从人分离出两株甲型流感H9N2亚型毒株内部基因特性的研究

目的 了解2株从人分离出的H9N2亚型毒株内部基因特性，并弄清其来源。方法 用RT-PCR扩增目的基因，用P^CEM-T Vector(美国Promega公司)，4℃过夜连接，重组质粒转入dH5a细菌，筛选阳性菌落，酶切鉴定，送六合通公司自动测序。然后进行进化树分析。结果 2株测定毒株内部基因均为G9基因系，它们相互间除PA基因有差异外，其余5个基因均相同。结论 2株测定毒株的基因组均为G9基因系，它们是由携带不同基因特性H9N2毒株的禽群分别直接感染人，而不是来自同一禽的H9N2亚型流感病毒。     

常见呼吸道病毒分子鉴别诊断技术的建立

目的 建立一种常见呼吸道感染病毒的快速检测方法,为尽早诊断、减少疾病的传播以及为临床提供良好的治疗依据.方法 采用液体芯片检测技术结合靶向多重RT-PCR技术建立可以同时检测13种呼吸道病原的检测技术.结果 该方法特异性方面检测13种常见呼吸道病毒没有交叉,标本的检出率为100%;灵敏度方面达到10e2-10e1（pfu/ml）.结论 该分子鉴别诊断可应用常见呼吸道病毒的检测,协助诊断病毒引起的病毒性呼吸道感染.     

碱性成纤维细胞生长因子对卵巢癌CAOV3细胞cyclin D1及GADDl53表达的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人卵巢癌CAOV3细胞细胞周期调节蛋白cyclinD1及GADD153表达的影响,探讨bFGF促进人卵巢癌CAOV3细胞增殖、抑制凋亡的信号机制。方法:利用无血清饥饿诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡。分为对照组、bFGF组。分别应用MTT、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳观察25、50、75μg/L bFGF对CAOV3细胞增殖率、细胞周期及细胞凋亡的影响。利用Western blotting检测bFGF对CA-OV3细胞cyclin D1、GADD153以及转录因子(c-Fos、c-Jun)表达的影响。结果:与对照组相比,bFGF呈剂量依赖性加速CAOV3细胞细胞周期进程,促进细胞增殖,抑制饥饿诱导的凋亡(P<0.01);呈时间依赖性促进cyclinD1、c-Fos、c-Jun,抑制GADD153蛋白表达(P<0.01)。结论:bFGF可能通过上调cyclin D1、c-Fos、c-Jun,下调GADD153表达促进细胞增殖,抑制饥饿诱导的卵巢癌CAOV3细胞凋亡。     

HIV/AIDS人员心理卫生状况与心理社会影响因素

目的 :研究HIV/AIDS (艾滋病毒感染者 /艾滋病患者 )人群的心理卫生状态与心理社会因素的影响。方法 :采用病例对照研究方法。病例组与对照组两组对象均接受一般情况问卷、症状自评量表(Symptomchecklist 90 ,SCL -90 )、生活事件量表 (LifeEventScale ,LES)、生活质量综合评定问卷 (GenericQualityofLifeInventory -74,GQOLI -74)、自我接纳问卷 (Self -AcceptanceQuestionnaire ,SAQ )五个量表的测查。结果 :(1)病例组的SCL -90各个因子分高于对照组 (P <0 0 0 1) ;(2 )病例组总生活事件和负性生活事件得分高于对照组 (P =0 0 0 1) ;(3 )病例组自我接纳得分低于对照组 (P =0 0 0 1) ;(4 )病例组生活质量综合评定得分低于对照组 (P <0 0 0 1) ;(5 )多因素逐步回归分析 ,SCL -90总因子分相关因素主要为躯体症状严重程度 (负向评分 )、负性生活事件和自我接纳因子 ,躯体症状严重程度与SCL -90总因子分呈负相关 ,负性生活事件得分与SCL -90总因子分呈正相关 ,自我接纳得分与SCL -90总因子分呈负相关。结论 :HIV/AIDS组较对照组心理健康状态有明显差异 ,有较多的负性生活事件 ;自我接纳得分低于对照组 ;生活质量低于对照组。     

