关系 ,确定不损伤胆囊和小肠内膜的能量安全阈值 .方法　犬胆囊和小肠内放入固醇石、混合石和色素石 ,在不同的输出电压下 ,放电碎石 .结果　固醇石、混合石和色素石破碎所需的能量不同 ,在同样电压下 ,固醇石所需的次数最少 ,混合石次之 ,色素石最多 ;病理检查表明 ,在电压 <15 k V时 ,胆囊和小肠粘膜处 ,细胞膜轻度充血 ,出现小出血点 .当电压 >15 k V后 ,粘膜有脱落 ,膜下组织水肿 .结论　电压具有依赖性 ;该仪器临床应用的冲击电压应小于 15 k V     

L-NAME对肝硬化大鼠胃肠道中一氧化氮合酶亚型表达的影响

目的 研究一氧化氮合酶亚型（NOS1,NOS2,NOS3）在肝硬化大鼠胃肠道中的表达,并探讨NOS抑制剂左旋硝基精氨酸甲基酯（L-NAME）对其表达的影响。方法 制作大鼠四氯化碳中毒肝硬化模型,肝硬化模型大鼠随枘发为NO合酶（NOS）抑制剂治疗组和未治疗组,模型治疗组用L-NAME0.5mg.kg^-1.d^-1,胃内注入,每日1次,治疗10d,免疫组织化学染色显示胃肠道组织中型NOS的染色强度和分布,Western blot法检测胃肠道组织中各型NOS的表达。结果 模型组大鼠胃、小肠、结肠组织 的NOS染色强度显著弱于正常对照组和L-NAME治疗组大鼠。Western blot显示在肝硬化模型大鼠胃、小肠、结肠组织中的各型NOS表达均明显降低,L-NAME治疗后又恢复至接近正常。结论 肝硬化大鼠胃肠道组织中各型NOS的表达明显减少,L-NAME对其表达有调节作用。     

半套式PCR和DNA探针技术检测Q热立克次体

目的 建立半套式PCR和DNA探针技术由于检测Q热立克次体。方法 依据已知的Q热立克次体的16S和23S rRNA基因及其间区的序列。设计3条引物,建立了扩增16S－23S mRNA基因间区的半套式PCR方法,并将扩增片段制成探针,建立了斑点杂交技术。结果 10株Q热立克次体分离株均可扩增出572bp的PCR条带,而对照菌都为阴性,此半套式PCR方法的灵敏度高达1pg;用九里株扩增片段标记后制成的探针,与10个Q热立克次体分离株的全DNA呈阳性杂交,对照菌为阴性,此杂交方法的灵敏度为0．5ng。结论 基于Q热立克次体16S－23S rRNA基因间区的半套式PCR和DNA探针技术具有较好的特异性和灵敏度,可联合应用于Q热的病原学诊断。     

检测先心病患儿EEG和BAEP的意义

目的　评价先心病儿心脏手术前后脑电图 (EEG)、脑干听觉诱发电位 (BAEP)的变化。方法　对 30例先心病儿童术前EEG、BAEP的变化和 2 0例接受不停跳体外循环心内直视手术患儿手术前后EEG、BAEP的动态变化进行对比观察 ,并设 30名健康儿童为对照。结果　 ( 1)术前 :①EEG :发绀组 (CCHD)异常率为 80 % ( 8/ 10 ) ,非发绀组 (NCCHD)异常率为 30 % ( 6 / 2 0 ) ,有显著性差异(P <0 .0 5 )。②BAEP :CCHD组异常率为 10 0 % ( 10 / 10 ) ,NCCHD异常率为 6 5 % ( 13/ 2 0 ) ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,Ⅴ波潜伏期 (PL)、Ⅲ～Ⅴ、Ⅰ～Ⅴ波峰间潜伏期 (IPL)先心病患儿与对照组比较 ,CCHD组显著延长 (P <0 .0 5 )。③EEG与BAEP :EEG异常者BAEP均异常 ( 10 0 % ) ,EEG正常者BAEP有 5 6 .3 %异常。 ( 2 )手术前后比较 ,EEG和BAEP异常率有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论　①先心病患儿伴有脑功能异常 ,CCHD较NCCHD为重。②EEG与BAEP均可反映脑功能异常改变但非同步。③术后短期内EEG、BAEP无好转 ,提示脑功能恢复可能需要较长时间。     

