血清铁和铁蛋白与肝病患者肝纤维化指标的关系

目的研究血清铁和铁蛋白与肝脏疾病患者血清肝纤维化指标(透明质酸、层粘蛋白、人Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原)的关系。方法采用1s快速肝穿刺法对41例肝病患者取肝组织标本,行HE和铁染色后镜检;同时分别应用原子吸收光谱法、放射免疫法和酶联免疫法检测患者的血清铁、血清铁蛋白、肝纤维化指标。结果良性肝病患者与肝细胞癌患者比较,血清铁测定值无显著性差异(P>0.05),血清铁蛋白差异显著(P<0.05);良性肝病患者、早期肝细胞癌患者肝纤维化指标测定值与正常对照组间有显著性差异(P<0.05),晚期肝癌患者的肝纤维化指标与正常对照组间的差异无统计学意义(P>0.05)。血清铁及血清铁蛋白与层粘蛋白具有统计学上的相关性(血清铁r=0.439,P=0.031;血清铁蛋白r=0.476,P=0.016)。肝癌组织没有发现铁颗粒沉积。结论肝细胞癌患者多出现血清铁蛋白升高;血清铁、血清铁蛋白测定值和层粘蛋白测定值具有相关性;与良性肝病相比,肝癌组织的铁含量明显降低。晚期肝癌患者纤维化指标下降,可能与肿瘤组织抑制了胶原合成有关。酒精性脂肪肝多合并肝铁过载;对于良性肝脏疾病血清铁和铁蛋白测定值可以作为肝铁过载的重要指标。     

间期细胞核中abl和bcr基因的三维空间分布在bcr/abl融合基因形成中的作用

目的从生物体视学角度分析bcr/abl融合基因的形成机制。方法应用荧光原位杂交和激光共聚焦扫描显微镜技术,观察γ-射线对IM9细胞中的bcr和abl基因在间期核内三维空间分布的影响。结果abl和bcr基因在间期核内有其特定的分布区域,且该分布区域在细胞周期中呈规律性的动态变化。放射性照射会使abl和bcr基因之间的距离缩短。结论abl和bcr基因在间期细胞核内的易接近性是bcr/abl融合基因形成的因素之一。     

融合表达Fas死亡信号激发域的重组载体FasAD-pTYB2的构建

目的构建融合表达Fas死亡信号激发域(Fasactivationdomain,FasAD)的重组载体FasAD-pTYB2。方法应用半巢式逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)技术克隆Fas死亡信号激发域cDNA片段FasAD,插入通用载体pGEM-T中鉴定,然后装入Intein表达型原核载体pTYB2中,经IPTG(isopropylthio-β-D-galactoside)诱导表达融合蛋白。结果DNA序列测定显示克隆的cDNA片段序列正确。初步获得融合蛋白的表达,经Western-blotting鉴定,融合蛋白具有良好的Fas抗原性。结论上述结果提示可利用该表达型重组质粒制备人Fas死亡信号激发域多肽/intein的融合蛋白。     

乙型肝炎病毒adr型全基因组C区突变株的构建及其生物学活性检测

目的构建乙型肝炎病毒(HBV)全基因组C区L97和V60突变质粒,并检测其生物学活性。方法采用定点突变技术将HBVadr1.2拷贝基因组质粒p3.8Ⅱ进行C区点突变,构建L97和V60两个突变株。质粒经脂质体介导转染HepG2细胞,Southern杂交分析细胞内HBVDNA复制,ELISA检测培养上清中HBsAg和HBeAg。结果测序结果表明所构建的突变质粒p3.8L97和p3.8V60分别为nt2189A→C和nt2086C→G,突变质粒均可在宿主细胞内复制和表达。结论所构建HBV(adr型)全基因组C区L97和V60突变质粒具有生物活性。     

早孕期蜕膜组织细胞凋亡异常对妊娠的影响

目的探讨早孕期蜕膜组织细胞凋亡异常与妊娠维持的关系。方法应用TUNEL法检测凋亡的发生,原位杂交和免疫组化法检测Fas、FasL的表达。结果(1)正常早孕41d蜕膜组织细胞大量凋亡,Fas、FasL的mRNA及蛋白表达较强;(2)正常早孕54d凋亡细胞明显减少,Fas、FasL的表达明显减弱;(3)早孕55d自然流产组,蜕膜组织大量凋亡,且Fas、FasL的表达较正常早孕54d显著增强(P<0.05)。结论早孕期蜕膜组织凋亡异常可能是自然流产的机制之一,Fas途径可能是诱导异常凋亡的重要因素。     

