一氧化氮激活应激活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶及p38MAP激酶诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡

目的研究脑缺血区周边组织一氧化氮合酶（NOS）的表达与应激活化蛋白激酶／c—Jun氨基末端激酶（SAPK／JNK）及p38MAP激酶（p38MAPK）激活的关系;探讨一氧化氮（NO）诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡的可能机制。方法采用TUNEL染色法观察脑缺血再灌注不同时段模型鼠缺血区周边组织凋亡的阳性神经元数量;免疫组织化学、蛋白免疫印迹方法检测活化型Caspase-3、神经元型一氧化氮合酶（nNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和SAPK／JNK,p38MAPK及其磷酸化组分的表达。结果再灌注后1h、2h缺血区周边组织nNOS表达明显增强;自1h起iNOS开始表达,12h达到高峰。1hp-SAPK／JNK表达较强,以后逐渐减弱;p38MAPK各时段表达均明显增强,以6h为著,p-p38MAPK表达高峰亦在6h。6h活化型Caspase．3开始表达,12h达到高峰;12h开始出现TUNEL阳性神经元,24h达到高峰。结论缺血区周边组织NOS表达的增强可能通过激活SAPK／JNK及p38MAPK诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡。     

体外反搏治疗血清对培养内皮细胞基因表达的影响

目的探讨经体外反搏治疗的冠心病患者血清对血管内皮细胞基因表达的调控效应。方法分别取接受体外反搏治疗的冠心病患者1、24和36h时间点的血清，用于培养人脐静脉血管内皮细胞。用cDNA基因芯片检测3个治疗时点反搏前、后血管内皮细胞基因表达谱。结果反搏前后比较，有10个基因（核转录因子、真核转录启动因子-4、平滑肌的肌球蛋白重链、α2-肌动蛋白、微管蛋白β肽链、组织相容蛋白G、黑色素黏附分子、神经介素B受体、蛋白激酶4K2、血小板凝血酶敏感蛋白-1）的表达在3个治疗时点上出现显著改变。在1h点均为上调，在24h、36h时点均为下调。结论体外反搏治疗冠心病患者血清对血管内皮细胞的炎症反应、细胞凋亡相关基因表达有调效应，并随体外反搏治疗时间的增加早抑制其表达的趋势。     

杭白菊增强TRAIL基因诱导大肠癌细胞凋亡及机制的实验研究

目的：探讨杭白菊提取液对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因（TRAIL）抑制人大肠癌细胞株DLD-1作用的影响及其可能机制。 方法： 杭白菊提取液联合重组腺病毒载体（Ad）介导的TRAIL基因作用于人大肠癌细胞株DLD-1，通过倒置显微镜、MTT比色法和流式细胞仪，研究分析其对DLD-1细胞抑制作用的效果。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和流式细胞术检测杭白菊提取液作用前后DLD-1细胞TRAIL、TRAIL受体（TRAIL-Rs）mRNA以及细胞表面TRAIL蛋白表达的变化。 结果： Ad/hTERT-gTRAIL对DLD-1细胞的生长抑制率和凋亡率分别为31.4%和13.5%；联合杭白菊提取液后，生长抑制率和凋亡率均显著提高，达93.1%和45.4%（P<0.05）。杭白菊提取液作用后DLD-1细胞TRAIL mRNA的表达量从作用前的0.46上调至1.01, 细胞表面TRAIL蛋白表达的百分率从作用前的2.2%升高到5.0%（P<0.05）。TRAIL死亡受体（DR4、DR5）mRNA的表达量分别从0.70和0.22上调至1.10和0.83（P<0.05），而TRAIL诱骗受体（DcR1、DcR2）mRNA的表达量从0.60和1.15下调至0.19和0.78（P<0.05）。 结论： 杭白菊提取液联合重组腺病毒载体（Ad）介导的TRAIL基因(Ad/hTERT-gTRAIL)能有效诱导DLD-1细胞的凋亡。杭白菊提取液上调TRAIL死亡受体表达以及下调TRAIL诱骗受体的表达可能在增强TRAIL诱导的凋亡作用中起着重要作用。     

白藜芦醇苷对慢性常压低氧性肺动脉高压模型中磷脂酶A2、一氧化氮和内皮素水平的影响

目的： 观察白藜芦醇苷（PD）对慢性常压低氧性肺动脉高压大鼠血浆及肺匀浆中磷脂酶A2(PLA2)、一氧化氮（NO）和内皮素1（ET-1）水平的影响，并探讨可能的机制。 方法: 29只健康SD大鼠随机分为正常对照组、单纯低氧组和低氧加PD组。右心导管法检测大鼠肺动脉平均压力（mPAP），观察右室/左室+室间隔重量比值（R/L+S）、血浆及肺匀浆中PLA2活性、NO和ET-1含量的变化。 结果: 低氧21 d后大鼠mPAP、R/L+S、血浆及肺匀浆中PLA2活性和ET-1含量显著高于对照组，NO含量显著低于对照组。PD预处理组上述变化可受抑制或减轻。 结论: PD可有效防治慢性常压低氧性大鼠肺动脉压力的升高，其机理与抑制PLA2活性及ET-1释放，促进NO产生有关。     

