隐球菌性脑膜炎患者外周血中TLR4的表达以及血清中TNF-α,IL-10的水平研究

目的探讨Toll样受体4（TLR4）在隐球菌性脑膜炎患者外周血中的表达,以及研究血清中TNF—α,IL-10的变化情况。方法收集25例隐球菌性脑膜炎患者和25例健康体检者全血,采用荧光定量PCR（FQ—PCR）检测TLR2,TLR4的mRNA表达。ELISA法检测血清中TNF—α,IL-10的表达。结果隐球菌性脑膜炎患：者TLR4 mRNA的表达显著低于对照组（0．35±0．18）（P〈0．05）,TLR2均无显著变化（0．87±0．23）（P〉0．05）。血清中的IL-10显著升高（4．25±1．30）pg／ml（P〈0．05）,TNF—α的变化不显著（1．49±0．87）pg／ml（P〉0．05）。结论隐球菌性脑膜炎患者TLR4 mRNA表达显著下降,可能在隐球菌性脑膜炎的发病过程中起一定的作用。     

AMA-M2抗体阳性原发性胆汁性肝硬化患者的实验室指标特征分析

目的分析中国人原发性胆汁性肝硬化（PBC）的实验室指标特征,为PBC实验室诊断提供参考。方法对10余年来保存的361例特异性AMA-M2抗体阳性PBC患者的血清标本,检测分析自身抗体、血清酶谱、免疫球蛋白等指标,并用免疫印迹法分析M2靶抗原分布情况。结果 361例血清标本中最常见的生化指标异常为ALP和GGT,异常率分别为84.5%和78.9%,有71.7%的标本IgM异常增高。14.7%（53/361）ALT、ALP和GGT等生化指标全部正常。AMA和ANA阳性率分别为84.5%和76.7%,在ANA阳性标本中,核膜型与着丝点型为最常见的荧光图形。M2型抗体的三个主要靶抗原PDC-E2、BCOADC-E2和OGDC-E2在本研究患者中的阳性率分别为85.3%、69.5%和24.4%。结论 AMA-M2抗体阳性的中国人PBC,仍以血清IgM、ALP、GGT水平升高和AMA阳性常见,但14.7%PBC患者初诊时ALT、ALP和GGT等生化指标正常。三个主要M2型靶抗原分布不同于白种人报道。     

无精症及隐匿精子症患者染色体核型与Y染色体微缺失分析

目的 研究无精症和隐匿精子症染色体核型与Y染色体无精因子(azoospermia factor,AZF)微缺失的发生频率及其关系.方法 对997例无精症和隐匿精子症患者进行常规染色体核型分析及多重聚合酶链反应技术检测AZF位点.结果 在997例无精症和隐匿精子症患者中,染色体核型异常检出率28.4%,异常核型包括47,XXY、46,XY(Y＜G)、46,XX、嵌合体及相互易位等.AZF微缺失总检出率17.4%.常见于46,XY及46,XY(Y＜G)等核型.结论 染色体核型异常是无精症和隐匿精子症的重要遗传病因.正常核型与Y＜G患者中存在较高的AZF微缺失率,对这些患者进行AZF微缺失检查有助于明确病因,避免一些不必要的临床治疗及遗传缺陷的垂直传递.     

肥胖青少年胰岛素抵抗和β细胞分泌功能的变化

目的探讨肥胖青少年胰岛素抵抗和β细胞分泌功能的变化。方法对9 969名11~19岁的中学生行肥胖筛查,纳入肥胖267例,超重185例,正常136例,分别行葡萄糖耐量试验,同时测量腰围、臀围,计算腰臀比、腰高比;据空腹和服糖30 min、120 min血糖、胰岛素值计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素分泌功能(HOMA-β、ΔIns30/ΔGlu30)。结果3组腰围、臀围、腰臀比、腰高比和血胰岛素值均有显著性差异(P<0.000 1),餐后30 min血糖在肥胖和正常组间有统计学差异(P<0.0248);3组间HOMA-IR、HOMA-β、ΔIns30/ΔGlu30比较均有显著性差异。结论肥胖和超重者存在高胰岛素血症,可能存在胰岛素抵抗,肥胖青少年β细胞早相分泌功能可能受损。     

创伤性骨折并发脂肪栓塞综合征的诊治分析

目的:通过16例脂肪栓塞综合征患者发生的情况,探讨其早期的诊断及治疗。方法:回顾性的分析1576例创伤性骨折患者,发生脂肪栓塞综合征16例。结果:经过早期的诊断和及时的处理,16例患者全部治愈。结论:对于创伤性骨折,尤其是要警惕脂肪栓塞综合征的发生,并及时处理。     

男性不育精子存活率与精液各参数的相关性分析

目的探讨不育男性精子密度,活动率,前向活动率(a b)的正常形态和存活率之间的相互关系.方法采用WHO推荐的标准化方法,对775例不育男性精液进行常规、形态学和精子活体染色技术检测分析.结果精子存活率与密度、活动率、前向活动率、正常形态各指标间均有正向相关性,相关系数(r)分别为0.175、0.803、0.749、0.274.结论精子存活率与精液常规检查参数和精子正常形态之间具有较好的相关性,精子存活率可作为评价精子活动率的补充指标,并且是一个很好的评估.     

