Construction of Antisense Transforming Growth Factorβ_1 Gene and Its Effect on the Proliferation by Expression in Osteosarcoma Cells

Summary:To construct the antisense transforming growth factorβ1(TGFβ1)gene and investigatethe effect of TGFβ1 autocrine loop blockage on the proliferation of osteosarcoma cells.TGFβ1 cDNAwas cloned by RT-PCR from human osteosarcoma cells(MG-63)and inserted into pcDNA_3 to con-struct an antisense expression vector,which was dubbed pcDNA_3-TGFβ1(-).MTT was used to de-tect the proliferation of osteosarcoma cells transfected by antisense TGFβ1 gene.Our results showedthat the proliferation of the transfected osteosarcoma cells was suppressed markedly.It is concludedthat TGFβ1 autocrine loop blockage in osteosarcoma cells could inhibit cell proliferation,which mightbe helpful for gene therapy of osteosarcoma.     

GraVes眼病炎性活动期与静止期血清sICAM-1水平的研究

目的:研究可溶性细胞间粘附因子-1(sICAM-1)在Graves眼病(GO)炎性活动期与静止期的水平差异及其与各项甲状腺功能指标的关系。方法:将GO炎性活动期与静止期患者,Graves病(GD)无眼病患者及正常对照,分为A、B、C、D四组,抽取空腹静脉全血,测血清sICAM-1,各组间进行比较。并分析各组sICAM-1与FT3、FT4、TG、TM的相关关系。结果:①A、B、C组患者血清sICAM-1均明显高于正常对照组(P<0.05)。A组患者sICAM-1水平最高,与B组及C组患者相比有统计学差异(P<0.01);②前三组各组内sICAM-1与FT3、FT4成直线相关关系,与TG、TM成直线相关关系;③GO炎性活动期患者sICAM-1与GO评分成正相关。结论:血清sICAM-1水平可作为反映GO活动性评判的免疫指标,长期监测sICAM-1可预示GD进展为临床活动性眼病的可能性。     

猪肾近端小管的超微结构

目的 研究猪肾近端小管的超微结构。方法 树脂包埋一超薄切片、透射电子显微镜技术。结果 猪肾近端小管可分S1、S2、S3和S4段构成，其中S1、S2段构成了近端小管曲部，S3、S4段构成了近端小管直部。本文对各段细胞超微结构特点进行详细的描述。结论 猪肾近端小管的超微结构与人肾近端小管最接近。     

病人信息与影像处理系统的设计与实现

本文介绍了病人信息与影像处理系统的网络结构、体系结构设计;功能设计及实现方法.系统运行后性能稳定,达到了预期目的.     

肝素涂层体外循环管道抗凝血性能的研究

目的 评测3种离子键肝素涂层体外循环管道的抗凝血性能和稳定性。方法 用PT和APTT对不同浓度肝素—氯烃基二甲基代苯甲胺(HBC)复合物涂层体外循环管道的凝血性能进行评测，同时测试体外转流对3种肝素涂层管道抗凝血性能的影响。结果 3种肝素涂层方法均能够将肝素分子结合于材料表面并具有抗凝活性，其中HBC复合物和肝素—聚乙烯亚胺复合物处理的体外循环管道经体外转流96h后仍具有较佳的抗凝血活性。结论 离子键肝素涂层因结合物质不同其稳定性也不同；HBC复合物和肝素—聚乙烯亚胺复合物处理的体外循环管道肝素分子结合较牢固，能够满足临床短期使用需要。     

小鼠FoxP3基因腺相关病毒的制备与鉴定

目的:构建携带小鼠FoxP3基因的重组腺相关病毒,并检测其在NIH3T3细胞的表达情况。方法:将FoxP3通过内部核糖体进入位点(IRES)与报告基因增强型绿色荧光蛋白连接,构建同时含有目的基因和报告基因的重组腺相关病毒(rAAV)表达质粒,通过磷酸钙沉淀法共转染HEK293细胞,收获并通过肝素亲和层析法纯化病毒,并对病毒纯度和滴度进行鉴定。利用携带FoxP3基因的重组病毒体外感染小鼠NIH3T3细胞,体外观察感染效率和目的基因转录情况。结果:包装成功的rAAV/FoxP3经纯化后获得了高纯度的rAAV/FoxP3,实时定量PCR检测rAAV/FoxP3的病毒滴度达到5.0×1012vg/mL,体外感染NIH3T3细胞,流式细胞术测定感染效率可达92.88%,实时PCR测定细胞内存在高水平FoxP3mRNA。结论:获得携带FoxP3-IRES-EGFP的rAAV,并可有效感染NIH3T3细胞,为进一步研究FoxP3的生物学功能提供了有效工具。     

^32磷简易敷贴药膜治疗小儿皮肤血管瘤2450例疗效分析

目的　评价3 2 磷简易敷贴药膜治疗小儿皮肤血管瘤的效果 .方法　 2 4 5 0例不同年龄的血管瘤小儿接受3 2 磷简易敷贴药膜治疗 ,治疗次数为 1～ 9次 ,平均 3.5次 ;每次间隔 2个月 ,按不同年龄给不同的照射量 ,以治疗时间换算 ,每次治疗剂量为 0 .92 5MBq/cm2 × ( 12～ 4 2 )h .结果　血管瘤和血管痣治愈率 71.7% ,部分治愈 2 2 .5 % ,总有效率 94 .2 % ,无效者 5 .8% .其中血管瘤效果明显优于血管痣 (p<0 .0 1) ,并且年龄越小效果越明显 (p<0 .0 1) .结论　3 2 磷简易敷贴药膜治疗小儿皮肤血管瘤是一种治疗简便、疗效确切的方法 ,尽早治疗效果更明显     

