牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒重组蛋白疫苗的构建及功能研究

目的为了取代有安全隐患的牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒灭活疫苗,我们构建了基因工程重组蛋白疫苗。方法应用PCR方法合成含有表位的基因片段,经过克隆连接获得重组基因,在大肠杆菌中表达后经镍亲和层析纯化重组蛋白。重组蛋白免疫豚鼠后,分别经ELISA和乳鼠中和实验检测血清中抗FMDV抗体水平。结果构建了牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒重组蛋白疫苗的结构基因,并成功表达和纯化了该重组蛋白。功能实验表明,该蛋白在豚鼠体内诱生了高水平的抗牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒的中和性抗体。结论该重组蛋白为制备牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒新型疫苗提供了有价值的线索。     

基于独立分量分析体感诱发电位仪的设计与测量

体感诱发电位技术是术中神经监护的主要技术,由于诱发信号的信噪比一般很低,临床上普遍采用相干平均技术提取体感诱发信号。本文基于独立分量分析算法,设计实现的体感诱发电位仪,除了能对各刺激参数可调外,通过大鼠实验,发现还具有所需刺激次数少、细节信息明显和实时显示提取波形等特点,因而有着很好的医学应用前景。     

Genetic diversity of the S10 RNA segment of field and vaccine strains of bluetongue virus from the P. R. China

Bluetongue virus (BTV) infection of ruminants is endemic throughout tropical and subtropical regions of the world. However, the molecular epidemiology of BTV infection in China has not yet been reported. In this study, the S10 gene segments from 30 BTV isolates, one attenuated BTV strain, one vaccine BTV strain, and one South Africa BTV prototype strain, were sequenced. Phylogenetic analysis of the S10 genes showed that Chinese BTV isolates could be classified into two phyletic subgroups, and the clustering of Chinese BTV viruses was dependent on their geographical origin and the number of generations for which they had been propagated, rather than their host species or year of isolation.     

贵州少数民族胱硫醚-β-合酶基因C699T的分布

目的 对中国贵州雷山苗族和三都水族群体胱硫醚-β-合酶基因C699T进行多态性分析,计算其基因频率,获取相应的遗传信息.方法 采用nest-PCR和变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)技术寻找突变基因,对突变基因的PCR产物进行基因直接测序,并与文献报道的各种人群的相应数据进行比较.结果 雷山苗族和三都水族群体的胱硫醚-β-合酶基因699T等位基因频率分别为5.1%和5.4%.结论 雷山苗族和三都水族两个群体间胱硫醚-β-合酶基因699T等位基因差异无统计学意义,但它们均显著低于黑种人和白种人群体.     

SUMO表达系统高效、可溶性表达重组鼠源IL-1β

目的:从LPS刺激过的小鼠胸腺细胞中克隆IL-1β基因,通过原核表达,获得具有生物活性的可溶性鼠源IL-1β蛋白,为深入研究和利用IL-1β基因奠定基础。方法:提取LPS刺激的小鼠胸腺细胞总RNA,反转录成cDNA,以此为模板,根据GenBank报道的mIL-1β序列设计引物,进行巢式PCR,得到成熟mIL-1β的编码序列基因,并插入到原核表达载体pHisSUMO ex-press中SUMO标签的下游,构建重组表达载体pHisSUMO express-mIL-1β。将该载体转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达mIL-1β/SUMO融合蛋白,Ni-NTA Agarose纯化后,表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,用SUMO protease-1切去SUMO标签,经纯化并切去融合标签后获得成熟mIL-1β蛋白。用MTT方法检测目的蛋白对L929细胞的生物学活性。结果:DNA测序证明所克隆基因序列与GenBank报道的完全一致,SDS-PAGE分析表明融合蛋白的相对分子质量为37kD,切割后的成熟蛋白为17kD,与理论值相符。且蛋白表达量高,主要以可溶形式存在。Western blot证实该蛋白为mIL-1β。成熟蛋白纯化产物纯度超过95%以上,通过MTT的方法检测证明其具有使L929细胞增殖的作用,从而说明其具有生物学活性。结论:利用大肠杆菌表达系统可高效可溶性表达高纯度的具有生物活性的mIL-1β蛋白。     

