脐带血单个核细胞体外诱导成CIK细胞及其抗肿瘤效应的实验研究

目的:探索建立CIK细胞的原代培养方 法并阐明其生物学特性,为该细胞在肿瘤生物过 继免疫治疗中的运用奠定基础。方法:通过加入 4种细胞因子(IFN γ、IL 2、IL 1及OKT3)将脐带 血单个核细胞(CBMNCs)诱导成CIK细胞;利用 流式细胞仪测定细胞表型、细胞增殖情况及细胞 周期的分布;利用改良的MTT法测定效应细胞 的体外细胞毒活性。结果:四种细胞因子的联合 运用,可诱导出大量的CIK细胞,其相对百分率 增长了163倍(从0.14%到22%),增殖高峰位 于第10～12天,针对K562、Hela和YTMLC肿瘤 细胞株,CIK细胞在效靶比为64∶1时的杀伤活 性分别为78.57±3.48、77.7±1.90和81.2± 1.51,在32∶1时分别为62.00±2.31、60.83± 2.80和64.07±2.87,在16∶1时分别为51.43± 2.51、52.87±2.91和54.10±3.11,均显著高于 LAK细胞及CBMNCs,P=0.001;而在效靶比为 8∶1(25.10±2.66、21.4±1.55和28.77±3.56) 及4∶1(17.10±2.10、11.93±1.86和9.49±2.92) 时与后两者差异无统计学意义,P=0.083。结 论:1)脐带血可作为诱导CIK细胞的重要来源 2)联合运用细胞因子能诱导出大量的CIK细胞 其增殖高峰位于培养的第12天,适宜在此期进 行临床运用;3)CIK细胞较LAK细     

溶剂结晶法纯化头孢菌素C钠盐

目的 比较不同溶剂法结晶纯化头孢菌素C钠盐收率和质量。方法 用HPLC、ESEM等检测方法检测头孢菌素C钠盐的纯度和晶型。结果 用无水乙醇、丙酮、异丙醇三种溶剂所得的头孢菌素C钠盐指标均达到国内厂家内控检测标准，超过国外同类产品指标；其中以丙酮结晶法收率较高，乙醇结晶法纯度高，晶型好。结论 丙酮结晶法成本较低，为厂家选择结晶工艺提供参考。     

中华眼镜蛇毒组分抑制肺癌细胞H1299的血管生长因子VEGF和Bfgf

目的:了解中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)对人非小细胞肺癌细胞株H1299VEGF、bFGF表达的抑制作用。方法:采用RTPCR方法检测H1299细胞中VEGF、bFGFmRNA表达的变化;利用ELISA检测培养上清中VEGF、bFGF蛋白的含量。结果:不同浓度的(2.0、4.0μg·ml-1)CCVAF对H1299bFGFmRNA水平有降低作用,其中4.0μg·ml-1CCVAF作用7h后bFGFmRNA的表达明显降低,但对VEGFmRNA的表达无明显影响。CCVAF作用H1299细胞24h后,其细胞上清中VEGF、bFGF的含量较对照组明显减少(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:CCVAF可抑制H1299细胞bFGFmRNA和蛋白的表达及VEGF蛋白的表达。     

镉对大鼠子宫雌激素受体影响的体外研究

目的研究镉对子宫雌激素受体结合容量影响,并评价其环境内分泌干扰作用。方法制备大鼠子宫细胞质雌激素受体;运用正交实验设计[L16(45)]进行单剂量配基结合试验研究两因素——镉的浓度和预先孵育时间对雌二醇(E2)结合雌激素受体(ER)的最大结合容量(Bmax)影响;用竞争结合抑制试验,计算镉的IC50值,并以己烯雌酚为参照品计算相对亲和力(RBA),研究镉与ER的结合能力。结果体外不同浓度的镉(0、10-3、10-5、10-7mol/L)与孵育不同时间(0、30、60、90min)对E2与ER的最大结合位点数(Bmax,单位为pmol/mg蛋白)的改变均无统计学意义(P>0.05),同时也未见体外不同浓度的镉与孵育不同时间有交互作用,差异无统计学意义(P>0.05);其中0、10-3、10-5、10-7mol/L浓度的镉孵育0min的Bmax分别为203.15±75.16、203.41±22.78、220.82±45.35、209.10±49.66;孵育30min的Bmax分别为215.67±92.97、139.79±53.78、205.27±23.60、172.63±55.09;孵育60min的Bmax分别为197.11±50.68、203.24±66.33、183.92±31.89、183.33±32.70;孵育90min的Bmax分别为229.69±76.88、175.70±70.28、164.26±24.46、150.78±65.97。氯化镉的半数抑制浓度(IC50)为10-4～10-3mol/L之间,Cd与ER结合的RBA约为DES的10-6～10-7。结论镉对E2与子宫雌     

生化汤提取工艺的研究

目的 以阿魏酸含量为指标,考察生化汤的提取工艺。方法 用正交试验法进行优选,用高效液相色谱 法对生化汤中阿魏酸的含量进行测定,甲醇-水(含1％冰醋酸,45:55)为流动相,ZORBAX SB-C18柱(4．6 mm× 250mm,5μm),紫外检测波长为323 nm。结果 煎煮的最好方法为:用12倍的水浸泡30 min后加热30 min,再 加入10倍的水加热30 min。结论 不同煎煮方法对制剂活性成分含量有影响。     