HIV-1 B''亚型R5或R5/X4嗜性毒株在GHOST细胞的感染性分析

目的分析我国HIV-1B′亚型R5或R5／X4嗜性毒株在GHOST细胞的感染性。方法采用传统的共培养方法从HIV-1感染者PBMC中分离并培养病毒，用表达CD4和趋化因子受体CCR5或CXCR4的GHOST细胞系，测定毒株的辅助受体利用情况，使用相同病毒量即2mg的HIV-1 p24分别感染表达不同受体的GHOST细胞系，通过流式细胞仪检测分析绿色荧光蛋白（GFP）的表达反映病毒感染细胞的能力。结果35例B′亚型毒株利用CCR5受体，占22例（62．85％），双嗜性即CCR5／CXCR4均阳性占13例（37．15％）。GHOST-R5／X4细胞的感染性分析结果显示，R5／X4双嗜性毒株的感染性明显高于CD4〉200／μl的R5毒株的感染性（P〈0．05）；R5／X4毒株与CD4≤200／μl的R5毒株感染性比较差异无统计学意义（P〉0．05）；CD4〉200／μl的R5毒株与CD4≤200／μl的R5毒株感染性比较差异有统计学意义（P〈0．05）；GHOST-CCR5细胞感染性分析结果显示：R5／X4双嗜性毒株的感染性明显下降，与CD4〉200／μl的R5毒株的感染性比较差异无统计学意义（P〉0．05）。利用相同剂量的双嗜性毒株分别感染R5、X4或R5／X4的GHOST细胞系，显示双嗜性毒株可同时利用CCR5和CXCR4辅助受体，但69．23％的R5／X4毒株以CCR5受体为主，30．77％的R5／X4毒株以CXCR4受体为主。结论HIV-1B′亚型R5／X4病毒不仅有更广泛的宿主细胞嗜性，而且在GHOST-R5／X4细胞中感染性明显提高。持续使用CCR5受体的毒株在疾病进展的过程中虽然辅助受体的利用是一样的，但病毒感染细胞的能力增加。     

实时荧光定量RT-PCR监测恒河猴体内人/猴免疫缺陷病毒载量在传代过程中的变化

目的为分析中国SHIV/猕猴AIDS模型的病毒载量变化趋势,建立一种实时、灵敏、特异的针对人/猴免疫缺陷病毒的定量检测方法。方法体外转录制备RNA标准品,利用TaqManEZRT-PCR试剂盒的反应体系和针对SHIVgag保守区91个碱基的TaqMan探针和引物,建立一步法实时荧光定量RT-PCR。提取126份来自SHIV-CN97001感染恒河猴血浆病毒RNA并定量检测。结果利用梯度稀释的RNA标准品对反应体系进行优化,标准曲线下限达到2×102拷贝/ml,相关性(r>0.99)及重复性(CV=4.14%)均能达到测定要求。病毒载量的检测结果表明SHIV-CN97001在猴体内传代过程中病毒载量有先升后降的趋势,病毒载量通常在接种病毒或感染猴的全血后第14天达到高峰。血浆载量可达到105~106拷贝/ml。结论成功地建立了一步法定量SHIVRNA的实时荧光定量RT-PCR,为SHIV/恒河猴AIDS模型的建立与应用提供了灵敏的病毒载量检测方法。SHIV-CN97001的体内繁殖能力在猴体内传代过程中有所增强。     

我国HIV-1 B''亚型毒株gag基因变异特征研究

目的研究我国人免疫缺陷病毒1型（HIV-1）B’亚型主要流行株在宿主免疫压力下的基因变异及抗原表位的变化特征，探讨选择压力、基因离散率和抗原表位变化之间的关系。方法从确诊的HIV-1感染者的全血样本中提取基因组DNA，经套式聚合酶链反应（PCR）扩增后，将扩增产物进行纯化和测序。然后将所得序列进行系统进化树和氨基酸变异分析，使用GCG软件包的Distance程序对P17和P24两个区段计算基因距离，用Diverge程序计算同义替换（1（s）和非同义替换（1（a）及二者之间的比值，并对我国人群中较常见的HLA型别限制的CTL表位的突变情况进行分析。结果HIV-1B’亚型毒株的P17区段的Ks／Ka值〈1，而P24区段的Ks／Ka值〉1；P24部分的基因离散率低于P17部分；P17区段抗原表位的保守率为34．94％，而P24区段抗原表位的保守率为67．38％；从基因离散率、所受的选择压力及抗原表位的突变率3个方面来看，HIV-1的P17区段均明显大于P24区段。结论HIV-1B’亚型毒株的P17区段的抗原表位变化较大，而P24区段的抗原表位相对较为保守。提示P24区段的CTL表位更适合于表位疫苗的研制。