葛根素对肺缺血-再灌注损伤时Fas/FasL表达的影响

目的：探讨葛根素对肺缺血-再灌注损伤（PIRI）时Fas/FasL表达的影响。方法：采用在体兔单肺原位缺血-再灌注模型。实验兔70只，随机分为假手术对照组（sham，10只）、肺缺血-再灌注组（I-R，30只）和肺缺血-再灌注加葛根素组（Pur，30只）。每组又分为再灌注1 h、3 h、5 h 3个亚组，每个亚 组10只，分别于再灌注 1 h、3 h、5 h 3个时点取左肺组织，观察Fas/Fas配体（Fas/FasL）mRNA定位表达、凋亡指数（AI）、肺组织湿干重比（W/D）、肺损伤组织学定量评价指标（IQA）及光镜、电镜下的组织形态学改变。结果：肺再灌注1 h、3 h、5 h，Pur组Fas/FasL mRNA在肺小动脉内（外）膜、肺小静脉内膜、肺泡上皮及肺支气管上皮呈弱阳性表达，明显低于同一时点I-R组（P<0.05）；AI、W/D和IQA值显著低于I-R组（P<0.01和P<0.05）；肺组织形态学异常改变不同程度减轻。结论：葛根素可下调肺组织Fas/FasL mRNA的表达而减轻细胞凋亡，对PIRI发挥积极的防治作用。     

TrkA对哮喘小鼠下呼吸道气道阻力及IL-1β表达的上调作用

目的研究NGF的特异性高亲合力受体TrkA对哮喘小鼠下呼吸道气道阻力及IL-1β的表达的调节作用,探讨TrkA介导的信号通路在哮喘发病机制中的作用。方法BALB/c小鼠30只,按随机数字表法均分为正常对照组、哮喘组、TrkA抗体阻断组。利用An iRes2005肺功能仪测小鼠气道阻力,利用免疫组织化学方法测定IL-1β表达,M etamoph图象分析系统对结果进行分析。结果哮喘小鼠吸气阻力和呼气阻力明显高于正常组小鼠(P<0.01),TrkA组吸气阻力和呼气阻力明显低于哮喘组。免疫组织化学结果显示TrkA抗体阻断组肺(0.324±0.013)、C7-T5节段脊神经节(0.301±0.065)及对应的脊髓后角(0.216±0.019)IL-1β免疫阳性产物平均光密度值明显低于哮喘组小鼠(0.796±0.025、0.745±0.016、0.528±0.011,P<0.01)。结论NGF介导的TrkA通路的激活可上调IL-1β的表达,介导哮喘气道高反应和炎症反应。     

SH2-Bβ在局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质的表达

目的研究信号分子SH2-Bβ在局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑顶叶皮质表达情况为阐明脑缺血的演变的分子机制从而为临床治疗提供理论依据。方法用线栓法阻塞大鼠右侧大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注模型,动物随机分为假手术组和缺血再灌注组,应用免疫组织化学SABC法和图像分析方法检测大鼠顶叶皮质SH2-Bβ表达情况。结果假手术组右侧顶叶皮质SH2-Bβ有很少的表达,而缺血再灌注组3 h时间点SH2-Bβ在右侧顶叶皮质的平均光密度值比假手术组明显增高,持续到24 h,到48 h时间点开始下降,到72 h已逐渐下降但仍高于假手术组(P<0.05)。结论局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质SH2-Bβ被诱导而表达增高,SH2-Bβ可能参与NGF对缺血神经元的保护作用机制,促进神经元存活和损伤的修复。     

NGF对哮喘小鼠气道阻力和肺组织Akt/PKB表达的影响

目的探讨NGF介导的Akt/PKB信号转导通路在哮喘小鼠发病中的作用。方法BALB/c小鼠30只,按随机数字表法随机分为正常对照组、哮喘组、NGF阻断组。利用An iRes2005肺功能仪测小鼠气道阻力,运用免疫组织化学方法测定Akt/PKB的组织表达,M etamoph图像分析系统对结果进行分析。结果哮喘小鼠吸气阻力和呼气阻力明显高于正常组小鼠(P<0.01),NGF阻断组小鼠吸气阻力和呼气阻力明显低于哮喘组。免疫组织化学染色结果显示哮喘组Akt/PKB在肺组织炎性细胞的表达及AK t/PKB阳性炎症细胞数明显多于正常对照组(P<0.05),而NGF阻断组则明显低于哮喘组(P<0.05)。结论NGF介导哮喘气道高反应和炎症反应,Akt/PKB参与了哮喘发病中NGF介导的信号传导。     

NGF对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB表达的上调作用

目的探讨外源性神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB和磷酸化的CREB(p-CREB)表达的影响。方法用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学、W estern B loting和图像分析方法检测大鼠海马CA1区CREB和磷酸化CREB表达。结果假手术组海马CA1区CREB有明显表达,缺血再灌注组CA1区表达较假手术组减少,NGF组CA1区的CREB表达多于缺血再灌注组(P<0.05)。假手术组海马CA1区p-CREB表达很少,缺血再灌注组p-CREB表达多于假手术组,NGF组p-CREB表达多于缺血再灌注组(P<0.05)。结论NGF上调海马CREB和p-CREB的表达,对缺血神经元起保护作用,CREB和p-CREB参与NGF对缺血神经元的保护作用机制。     

地塞米松对哮喘豚鼠肺内、脊神经节及脊髓背角内蛋白激酶C表达的抑制作用

目的探讨地塞米松对哮喘豚鼠肺内、C7～T5脊神经节及对应节段脊髓背角内蛋白激酶C（PKC）表达的抑制作用。方法利用免疫组织化学和Western blotting方法。研究哮喘豚鼠肺内、C7～T5脊神经节及对应节段脊髓背角内PKC的免疫反应变化。结果哮喘组豚鼠肺内、C—L脊神经节及对应节段脊髓背角内PKC平均光密度值明显高于对照组（P〈0．01）,而地塞米松组则明显低于哮喘组（P〈0．01）。结论PKC可能参与哮喘的发病过程,地塞米松抑制哮喘豚鼠PKC的表达可能是其治疗哮喘的作用机制之一。