应用单细胞多重PCR进行性别鉴定

目的建立一种准确、快速、简便的在单细胞水平进行性别鉴定的技术.方法应用多重 PCR同时扩增单个活检细胞的Y染色体特异重复序列(DYZ1)及X染色体特异重复序列(DXZ1).结果 40个淋巴细胞(XY)成功地扩增出DXZ1电泳带(316bp)和DYZ1电泳带(154bp),正确率为100%;40个淋巴细胞(XX)中有39个成功地扩增出一条DXZ1电泳带(316bp),正确率为98%.结论采用DYZ1和DXZ1引物对单个细胞同时扩增进行性别鉴定是一种简单可靠的方法,可用于胚胎种植前诊断及无创性产前诊断.     

重组鸡Igλ轻链真核细胞分泌表达及其单克隆抗体的制备与鉴定

目的: 构建重组载体pcDNA-λ并在COS7细胞分泌表达鸡Igλ轻链, 制备抗鸡Igλ轻链的单克隆抗体(mAb).方法: PCR扩增带有信号肽的鸡Igλ轻链基因, 限制性酶切消化后, 定向克隆于真核表达载体pcDNA3, 构建具有6×His标签、分泌表达的重组载体pcDNA-λ.重组载体转染COS7细胞后, SDS-PAGE分析真核表达载体pcDNA-λ在COS7细胞的分泌表达.用2×106个雏鸡B淋巴细胞免疫BALB/c小鼠, 取脾细胞与骨髓瘤细胞融合, 分别采用细胞免疫荧光和间接ELISA筛选阳性杂交瘤克隆.结果: 成功构建分泌表达鸡Igλ轻链的重组载体, SDS-PAGE分析表明在COS7细胞上清有目的蛋白的分泌表达.杂交瘤细胞经筛选与鉴定, 获得2株分泌抗鸡Igλ轻链mAb的杂交瘤细胞株, Western blot检测到该mAb对重组鸡Igλ轻链的反应性.结论: 构建了重组表达载体pcDNA-λ并在COS7细胞上清分泌表达了重组鸡Igλ轻链.并用淋巴细胞杂交瘤技术成功筛选出抗鸡Igλ轻链mAb.为深入研究鸡Igλ轻链的结构与功能奠定了基础.     

跟骨关节内移位骨折的手术治疗

目的探讨切开复位内固定治疗跟骨关节内移位骨折的临床效果。方法骨折采用Sanders分型法，43例52侧采用切开复位内固定治疗，有37例45侧获得3～37个月随访，平均随访时间15个月。结果所有骨折均愈合。按Maryland足部评分系统评价，本组优19侧（42．2％），良21侧（46．7％），可5侧（11．1％），优良率88．9％。结论切开复位内固定是治疗跟骨关节内移位骨折的有效方法。应尽量恢复关节面的平整和跟骨的外形。     

神经节苷脂GM1对新生大鼠缺氧缺血性脑病的作用研究

目的 探讨单唾液酸四己糖神经节苷脂（GM1）对新生大鼠缺氧缺血性脑病（HIE）及其后的癫痫发作是否具有保护和预防作用以及可能作用机理，为临床应用GM1治疗HIE提供理论依据。方法 建立新生大鼠HIE模型。用组织化学方法和免疫组织化学方法观察缺氧缺血后脑损害的形态学改变，兴奋性氨基酸Glu阳性（Glu-IR)神经元和抑制性氨基酸GABA阳性（GABA-IR）神经元表达和GM1对上述变化的影响。结果 盐水处理组与GM1治疗组相比病变较重，Glu-IR神经元和GABA-IR神经元数目减少与GMI治疗组差异有显著性意义。结论 GM1能够在一定程度上减轻新生大鼠缺氧拭岂血后病损灶，保护Glu-IR神经元和GABA-IR神经元，尤其是对GABA-IR神经元的保护作用，提示GM1对新生大鼠缺氧缺血后的癫痫发作具有一定的预防作用。但尚需进一步探讨研究。     

脂肪分化相关蛋白反义寡核苷酸抑制细胞内胆固醇积聚及其在动脉粥样硬化中的改变

目的：研究ADRP与As发生和发展的关系。方法： 使用80 mg/L Ox-LDL和/或1 mmol/L反义ADRP寡核苷酸与小鼠腹腔巨噬细胞共孵育72 h。测定细胞内胆固醇酯；油红O染色显示细胞内中性脂质；RT-PCR和Western blotting观察反义寡核苷酸对ADRP表达的影响。高胆固醇饲料喂养新西兰白兔12周，复制As模型。测定血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯及动脉壁胆固醇；苏丹Ⅳ染色显示主动脉病变面积；HE染色观察主动脉及肝脏的病变；免疫组织化学方法显示ADRP在主动脉病变区及肝脏中的表达。 结果： 反义ADRP寡核苷酸使细胞内胆固醇酯由（46.6±3.4）mg/g protein下降到（19.9±1.9）mg/g protein，细胞内中性脂质明显减少，ADRP基因和蛋白的表达显著下降。喂高胆固醇饲料的动物血清TC、LDL-C、TG及动脉壁胆固醇显著升高，主动脉病变面积为（40.1±7.3）%，ADRP在主动脉病变区免疫组织化学染色强阳性，在肝脏中染色阴性。结论： 反义ADRP寡核苷酸能够明显抑制由氧化低密度脂蛋白引起的小鼠腹腔巨噬细胞中胆固醇酯的聚集。ADRP在兔As病变中表达明显增高。提示高表达ADRP促使As发生和发展。     

表面磁性膜医用316L不锈钢支架的生物相容性

目的 对表面磁性膜血管内支架进行生物相容性研究,为该支架的临床应用提供实验依据.方法 通过溶血实验、动态凝血时间实验、急性全身毒性实验、皮内刺激实验、细胞毒性实验、热源实验、过敏实验、体内植入实验综合评价表面磁性膜血管内支架的生物相容性.结果 表面磁性膜血管内支架无溶血反应及凝血功能的改变,无急性全身毒性反应,无热源反应,支架材料中不存在致敏性物质;支架材料动物体内植入在初期有轻度的炎性反应,12周后炎性反应基本消失,未见炎性细胞浸润积聚现象.结论 表面磁性膜血管内支架具有良好的生物相容性,其应用于临床具有可行性和安全性.     