人Toll样受体3基因表达水平的实时荧光定量PCR测定

目的建立检测人Toll样受体3（TLR3）mRNA表达水平的实时荧光定量逆转录PCR（FQ-RT-Pert）法，及探讨其在外周血单个核细胞（PBMC）中的表达水平。方法用Beacon Designer2．1软件设计TLR3基因特异性引物和荧光探针，逆转录扩增目的片段，构建重组体pMD18-T-TLR3作为定量标准品。在ABIPrism7000型荧光定量分析仪上，通过荧光强度达到一定阈值时的循环数来定量起始模板，建立标准曲线；并检测30名正常人及20例原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者，20例慢性乙型肝炎肝硬化患者外周血PBMCTLR3基因的荧光强度，根据标准曲线及循环阈值，由软件自动计算样本中TLR3mRNA的起始拷贝数。结果FQ-RT-PCR检测TLR3基因的线性范围为10^2～10^8拷贝数／μl RNA（r=0．9974），内参β-actin的线性范围为10^3～10^8拷贝数／μl RNA（r=-0．9984）；高浓度样本批内和批间变异系数（CV）分别为6．7％和8．7％，低浓度样本批内及批间CV分别为12．3％和14．0％，30名健康人，20例PBC及20例慢性乙型肝炎肝硬化患者PBMC中均有TLR3 mRNA的表达，分别为3．46×10^2～4．51×10^3拷贝／μg RNA、4．92×10^2～1．42×10^4拷贝／μg RNA和2．58×10^2～7．17×10^3拷贝／μg RNA。结论成功建立检测TLR3 mRNA的FQ-RT-PCR方法，可作为临床和基础研究TLR3基因表达的工具。     

粒细胞集落刺激因子受体基因在原发性胆汁性肝硬化外周血单个核细胞的表达及临床意义初探

目的探讨粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR)基因在原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBM C)的表达情况及其临床意义。方法建立以18S rRNA基因为内参的实时荧光逆转录聚合酶链反应相对定量方法,检测30例PBC患者和30例正常人PBM C中G-CSFR基因的相对表达量。结果PBC患者PBM C中G-CSFR mRNA的ΔCT值为10.6±2.2,其相对表达量是正常对照组(8.9±0.4)的30%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论G-CSFR基因在PBM C中的表达降低与PBC的发病密切相关,提示G-CSFR在PBC的发病中可能具有一定作用。     

原发性胆汁性肝硬化动物模型的建立及外周血T淋巴细胞表面CD40配体分析

目的用聚肌苷酸胞苷酸（polyinosinic polycytidylic acid，PolyI：C）注射C57BIL/6小鼠以研究建立原发性胆汁性肝硬化（PBC）动物模型，探讨CD40配体（CD40L）在外周血T淋巴细胞表面的表达，和在PBC中T淋巴细胞的活化情况。方法20只C57BIM6小鼠随机分对照组和模型组。将polyI：C以5ms／kg的剂量腹腔注射模型组小鼠，对照组注射PBS，每周2次，120d后处死，留取外周血和肝组织，间接免疫荧光法检测血清抗线粒体抗体（AMA），HE染色观察胆管病理变化，生化分析仪测定血清碱性磷酸酶（ALP）含量，流式细胞术分析外周血CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞所占比例及CD40L在T淋巴细胞表面的表达情况。结果PolyI：C注射120d后模型组小鼠均出现AMA阳性，肝组织小胆管周围有不同程度的炎性细胞浸润，血清ALP明显高于对照组（P〈0．001）；对照组胆管及血清ALP均未发生明显变化；模型组小鼠CD40L^＋／CD4^＋、CD40L^＋／CD8^＋T淋巴细胞[（4．35±0．34）％，（1．42±0．10）％）显著高于对照组[（0．78±0．10）％，（0．43±0．04）％，P〈0．01]；而模型组小鼠CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞所占比例[（25．83±1．80）％，（24．84±2．70）％]与对照组[（20．51±3．46）％，（17．84±1．53）％]比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论PolyI：C腹腔注射C57BIM6小鼠120d可引起PBC病变，活化的CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞在PBC发病中起重要作用。     

KLIANNTRV是结核抗原Ag85A的HLA-A*0201限制性CTL表位

目的鉴定结核杆菌抗原Ag85A的HLA-A*0201限制性CTL优势表位。方法采用数据库SYFPEITHI初步预测结核抗原Ag85A的HLA-A*0201限制性CTL表位;经流式细胞术分析抗原肽与HLA-A*0201的亲和力;经时间荧光分辨法检测患者外周血单个核细胞(PBMCs)对抗原肽的增殖反应;最后通过细胞毒实验逐步鉴定Ag85A的HLA-A*0201限制性CTL预测的表位。结果实验证明,预测的位于Ag85A氨基酸序列(242-250aa)的肽表位与HLA-A*0201具有较高的亲和力。结论筛选出的KLIANNTRV(242-250aa)是结核杆菌抗原Ag85A的HLA-A*0201限制性CTL优势表位。