大鸨(Otis tarda limaells)胰腺超微结构研究

目的　观察大鸨胰腺超微结构 ,探讨大鸨胰腺功能。　方法　透射电镜观察 3例大鸨胰腺。　结果　大鸨的胰外分泌部为管泡状腺 ,腺小叶由于缺乏叶间结缔组织而界限不如哺乳动物的明显。叶间隙似导管 ,小叶间导管管壁简化以至由胰腺分泌细胞代替。仅在 3个小叶间能见到单个长梭状结缔组织细胞 ,其胞质变细伸展进入两叶间隙中间构成 1条中等密度线。外分泌细胞可分为明暗两种。胰的内分泌细胞呈岛状或单个散布于胰外分泌腺中。胰岛分A和B两种 ;A胰岛仅由A细胞构成。B胰岛主要由B和D两种细胞构成 ,其中B细胞数量多 ;D细胞含量少。　结论　大鸨胰腺具有一些不同于其他动物及适应于飞翔的结构特点     

儿童蜗神经孔发育不良的低剂量螺旋 CT 诊断简

目的探讨在低剂量CT扫描条件下儿童蜗神经孔发育不良的CT诊断。方法蜗神经孔发育不良患儿35例,其中男性15例,女性20例：年龄3个月～12岁,中位年龄6岁。在低剂量CT扫描的条件下观察35例（48耳）感音性神经耳聋患儿蜗神经孔横径．探讨蜗神经孔发育不良的CT特征。结果诊断蜗神经孔狭窄23例31耳,轴位孔径最大1．4mm,最小O．5mm。双侧8例．单侧15例：其中左侧9例,右侧6例。蜗神经孔封闭12例17耳,双侧5例,单侧7例;其中左侧3例．右侧4例。30耳内听道狭窄,约占63％。结论儿童蜗神经孔发育不良的CT表现为蜗神经孔狭窄或封闭．低剂量螺旋CT扫描是蜗神经孔发育不良的有效诊断方法。     

基质细胞衍生因子-1α和白细胞介素-1β诱导淋巴管内皮表型的作用

目的探讨基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)及白细胞介素-1β(IL-1β)诱导内皮细胞表达淋巴管表型的作用。方法 SDF-1α和IL-1β分别诱导内皮细胞株CRL-1730,用Real-time PCR、Western blotting及免疫细胞化学等方法检测其内皮及淋巴管标志物,的表达情况。结果 SDF-1α诱导培养之后,CRL-1730细胞株的内皮细胞标志物血管性血友病因子(vWF)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)2随其浓度增高而表达降低,淋巴管标志物平足蛋白(podoplanin)、同源异形盒蛋白-1(Prox-1)和淋巴管内皮透明质酸受体-1(LYVE-1)随其浓度增高而表达增高。IL-1β诱导之后,CRL-1730细胞株的vWF、VEGFR2和podoplanin、prox-1、LYVE-1的变化趋势同SDF-1α,而VE-cadherin的表达量基本不变。结论 SDF-1α和IL-1β都能够诱导血管内皮细胞表达淋巴管标志物。     

Increased Expression of Macrophage Migration Inhibitory Factor and DJ-1 contribute to Cell Invasion and Metastasis of Nasopharyngeal Carcinoma

Background and aim: Both macrophage migration inhibitory factor (MIF) and DJ-1 protein have been shown to relate with cell invasion and metastasis in tumors. However, the role of DJ-1 in invasion and metastasis of nasopharyngeal carcinoma (NPC) and its relation to MIF expression in NPC are not fully understood. The aim of present study is to determine whether or not MIF and DJ-1 are correlated with tumor invasion and influence a worse outcome in NPC, as well as its related mechanism.Methods: 125 cases of NPC and 45 normal tissues of nasopharynx were collected. The expression of MIF and DJ-1 in tissue microarray was evaluated by immunohistochemical staining. Correlation between immunostainings and clinicopathological parameters, as well as the follow-up data of patients, was analyzed statistically. The association of MIF and DJ-1 with cell invasion and migration in NPC cell line were evaluated by small interfering RNA (siRNA) transfection, invasion assay and Western blotting.Results: MIF and DJ-1 staining was diffused and strong in tumor cells, whereas they were generally weaker and less common in normal lining epithelia of nasopharynx. High MIF expression in tumor cells (71.2%, 89/125 cases) were significantly associated with advanced clinical stage, lymph node metastasis, and worse prognosis of NPC patients. High expression of DJ-1 (75.2%, 94/125 cases) were closely correlated to lymph node metastasis and MIF high-expression. Only MIF high expression (P = 0.010) and lymph node metastasis (P = 0.004) emerged as strong independent prognostic factors for overall survival of NPC patients. In vitro, down-regulated expression of DJ-1 in NPC cell lines by siRNA was observed to reduce cell migration and invasion potential, however, exogenous MIF promoted cells invasion.Conclusions: The data provided evidence that increased expression of MIF and DJ-1 induced cell invasion and metastasis of NPC, supporting the idea that MIF and DJ-1 may play important roles as regulators in the progression of NPC.     

