丙氧鸟苷诱导转单纯疱疹病毒胸苷激酶基因人肺腺癌细胞A549凋亡研究

目的:观察丙氧鸟苷(GCV)对A549-TK细胞的作用与诱导细胞凋亡的关系。方法:A549-TK、A549两种细胞经50μmol/LGCV作用3～5d后,用电镜、流式细胞仪、细胞凋亡原位检测法(Tunel)观察细胞凋亡。结果:电镜下发现A549-TK细胞有凋亡特征:如凋亡小体、半月征、核浓缩,流式细胞仪发现A549-TK细胞有亚G₀G₁峰,凋亡细胞占12.21%±1.66%,而A549细胞无G₀G₁峰,凋亡细胞占1.32%±0.25%,两者比较P<0.01。Tunel表明A549-TK、A549两种细胞凋亡发生率分别为16%±167%,2.5%±0.36%,两者比较P<0.01。结论:GCV诱导A549-TK细胞凋亡。     

肿瘤患者红细胞CD44s与CD58分子的定量测定及意义

目的建立定量测定红细胞CD44s和CD58分子的实验方法,研究其数量变化与肿瘤转移的关系。方法将戊二醛固定的1.2×106红细胞定量“液相包被”于V型板中,依次加入抗CD44s和CD58分子单克隆抗体、碱性磷酸酶标记的第二抗体及可溶性底物,移显色液于比色孔,在405nm比色,计算其A405吸光度值。结果本方法具有良好的敏感性和重复性。非转移性肿瘤患者红细胞CD44s和CD58分子数量表达低于正常人群,但无统计学差异。而转移性卵巢癌和肝癌患者的红细胞CD44s和CD58分子数量明显低于无转移肿瘤患者和正常人群（P＜0.001）。CD44s数量变化与肿瘤患者血清透明质酸(HA)含量变化密切相关。红细胞CD58分子表达变化对红细胞调节淋巴细胞免疫粘附能力有明显影响。结论红细胞CD44s分子数量表达变化与肿瘤转移密切相关;红细胞CD58分子参与机体整体免疫调节。     

冠状动脉外膜炎症在动脉粥样硬化病灶形成中的作用

目的：探讨动脉外膜炎症诱发载脂蛋白E基因剔除（apoE-/-）小鼠冠状动脉粥样硬化病灶发生的机制。 方法： 取apoE-/-小鼠心脏做连续切片，选择冠状动脉外膜有炎性细胞浸润的3类部位代表粥样硬化病灶形成过程中的3个阶段：①未发现粥样硬化病灶；②有直接从主动脉延伸的病灶顶端和③成熟粥样硬化病灶的冠状动脉。分别采用HE染色、Movat染色、免疫组化和透射电镜方法鉴定3个病变阶段的冠状动脉外膜中炎细胞类型。 结果： ①未发现粥样硬化病灶；②有直接从主动脉延伸的病灶顶端和③成熟粥样硬化病灶的冠状动脉外膜分别以巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞浸润为主，其构成比分别为60.00%、57.65%和66.67%，各组构成比分别与其它两组比较均有显著差异（P<0.01）。 结论： 动脉外膜炎症可能是诱发动脉粥样硬化发生的早期事件之一，ApoE-/-小鼠冠状动脉粥样硬化病灶形成过程中，动脉外膜经历了一个从急性炎症到慢性炎症的过程。     

重组FoxP3腺相关病毒转染小鼠CD4+CD25 -T细胞的实验研究

目的：研究FoxP3（Forkhead Box P3）基因在小鼠T细胞的表达情况，以及重组FoxP3腺相关病毒（adeno-associatedvirus，AAV）对小鼠CD4^＋CD25^-T细胞功能的影响。方法：采用实时定量PCR检测CD4^＋CD25^-T细胞和CD4^＋CD25^-T细胞FoxP3 mRNA表达情况，利用基因重组技术构建FoxP3腺相关病毒载体，体外转染CD4^＋CD25^-T细胞，通过细胞增殖试验观察转染CD4^＋CD25^-T细胞功能变化。结果：CD4^＋CD25^-T细胞较CD4^＋CD25^-T相比高水平表达FoxP3基因mRNA，重组FoxP3腺相关病毒转染后的CD4^＋CD25^-T细胞对CD3单抗的刺激呈低反应性，并且能抑制新鲜分离CD4^＋CD25^-T细胞的增殖。结论：FoxP3基因转染的CD4^＋CD25^-T细胞在体外具有抑制T细胞活化增殖的功能。     

PE重组免疫毒素在肿瘤导向治疗中的应用

绿脓杆菌外毒素A(PE)经过修饰后失去了与细胞结合的能力,将单克隆抗体的Fv段或细胞因子作为导向分子与修饰后的PE通过DNA重组技术融合,获得重组的免疫毒素,这种免疫毒素通过导向分子将毒素带到靶细胞,并杀伤靶细胞,因而被广泛运用于肿瘤的导向治疗。     