包裹钆对比剂的PLGA微球研究初步

目的：制备包裹钆对比剂的PLGA微球,并评价PLGA微球在磁共振成像中的肾靶向增强效果。方法：Gd-DTPA作为内水相,溶入了PLGA的二氯甲烷有机溶剂作为油相,PVA-0486的水溶液作为外水相,采用复乳法制备包裹钆对比剂的PLGA微球;通过激光粒度分析仪测量微球平均粒径,用等离子体原子发射光谱仪测量微球载药量,并用磁共振成像仪观察微球的肾靶向增强效果。结果：PLGA浓度越大,PVA的浓度越小,合成的PLGA微球的平均粒径越大;PLGA微球对小鼠肾脏有明显的靶向增强作用。结论：包裹钆对比剂的PLGA微球有望成为一种能临床应用于磁共振成像的肾靶向对比剂。     

复愈性环境的理论与评估研究

目的介绍复愈性环境的理论发展和评估方法,全面揭示环境与人类身心健康之间的关系,为该领域的本土化研究和应用提供思路。方法查阅相关文献,就环境心理学中复愈性环境的研究进行整理。结果减压理论和注意恢复理论是复愈性环境研究的两大核心理论,它们对复愈性环境的评估各有利弊,目前两者从对立趋向整合。结论如何开发和利用复愈性环境以促进身心健康,已成为环境心理学的研究热点。展望今后的研究重点,包括:复愈时间的控制,多层评估的解释,实地研究的开展以及评估与应用的结合等。     

脑出血破入脑室96例手术治疗的临床分析

目的 探讨脑出血破入脑室的外科手术治疗并辅以术后尿激酶溶解的临床疗效.方法 96例脑出血破入脑室患者采用小骨窗开颅联合脑室外引流、单纯脑室外引流以及术后辅以尿激酶溶解,选择性应用腰大池持续引流和腰椎穿刺治疗.结果 46例患者采用小骨窗开颅联合脑室外引流治疗,出现术后并发症25例,死亡5例;50例患者采用单纯脑室外引流,出现术后并发症28例,死亡6例.术后3个月随访日常生活能力(ADL)分级:Ⅰ12例;Ⅱ17例;Ⅲ 24例;Ⅳ19例;Ⅴ13例;Ⅵ 11例.结论 脑内血肿超过30ml时,适宜选择小骨窗开颅联合脑室外引流术,而脑内血肿小于30ml时,适于选用单纯脑室外引流术,根据病人情况及出血量来选择手术方式,可以更好的减少术后并发症及降低患者的病残率,提高患者的生存质量.     

大鼠视上核、室旁核肠三叶因子表达与实验性胃溃疡的关系

目的探讨大鼠实验性胃溃疡自愈期间肠三叶因子(ITF)在下丘脑视上核(SON)、室旁核(PVN)的表达及其与实验性胃溃疡愈合的关系。方法以免疫组织化学染色、酶联免疫吸附实验分别检测溃疡组(42只)和正常组(6只)大鼠下丘脑和血清及ITF的表达及含量变化,RT-PCR检测ITFmRNA的转录情况。结果 ITF免疫反应阳性物质主要位于视上核和室旁核大细胞部。溃疡1d视上核和室旁核ITF积分吸光度略增高,2d、4d和6d逐渐升高,6d达高峰(P0.01),10～23d均维持在较高水平(P0.05)。血清ITF的变化与免疫组织化学法结果相似;溃疡组ITF/3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)吸光度比值在溃疡2～23d均高于正常组(P0.01,或P0.05)。结论胃溃疡自愈期间可能通过下丘脑和血清ITF的高表达参与溃疡愈合的调节。     

嗅鞘细胞移植入淀粉样前体蛋白转基因小鼠脑内降低β淀粉样蛋白沉积

目的 观察嗅鞘细胞移植入淀粉样前体蛋白(APP)转基因小鼠脑内后的存活和迁移状况及其对模型β淀粉样蛋白沉积的作用,以进一步探索嗅鞘细胞移植对阿尔茨海默病的治疗效果.方法 取自发绿色荧光蛋白的新生3d龄增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因小鼠,体外分离培养嗅球嗅鞘细胞,在小鼠脑立体定位仪的固定下,参照AP小鼠脑立体定位图谱,将收集的嗅鞘细胞移植入APP转基因小鼠脑内.移植1个月后,取脑组织冷冻切片,在双光子共焦显微镜下观察细胞存活和迁移状况并采集图像.移植1个月后,行荧光免疫组织化学和免疫印迹法检测淀粉样蛋白沉积,每组4只.结果 嗅鞘细胞移植入APP转基因小鼠脑内存活良好,并以移植点为中心向外迁移,部分绿色荧光细胞呈现成血管现象,移植之后APP转基因小鼠脑内的β淀粉样蛋白沉积减少,APP表达明显减少(P<0.05).结论 嗅鞘细胞对减少APP转基因小鼠脑内淀粉样蛋白沉积有一定帮助.