一种骨桥蛋白小分子肽的原核表达与生物学活性鉴定

目的： 用大肠杆菌（E.coli）表达骨桥蛋白13肽(OPN 13),经亲和层析纯化后检测其生物学活性。方法：运用基因重组技术,将骨桥蛋白分子中含黏附序列的13肽cDNA片段与携带His编码序列的原核表达载体连接构建融合蛋白表达质粒pET-32c-OPN13。将重组质粒转化E.coli DH 5α宿主菌后,对诱导融合蛋白表达的条件进行优化。表达产物His-OPN13经Ni-NTA His Bind Resin金属离子螯合层析纯化后,分别检测其对骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞黏附和迁移的影响。结果：所表达的His-OPN13融合蛋白在宿主菌中以胞浆可溶性的形式存在。经亲和层析可得到高纯度的His-OPN13融合蛋白。产物活性分析表明,His-OPN13融合蛋白能特异性地抑制骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞的黏附和迁移。结论：OPN13肽可在大肠杆菌中高效表达,并可剂量依赖性地抑制血管平滑肌细胞黏附和迁移活性。     

利用亮甲酚蓝染色筛选优质猪卵母细胞

目的 利用亮甲酚蓝(BCB)染色提高猪体外胚胎培养体系的效率.方法 对猪卵丘卵母细胞复合体(COCs)进行BCB染色,观察染色后猪卵母细胞成熟率和早期胚胎发育能力并进行分析. 结果 着色组(BCB+)猪卵母细胞达到减数分裂Ⅱ(MⅡ)期的比率(91.6%)显著高于未着色组(BCB-)(64.0%)和对照组猪卵母细胞(77.5%)(P<0.05);BCB+孤雌猪胚胎的囊胚率(34.9%)显著高于BCB-(9.5%)和对照组(23.1%)(P<0.05);BCB+核移植猪胚胎的囊胚率(23.0%)显著高于BCB-(5.0%)和对照组(14.1%)(P<0.05).结论 BCB染色是一种有效筛选具有较强发育能力猪卵母细胞的方法.     

子野小数机器跳数取整对鼻咽癌静态调强放射治疗计划剂量学的影响

目的:探讨Prowess5.1计划系统在鼻咽癌静态调强放疗（IMRT）计划设计时子野小数机器跳数（MU）的四舍五入取整对计划剂量学的影响。 方法:选择33例病理诊断明确的鼻咽癌患者的IMRT计划纳入研究,分为两组计划:计划系统优化完成的原始计划组为Porig;对原始计划组的子野小数机器跳数四舍五入取整,做最终剂量计算后生成新计划组Pnew。两组计划所有子野形状未改变,比较两组计划的MU变化及剂量学差异。 结果:两组计划所有靶区的CI和HI相近,差异均无统计学意义;Pnew组靶区覆盖率、PGTVnd的D98、D95、D2、Dmean及PTV2的D98、D95,Pnew组均低于Porig组（P<0.05）,PGTVnd、PTVnx和PTV1的V100%分别降低了1.807%、0.655%和1.258%;危及器官仅左颞叶的Dmean差异具有统计学意义（P<0.05）;对于P1计划,单次Pnew比Porig跳数增加了1.600,差异具有统计学意义（519.758±46.410 vs 518.158±46.693, P<0.05)。 结论:Prowess5.1计划系统在制定鼻咽癌静态调强IMRT计划时,子野小数MU的微小变化会引起剂量学的变化,临床实践中应引起重视。     