针对S基因的siRNA或shRNA表达框对HepG2.2.15细胞中HBV基因表达和病毒复制的抑制作用比较

目的 化学合成针对乙型肝炎病毒（HBV）S基因的siRNA，同时制备针对相同区段的shRNA表达框，并比较二者对HepG2．2．15细胞中HBV基因表达和病毒复制的抑制作用。方法 化学合成针对HBVS基因的带有FITC标记的siRNA，设计合成带有FTrc标记的引物，PCR扩增含有RNA聚合酶Ⅲ启动子H1序列和shRNA编码序列的表达框，并对扩增产物进行纯化，将等摩尔数siRNA和shRNA表达框分别用脂质体转染稳定表达HBV的HepG2．2．15细胞，转染1d后流式细胞仪检测转染效率，转染3d后RT-PCR检测靶基因mRNA的水平，用SDS-PAGE、Westem blot及间接免疫荧光染色检测HBsAg的表达。收集转染前和转染后1、3、5和7d的细胞培养上清，检测HBsAg水平，同时用荧光定量PCR方法检测HBV　DNA的含量。结果成功制备了针对HBVS基因的shRNA表达框，将其与等摩尔数siRNA分别转染HepG2．2．15细胞后，RT-PCR证实细胞中HBV　mRNA水平降低，SDS-PAGE、Westem blot及间接免疫荧光染色检测到HBsAg的表达受到抑制，细胞培养上清中HBsAg和HBV DNA含量下降。与siRNA相比，shRNA表达框对HBV的抑制作用虽然起效较慢，但持续时间更长。结论shRNA表达框和siRNA均可明显抑制HBV的转录和表达，与siRNA相比，shRNA表达框能够更持久地抑制靶基因的表达。     

survivin的siRNA靶向干扰膀胱癌的实验研究

目的实验研究靶向转染survivin的小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）对膀胱癌生物学行为的影响。方法设计1对survivin编码基因序列特异的siRNA，用脂质体转染T24膀胱癌细胞株。采用流式细胞术检测转染效率和细胞凋亡；荧光实时定量PCR检测干扰前后survivin的mRNA表达；用survivin的siRNA片段插入空载体后建立重组载体pRNAT-U6、1／Neo-survivin。结果脂质体转染T24细胞后的转染效率为92．3％；survivin编码基因序列特异的siRNA能有效下调survivin基因的表达，呈时间和剂量依赖性，最大效应浓度为100nmol／L，此时survivin表达水平下调了75．91％，并显著地抑制了细胞生长，抑制率达55．29％，差异有统计学意义（P〈0．01）；细胞凋亡率亦增至45．70％，与对照相比差异有统计学意义（P〈0．01）。用限制性内切酶将空载体线性化，T4DNA连接酶将siRNA片段插入空载体中，对该重组表达载体进行鉴定，获得RNA干扰质粒载体pRNAT-U6．1／Neo-survivin。结论siRNA．survivin能显著下调膀胱癌细胞survivin基因表达水平，促进细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖，可能成为膀胱癌基因治疗的新工具。成功构建的靶向survivin基因表达的RNA干扰质粒载体为进一步应用RNA干扰技术进行survivin基因功能研究奠定了基础。     

基于PACS的MRI影像多媒体教学与报告系统的研究

目的：开发基于医院影像归档和通讯系统（picture archiving and communication system，PACS）环境的MRI（磁共振显像）影像多媒体教学与报告系统。方法：医院PACS系统符合DICOM3.0标准，采用1000M光纤主干网，100M交换到桌面；在临床医生浏览工作站安装多媒体教学系统，在诊断工作站安装教学系统与报告系统；科学内容按部位分类，以树枝模式管理。教学字资料来源于具有一定权威的教科书、专及期刊。图像资料来源于各部位经病理及临床证实的病例，直接从PACS系统提取，经标注说明后，以件形式存放于PACS图像服务器硬盘。结果：MRI辅助影响教学系统能够实时调阅最合适病种的MRI征象、临床特点、病理、鉴别诊断、典型图像及注释、正常断面解剖等，供教学、诊断和报告参考。结论：PACS环境下MRI辅助影像学系统，能满足临床医生和低年资影像诊断医生对MRI影像知识进一步继续医学教育的需求，能为影像诊断医生提供教学及科研工具，提高MR室工作质量和工作效率。     