针刺取穴与骨折愈合疗效关系初探

目的:初步探讨针刺取穴与骨折愈合疗效的关系,为临床研究和应用提供参考,方法选用48只体重2.0～2.5 kg的雄性纯种大耳白家兔,手术造成新鲜桡骨骨折模型,用区组随机法分为局部和邻近取穴组(A组)、远道和辨证取穴组(B组)、局部和邻近取穴加远道和辨证取穴组(C组)、空白对照组(D组)共四组,术后第一天开始对治疗组分别做电针治疗,于术后7 d、14 d、28 d取材做血液生化学、生物力学、放射学、组织学的观测.比较各组间上述指标的差别.结果:血清碱性磷酸酶含量14 d时A组和C组明显高于B组和D组(P＜0.01),骨折标本抗弯强度在28 d时A组和C组明显高于B组和D组(P＜0.01),X线量化评分14 d和28d时A组和C组明显高于B组和D组(P＜0.05),在各个时段各个指标A组与C组、B组与D组比较均无显著差异(P>0.05).结论:局部和邻近取穴能明显促进骨折愈合,而且具有操作简便,易于推广等优点,远道和辨证取穴则效果不明显,与前者合用也没有明显增强前者的疗效.     

耳穴疗法治疗老人失眠症之临床研究

目的:尝试利用科学性之方法探讨耳穴磁疗对老人失眠症之效果.方法:120位60岁或以上之老年患者,随机分配入三组.第一组及第二组为对照组,分别贴有灯芯或王不留行籽(不加压);第三组为实验组,贴有每粒含66高斯之磁珠(不加压).为针对老年患者常见之脏腑功能衰弱而致失眠,各人均选取相同之穴位:神门、心、肾、肝、脾、皮质下及枕,疗程共3周.结果:疗程完毕后,使用磁珠作耳疗之实验组于治疗前后的睡眠效果指数有明显之改进(P＜0.05),显效17%,有效为65%,总有效率为82%.此外,利用多元回归之反向淘汱法分析女性参加者之数据,发现利用磁珠作耳疗及参加者年龄对预测睡眠效果指数达显著水准(F3,106=9.04,P＜0.001,R2=0.20).结论:耳穴磁疗能有效地改善老人失眠症.     

900MHz微波电磁辐射对原代培养的大鼠脑皮质神经元能量代谢的影响

目的　研究 90 0MHz微波电磁辐射对原代培养的大鼠脑皮质神经元能量代谢的影响。方法　将大鼠脑皮质神经元暴露于 90 0MHz的连续性微波电磁辐射 (SAR =3 2 2mW g、PD =9mW cm2 ) ,每天暴露 2h ,连续 4d或 5d ,及一次性 1 2h暴露 ,以细胞色素氧化酶为观察指标 ,研究微波对神经元能量代谢的影响。结果　微波电磁辐射可使神经元细胞色素氧化酶活性降低。结论　神经元细胞色素氧化酶活性的改变并非“致热效应”所致 ;微波电磁辐射对神经元细胞色素氧化酶活性影响有蓄积毒性作用 ,其影响在一定程度上是可恢复的 ,并且与神经元接受微波辐射时细胞培养年龄关系不密切。     

维生素A干预对大鼠抗氧化能力及细胞膜流动性影响的研究

目的　通过对大鼠补充不同剂量维生素A(VA)观察机体抗氧化能力及对红细胞膜流动性的影响 ,了解抗氧化活性的最佳剂量。方法　将Wistar大鼠随机分为 4组 ,分别为维生素A缺乏组 (VA1组 )补充1 1 4 3(VA2组 )、4 2 86 (VA3组 )和 1 4 2 86 μgRE·kg- 1 ·d- 1 (VA4组 )维生素A三个剂量组。测定各组大鼠血浆VA含量、SOD、MDA和GSH Px的含量和活性 ,用荧光偏振度P值和微粘度 η值评价红细胞膜的流动性。 结果　各组血浆中VA水平随补充剂量的增加而增加。血浆中SOD、GSH -Px和MDA的结果显示 ,补充剂量为VA2、VA3组SOD的水平较VA缺乏组和VA4组明显偏低 (P <0 0 1 )。VA3组的MDA较其它 3个剂量组明显下降 (P <0 0 1 )。VA4组的SOD、MDA含量明显高于其它三个剂量组 (P <0 0 1 )。VA3组血浆中GSH -Px的活性明显升高 ,P <0 0 1。细胞膜流动性的结果显示 :VA3组P值最小 (P <0 0 1 ) ;VA4组P值明显增高 (P<0 0 1 )。微粘度 η在VA3组与VA缺乏组和VA2组之间未见明显差异 ,与VA4组相比明显下降 (P <0 0 1 )。结论　维生素A补充剂量为 4 2 86 μgRE·kg- 1 ·d- 1 时 ,能够发挥较好抗氧化作用 ,红细胞膜的流动性明显增加 ,过量摄入维生素A可造成机体的中毒反应 ,增加机体的氧化损伤