纤维化及正常肝组织中血管紧张素Ⅱ 1型受体mRNA的表达

目的探讨纤维化及正常肝组织中血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)mRNA的表达情况。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应法检测18例肝癌周围纤维化肝组织和12例正常肝脏组织中AT1RmRNA的表达,同时逆转录AT1R特异性片段和内参片段(GAPDH),以二者的积分吸光度比值作为该受体mRNA的相对表达量。结果纤维化肝组织AT1RmRNA的相对表达量明显高于正常肝组织(1.27±0.45vs0.71±0.21,P<0.01)。结论AT1R可能在肝纤维化的发生发展中起一定的作用。     

免疫化学染色图像分析法检测细胞核因子κB

目的探讨一种简便、安全、可定量的细胞核因子κB(NF-κB)活性的检测方法。方法以晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白(HSA-AGE)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC),NF-κB/p65免疫化学染色后,分析细胞NF-κB/p65核/浆的阳性染色比,以经典的凝胶迁徙率泳动分析法作对照。结果HSA-AGE可激活HUVECNF-κB,呈时间、剂量依赖关系,两种方法检测的趋势一致。结论免疫化学染色的图像分析法可用于定量检测NF-κB的活性。     

对曾育21三体综合征患儿者行胚胎种植前遗传学诊断获妊娠1例

目的在体外受精-胚胎移植过程中,对高危夫妇进行胚胎种植前遗传学诊断以避免21三体综合征患儿的出生。方法常规激素替代治疗,对患者夫妇行胞母细胞质内单精子注射(ICSI),正常受精培养到第3天,对6~10细胞期胚胎活检1个细胞,利用荧光原位杂交技术(FISH)进行胚胎种植前遗传学诊断(PGD),挑选染色体数目正常的胚胎移植入患者子宫。结果共对8个胚胎进行PGD,7个有诊断结果者中6个为正常胚胎、1个为21三体胚胎。挑选3个胚胎移植,获得妊娠并产下一健康男婴。结论应用FISH对染色体数目异常的遗传疾病,如21三体综合征,进行胚胎种植前遗传学诊断是切实可行的。     

经静脉声学造影法与彩色多谱勒法对移植肾急性排异反应诊断的对比研究

目的比较应用间歇二次谐波成像结合声学定量方法与彩色多谱勒血流显像测量阻力指数方法对移植肾急性排异时血流灌注诊断的价值。方法建立8例犬异体移植肾急性排异模型,进行经静脉声学造影及声学定量和彩色多谱勒血流显像测定阻力指数,同时进行血清肌酐(Cr)监测。结果声学定量分析所得时间-强度曲线(TIC)参数的灌注曲线下面积(AUC)、峰值强度(PI)及彩色多谱勒血流显像所得阻力指数(RI)与血清Cr值明显相关,相关系数分别为0.978、0.972和0.708;PI-Cr、AUC-Cr相关程度较RI-Cr相关程度高。结论间歇二次谐波成像技术是检测异体移植肾血流灌注的有效手段,结合声学定量分析技术所获得的TIC参数较RI与移植肾急性排异反应发生的相关性更为密切。     

胰岛素抵抗细胞模型的胰岛素降解酶活性与胰岛素敏感性的关系

目的研究胰岛素降解酶(IDE)活性变化与胰岛素抵抗(IR)发生、发展之间的关系。方法以目前公认的IR细胞模型-高浓度胰岛素诱导培养的原代大鼠肝细胞为研究对象,检测细胞的IDE活性和反映细胞胰岛素敏感性的14C-2-脱氧葡萄糖掺入率及14C-醋酸盐掺入率,并观察IDE活性增强剂碘乙酰胺和IDE活性抑制剂氯喹对上述指标的影响。结果IR细胞模型IDE活性显著高于对照细胞,两种掺入率显著低于对照细胞,而且IR细胞模型IDE活性与两种掺入率呈显著负相关关系。此外,碘乙酰胺可显著提高IR细胞模型IDE活性,但显著降低其两种掺入率;氯喹的作用则与其刚好相反。结论IDE活性异常升高可能是引起大鼠肝细胞胰岛素敏感性下降的原因之一;胰岛素降解抑制剂氯喹可能通过抑制胰岛素降解过快所致的IR,从而改善机体的胰岛素敏感性。