脊髓损伤的MRI诊断

目的:探讨脊髓损伤的MRI表现。方法：收集脊髓损伤患者90例,其中男68例,女22例,平均年龄35岁。应用GE Signa contour 0.5T(40例）和SIEMENS Open 0.2T（50例）磁共振机,脊柱表面线圈,自旋回波序列做轴位和矢状位T1WI、T2WI扫描,其中10例加作冠状线圈。结果：90例患者共发现各种脊髓损伤106例次,其中脊髓完全、不完全性横断14例次（占13.2％）,水肿11例次（10.4％）,挫伤、出血27例次（25.5％）,受压、扭曲27例次（25.5％）,软化16例次（15.1％）,萎缩11例次（10.4％）。结论：MRI表现能反映脊髓损伤的形态和病理改变,是评价脊髓损伤的好方法,不仅可以指导治疗方案的选择,还有助于判断预后。     

慢性重型肝炎的血清生化指标对预后的影响

目的:探讨慢性重型肝炎(Chronic serious hepatitis,CSH)血清生化指标与预后的关系。方法:225例CSH患者,根据2000年北京传染性疾病会议制定的标准。分为早、中、晚3期,分别检测患者血清中总胆红素(TB)、白蛋白(A)、尿素氮(UN)、肌酐(CR)和胆碱酯酶(CHE)。10例病人同时进行肝脏穿刺病理检查,并观察合并症及预后。结果:早、中、晚3期TB(μmol/L)依次为326.62±111.03、399.80±125.60、385.05±107.84,早期与中、晚期对比,P<0.001;A(g/L)为32.48±4.64、29.66±5.72、29.26±3.69,早期与中晚期相比P<0.001;CHE(μ)2664.25±1004.27、1997.12±833.30、1997.23±874.39,早期与中晚期相比P<0.01;UN为20.23±8.84、21.39±8.78、25.58±10.02,早期与晚期相比P<0.01;CR为85.09±59.73、91.78±60.64、124.37±85.72,早期与晚期相比P<0.01。肝穿结果显示,CSH晚期大块、亚大块坏死较多,瘀胆严重,合并症多。结论:本文结果显示,CSH血清生化指标中TB、CR、UN越高,A、CHE越低,肝脏病理损伤越重,合并症越多,预后越差。     

异基因外周血干细胞的动员,检测及临床移植的应用研究

目的：探讨异基因外周血干细胞移植（ａｌｌｏ－ＰＢＳＣＴ）供者经Ｇ－ＣＳＦ或Ｇ－ＣＳＦ＋ＧＭ－ＣＳＦ动员后,采集的外周血干细胞（ＰＢＳＣ）移植物中的幼稚粒细胞与单个核细胞（ＭＮＣ）、ＣＤ３４＾＋细胞及ＣＦＵ－ＧＭ之间的相关性和移植的剂量标准及临床应用效果。方法：对１１例ａｌｌｏ－ＰＢＳＣＴ供者用Ｇ－ＣＳＦ（９例）或Ｇ－ＣＳＦ＋ＧＭ－ＣＳＦ（２例）进行动员,于动员前及动员后,分别对外周血及ＭＮＣ惧物中的幼稚粒细胞、ＣＤ３４＾＋细胞及ＣＦＵ－ＧＭ进行检测计数,预处理方法主要用大剂量环磷酰胺（ＣＴＸ）＋全身照射（ＴＢＩ）。结果：动员后外周血中的幼稚粒细胞与ＣＤ３４＾＋细胞及ＣＦＵ－ＧＭ同步增加,外周血ＭＮＣ中的幼稚粒细胞数与ＣＤ３４＾＋细胞数及ＣＦＵ－ＧＭ有较好的相关性。１１例患者全部植活和恢复造血功能,并为染色体核型