食管癌细胞膜提取物体外诱导胚胎胸腺细胞抗癌效应的研究

本文探讨增强胚胎胸腺细胞抗肿瘤效应的方法。采用食管癌细胞膜抗原体外诱导培养的胚胎胸腺细胞 ;用3 H TdR掺入法检测其对食管癌细胞的细胞毒效应 ;用SP 免疫组化法检测其经诱导后细胞表面抗原的变化。结果经食管癌细胞膜抗原诱导 3～ 9d的胚胎胸腺细胞对食管癌细胞的杀伤率明显大于未经诱导的胚胎胸腺细胞 ;胚胎胸腺细胞经诱导后CD4 + /CD8+ 细胞无明显变化 ,但诱导后出现少量CD5 6细胞。食管癌细胞膜抗原体外诱导胚胎胸腺细胞可增强其对食管癌细胞的细胞毒作用     

肝癌肝移植患者外周血中AFP mRNA和MXR7 mRNA的表达及其与预后的关系

目的： 探讨甲胎蛋白（ɑ-fetoprotein,AFP）mRNA和米托蒽醌抗性基因（Mitoxantrone-resistant 7，MXR7）mRNA作为游离癌细胞（isolated tumor cells,ITC）的标志物在肝癌肝移植患者外周血中的表达情况及其与术后肿瘤复发和转移的关系。方法: 以2002年4月至2003年12月期间的53例肝癌肝移植患者为对象，通过建立稳定可靠的实时荧光定量RT-PCR检测方法来定量检测肝癌患者外周血全细胞中AFP mRNA和MXR7 mRNA在整个肝移植术围手术期的表达和动态变化情况，并与术后肝癌复发和转移进行相关分析。 结果: 将研究对象分为肝癌移植组（53例）、晚期肝癌组（8例）、良性肝病组（26例）、正常对照组（10例），检测发现在肝移植术前，晚期肝癌组的AFP mRNA和MXR7 mRNA其表达率均达到100％,在肝癌移植组中表达率分别为57.7%和53.6%。2者均明显高于在良性肝病组（表达率为19.2%和0）和正常对照组（表达率均为0）（P<0.05）。同时在2者的阳性结果表达水平上，晚期肝癌组和肝癌组要明显高于良性肝病组和正常对照组(P<0.05)，前2者阳性结果定量水平达到1×10¹²copies/g RNA，是后2者定量水平的100－200倍。围手术期AFP mRNA和MXR7 mRNA的表达无论是表达率还是阳性结果表达水平，均以在术中的检测标本为最高，而术后1周为次之。术后出现2次以上的持续性的AFP mRNA和MXR7 mRNA的表达往往提示肝癌的复发和转移，较之移植术后没表达或一过性升高的病例，其差异有统计学意义（P<0.05），而术前和术中单次的AFP mRNA和MXR7 mRNA的表达与否则对术后肝癌复发和转移无明显影响（P>0.05）。结论: AFP mRNA和MXR7 mRNA可以作为肝癌ITC细胞的标志物，具有较好的特异性。术后血全细胞检测出现2次以上的持续性的AFP mRNA和MXR7 mRNA的表达可以有效预测肝癌肝移植术后肿瘤复发和转移。     

人外周血CD4~+树突状细胞的纯化及鉴定

目的　建立人外周血树突状细胞 (dendriticcell,DC)的分离方法 ,观察其形态学和免疫组织化学特点 ,为下一步细胞融合提供DC来源。方法　以免疫磁珠分选法从人外周血单个核细胞中分离CD4 + DC ,流式细胞仪检测所得细胞的纯度 ,光镜、电镜和激光共聚焦扫描显微镜观察其形态 ,SP免疫细胞化学方法检测DC的分子表达。结果　此纯化方法所得细胞纯度可达到 80 %以上 ,形态学观察可见纯化细胞具有典型的DC特征 ,该细胞能高表达HLA DR和S 10 0分子。结论　免疫磁法可获得较高纯度典型DC ,为进一步进行DC与肿瘤的融合实验及临床应用提供了可能     

逆行带锁髓内钉治疗股骨远端骨折的应用解剖

目的:为带锁髓内钉治疗股骨远端骨折提供形态学基础。方法:①选用30例成人干燥股骨测量股骨内外侧髁、内外上髁、髁间窝有关数据进行统计分析。②20侧下肢标本解剖观测膝降动脉及隐神经髌下支的分支、分支等及两者的关系。结果:髁间窝呈U型占35%,V型占65%,此窝最宽处横径:左侧(1.98±0.36)cm, 右侧(2.06±0.29) cm;内侧髁后关节面宽,左侧(2.21±0.23) cm,右侧(2.34±0.29) cm;内、外上髁的距离,左侧(7.30±0.60)cm,右侧(7.43±0.57)cm。膝降动脉髌下支和隐神经髌下支呈紧密的伴行关系。隐神经在缝匠肌中下1/3交界点穿出,有上、下两支分布到膝关节前外侧皮肤。结论:术中注意这些解剖位置特点,避免损伤神经和血管,减少手术出血,防止并发症。