人FcεRIα亚基的细胞外区的克隆表达和抗血清的制备及功能

为获得有生物活性的FcεRIα亚基细胞外区及多克隆抗体 ,并探知其功能 ,构建FcεRIα亚基的细胞外区的原核表达载体PBAD/gIIIA/FcεRIα,经表达、纯化后用斑点杂交法检测其活性。纯化制品免疫兔子获得抗血清 ,并研究抗血清对FcεRI的作用。结果发现 ,经原核表达出的FcεRIα亚基的细胞外区能与IgE结合 ;获得具有特异性抗FcεRI的抗血清 ,可能抑制嗜碱粒细胞脱颗粒。实验提示原核表达系统能产生有生物学活性的FcεRIα亚基的细胞外区 ,用其制备的抗血清能够识别FcεRIα亚基的细胞外区 ,可能抑制嗜碱粒细胞脱颗粒 ,为研究FcεRIα表达调节、对其的封闭作用及研究过敏性疾病的发病机制奠定物质基础     

FasL诱导EAE小鼠淋巴细胞凋亡的实验研究

为了解FasL在诱导EAE淋巴细胞凋亡中发挥的作用 ,我们用髓鞘碱性蛋白 (MBP )致敏小鼠 ,建立动物模型 实验性自身免疫性脑脊髓膜炎 (EAE )。分析了EAE动物淋巴细胞膜上Fas及FasL分子的表达水平 ,检测了分泌的细胞因子 ;用FasL分子诱导了EAE淋巴细胞凋亡。结果表明 ,应用MBP致敏KM小鼠 ,成功地建立了EAE模型 ,KM小鼠的发病率为6 8 3% ,发病程度为 1～ 2分 ;小鼠特异性淋转比对照组高 ,并与发病评分成正比 ;细胞因子分泌水平提示以Th2为主 ;EAE淋巴细胞Fas和FasL的表达及凋亡显著高于对照组 ;FasL诱导淋巴细胞凋亡剂量依赖曲线表明 ,在一个较小的浓度范围内呈现正相关 ,若加入单抗可部分阻断FasL诱导的凋亡。结果提示Fas FasL在EAE动物淋巴细胞凋亡中起了重要作用。     

婴幼儿呼吸道疾病B淋巴细胞状况分析

用流式细胞术测定婴幼儿哮喘、婴幼儿肺炎、婴幼儿急性上呼吸道感染患儿外周血淋巴细胞CD19、CD19+ CD2 3+ 表达 ,用化学发光免疫法测定其血清总IgE水平 ,以探索婴幼儿呼吸道疾病时B淋巴细胞及其活化状况。结果表明 ,婴幼儿哮喘组CD19+ 、CD19+ CD2 3+ 表达、血清总IgE水平明显增高 ,婴幼儿肺炎、婴幼儿急性上呼吸道感染无升高 ;婴幼儿哮喘组CD19的表达阳性率和绝对值分别与CD19+ CD2 3+ 表达阳性率和绝对值均呈正相关。提示婴幼儿哮喘存在明显的B淋巴细胞数量增多及活化异常 ,婴幼儿肺炎和婴幼儿急性上呼吸道感染B淋巴细胞状况无明显改变     

减重平板训练对瘫痪后步行障碍患者的影响

目的：观察减重平板训练对脊髓损伤和脑损伤造成的长期下肢瘫痪步行功能的作用。方法：10名男性患者，年龄25－64岁，其中4例脊髓损伤，6例脑血管意外，病程平均1．4年，减重平板训练前均接受不同程度的传统康复训练，功能步行评定为0－1分，接受减重平板训练每天1次，开始减重重量在50％－70％之间，平板速度为0．27m/s，平均20次，所有虱训练前后接受功能步行和一般平衡功能测定，其中7例患者在Kistler压电晶体式三维测力台上进行步态分析。结果：患者经过阶段性减重平板训练，功能性步行评定及站立平衡功能比传统康复治疗前后有十分明显的改善（P＜0．0001，P＝0．0003），其中7例患者的平均步速达0．36m/s，左右足对台压力峰值和支撑时间无明显差异（P＞0．05），结论：减重平板训练对长期瘫痪患者改善步行能力有帮助。     

腹股沟与腋窝测温法的对比研究

目的 探讨大面积烧伤患腹股沟测温法的可行性。方法 选择住院患200名,分成4组,每位患同时测量腋窝／腹股沟体温。结果 将每组患的左右腋下体温、左右腹股沟体温和同侧腋窝／腹股沟体温进行样本均数的t检验,P＞0．05。结论 腹股沟测温法代替常规腋窝测温法,在大面积烧伤及特殊患上的应用是科学可行的。