微管相关蛋白1轻链3及Beclin-1在硅沉着病大鼠肺泡巨噬细胞中的表达

目的观察自噬相关蛋白——微管相关蛋白1轻链3(LC-3)、Beclin-1在硅沉着病大鼠肺泡巨噬细胞中的表达,从细胞自噬角度探讨硅沉着病形成的分子机制。方法 50只成年雄性SD大鼠随机分为2组(n=25):对照组和硅沉着病模型组,每组再分5个时相组。采用非暴露气管灌注二氧化硅(SiO2)粉尘混悬液法(50g/L)建立大鼠硅沉着病模型。分别于造模后1、3、7、14及28 d分批处死5只大鼠,进行原位支气管肺泡灌洗,获取肺泡巨噬细胞,进行培养纯化和富集后用于后续研究。HE染色及透射电子显微镜观察肺泡巨噬细胞形态学改变;免疫细胞化学法检测LC-3、Beclin-1的表达及分布;免疫印迹法检测LC-3、Beclin-1的蛋白表达量。结果与对照组相比模型组肺泡巨噬细胞体积较大,胞质丰富,部分细胞内可见硅沉着吞噬颗粒,电镜下可见自噬体形成;模型组LC-3、Beclin-1在各时间点的表达较对照组均增多(P0.05),1 d即开始增多,随着时间的延长表达逐渐增多,至14 d时达高峰(P0.05),28d时回落,但仍高于对照组的表达。结论在硅沉着病大鼠肺泡巨噬细胞中有自噬的激活,肺泡巨噬细胞自噬参与了大鼠硅沉着病的病理进程。     

XAV939抑制人神经母细胞瘤细胞的增殖

目的探讨小分子抑制剂XAV939对人神经母细胞瘤(NB)细胞系SH-SY5Y细胞的抗增殖和诱导凋亡的作用,及其可能机制。方法采用MTT法检测XAV939对SH-SY5Y细胞活力的抑制作用,并确定最佳作用浓度。然后采用Annexin V-FITC法检测XAV939处理后早期凋亡细胞百分比,Hoechst33342染色法观察凋亡细胞核形态,克隆形成实验检测细胞体外增殖能力的变化。Western blotting检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin信号通路的关键蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2的变化。结果 MTT结果显示,1μmol/L XAV939作用24h后,SH-SY5Y细胞增殖的抑制率有明显上升。XAV939处理后48h及72h,凋亡细胞百分比显著高于对照组,且细胞呈现出不同程度的凋亡形态。此外,XAV939可显著降低SH-SY5Y细胞的体外克隆形成率,降低Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin,Cyclin D1和c-Myc及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 XAV939可能部分通过抑制Wnt/β-catenin信号通路而抑制SH-SY5Y细胞的增殖。     

表达H9N2禽流感病毒HA1蛋白的转基因和缓艾美耳球虫的构建

H9N2亚型禽流感病毒已经被证实可以传播到人类,对它存在的潜在危害已受到越来越多的关注。因此,研究安全而有效的H9N2禽流感病毒疫苗已迫在眉睫。为研究和缓艾美耳球虫作为活载体表达及运输禽流感病毒抗原的潜能,本研究构建了可稳定表达H9N2禽流感病毒HA1蛋白的转基因和缓艾美耳球虫。利用黄色荧光蛋白（YFP）及融合的乙胺嘧啶抗性基因（DHFR-TSm2m3）作为报告基因及筛选基因,我们将表达H9N2禽流感病毒HA1抗原的质粒载体核转球虫子孢子,接种鸡后在乙胺嘧啶药物的选择压力下进行筛选并连续传代获得转基因和缓艾美耳球虫系。利用染色体步移和免疫印迹证实了HA1基因的成功插入和表达;利用间接免疫荧光证实HA1蛋白定位于球虫子孢子细胞膜表面和头部。研究进一步发现,转基因球虫的繁殖力与野生球虫相当,感染后亦于第6d达到排卵囊高峰。该转基因和缓艾美耳球虫株具有作为疫苗活载体的潜能。