人NRAGE基因重组腺病毒载体的构建及其对293细胞细胞周期的影响

目的构建hNRAGE基因的重组腺病毒载体,并研究其对293细胞细胞周期的影响。方法采用PCR方法扩增hNRAGE基因片段,并亚克隆至腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack-CMV中,构建穿梭质粒pAdTrack-CMV/hNRAGE。经测序检测后,用PmeI酶切使pAdTrack-CMV/hNRAGE被线性化,然后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1用电穿孔法共转化大肠杆菌BJ5183,进行同源重组。经PacI酶切鉴定后,用磷酸钙法转染QBI-293A细胞,包装成重组体腺病毒Ad-hNRAGE颗粒。利用穿梭质粒pAdTrack-CMV中GFP报告基因的表达,观察重组腺病毒的产生,测定病毒颗粒的浓度。用Western blot检测目的基因的表达。采用MTT法检测293细胞的活力,用流式细胞术分析hNRAGE基因对293细胞周期的影响。结果成功地构建hNRAGE重组腺病毒载体。Western blot检测结果证实,hNRAGE基因可在293细胞中表达。收获病毒后,经测定病毒颗粒的浓度大约为6.5×109个/μL。转染了重组腺病毒Ad-hNRAGE的293细胞与正常细胞相比较,增殖率显著降低,G0-G1和G2-M期的细胞增多,S期的细胞明显减少。结论hNRAGE基因可能有抑制293细胞生长的作用。     

TIM2转基因细胞瘤苗对小鼠作用的初步研究

目的 观察小鼠TIM2转基因H22肝癌细胞瘤苗在小鼠体内的成瘤作用 ,初步研究其免疫原性.方法 构建TIM2基因真核表达载体pIRES2-EGFP - TIM2,脂质体法转染H22细胞,制备得到TIM2基因修饰的H22细胞瘤苗,建立小鼠肝癌移植瘤模型,观察其在小鼠体内的成瘤作用.结果 成功得到TIM2基因修饰的H22 细胞瘤苗,免疫接种小鼠后,可明显抑制小鼠体内肿瘤的发生和发展;给予H22-TIM2接种的小鼠CD4亚群、CD4/CD8比值显著高于H22-EGFP 细胞接种组、荷瘤对照组和正常对照组.结论 TIM2基因修饰H22细胞后,可显著降低H22细胞的体内成瘤性,抑制小鼠肿瘤生长,同时.在体内具有一定的免疫原性,为进一步探讨TIM2 在肿瘤生物治疗中的作用提供了初步的实验依据.     

转染肿瘤坏死因子-α及MDR1反义RNA逆转乳腺癌多药耐药的研究

目的：转染肿瘤坏死因子-α(TNF-α)cDNA和多药耐药基因(MDR1)的反义RNA到乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR中进行表达，并观察它们在乳腺癌耐药逆转中的作用。 方法：应用RT-PCR和DNA重组技术构建反义绿色荧光蛋白pEGFP-MDR1融合蛋白表达载体和红色荧光蛋白pDsRed2-TNF-α融合蛋白表达载体，分别和同时导入乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR中进行表达，检测转染前后细胞的生长曲线、细胞凋亡程度、MDR1-mRNA和P糖蛋白（P-gp）表达情况及对ADR敏感性的变化。 结果：转染后的细胞生长明显减慢，凋亡率显著增加，MDR1-mRNA和P糖蛋白（P-gp）表达明显降低，对ADR的耐药性明显下降，敏感性增加。 结论：联合运用不同的逆转耐药机制，将TNF-α cDNA及MDR1反义RNA分别或同时导入乳腺癌耐药细胞中，能有效达到逆转耐药的目的。