LC-MS/MS法测定大鼠血浆中低聚仿刺参糖胺聚糖的浓度及初步药物动力学研究

目的 建立大鼠血浆中低聚仿刺参糖胺聚糖（DAHG-1W）的LC-MS/MS测定方法,研究大鼠单次静脉注射DAHG-1W后的血浆药物动力学。方法 大鼠血浆样品经灰色链霉菌蛋白酶预处理、温和酸水解脱除岩藻糖支链、硫酸软骨素ABC酶降解成主链二糖并用2-氨基吖啶酮衍生后,进行液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）分析。色谱分离采用Cortecs UPLC T3色谱柱（2.1mm×150 mm, 1.6 μm）,流动相为10 mM乙酸铵水溶液-甲醇,梯度洗脱。质谱检测采用加热电喷雾离子源（H-ESI）,以负离子方式检测,AMAC标记的CS-4S6S和CS-2S4S（内标）的多反应监测（MRM）离子对均为m/z 732.0→652.4,保留时间分别为9.0和7.4 min。应用上述LC-MS/MS方法测定大鼠尾静脉注射DAHG-1W（5 mg·kg-1）后的血浆药物浓度,采用WinNonLin 6.0版软件计算药代动力学参数。结果 大鼠血浆中DAHG-1W在3.91-125.00 μg·mL-1浓度范围内线性关系良好;日内和日间精密度均小于15%,准确度为102.60%-111.17%;回收率为89.16%-103.35%;无明显基质效应且血浆样品稳定性好。大鼠静脉注射给药后DAHG-1W的血药峰浓度（Cmax）为（36.73±2.10）μg·mL-1,半衰期（t1/2）为（277.31±56.22）min,清除率（Cl）为（0.82±0.09）mL·min-1·kg-1,0-300 min药时曲线下面积（AUC0-t）为（3638.30±45.84）min·μg·mL-1。结论 本研究建立了大鼠血浆中DAHG-1W的LC-MS/MS分析方法,可应用于DAHG-1W在大鼠体内的药物动力学研究。     

慢性布氏杆菌性脊柱炎12例临床分析

目的探讨布氏杆菌性脊柱炎的MRI和CT影像学表现及临床特征,提高临床诊断水平。方法回顾性分析12例布氏杆菌性脊柱炎患者的临床资料,包括MRI和CT影像学表现,实验室检查结果等。结果 12例均有不同程度腰痛,影像学均误诊为脊柱结核;CT显示相邻椎体局灶性边缘性骨质破坏,骨质破坏同时骨质增生硬化,呈"花边椎"改变,病变椎体均未见压缩塌陷及后凸畸形;MRI检查除显示CT特征外,还清晰显示病变椎旁软组织异常T1WI低信号、T2WI高信号;12例临床实验室检查白细胞计数均在正常范围,但单核细胞计数及其比率均有不同程度升高,12例血沉均增快;12例布氏杆菌血清试管凝集法滴度均1∶160,虎红平板凝集试验均为阳性,PCR法检测均为阳性。结论布氏杆菌脊柱炎MRI及CT检查具有一定特征性影像表现,但不易与脊柱结核相鉴别,结合实验室检查及临床表现等可明确诊断。     

听障儿童疑问语调发音异常干预的个案研究

目的：探讨听障儿童疑问语调发音异常的矫治方法。方法对1例5岁4个月配戴助听器的疑问语调发音异常听障儿童实施针对性训练,采用单一被试研究方法,对比个案干预前后疑问语调边界调的终点基频值和基频斜率值。结果干预前后被试基线期和处理期的终点基频值（P=0.0156<0.05）和基频斜率值（P=0.0011<0.05）数据呈显著性差异。结论本研究设计的综合性康复训练方案使听障儿童疑问语调发音异常得到有效改善,可为临床康复提供理论与实践依据。     

舒芬太尼用于高龄患者全麻诱导气管插管的临床研究

目的：观察舒芬太尼用于高龄患者全麻诱导气管插管的临床效果。方法选择ASAⅡ～Ⅲ级,需在气管插管全身麻醉下行四肢手术的高龄（年龄≥80岁）患者45例,随机分三组：舒芬太尼0.15μg/kg 组（ S1组）、舒芬太尼0.25μg/kg组（S2组）及芬太尼2μg/kg组（F组）,每组15例。所有患者均分别记录基础值（T0）、插管前1 min（T1）、插管后1 min（T2）和插管后5 min（T3）的收缩压（SP）、舒张压（DP）和心率（HR）,并计算各时间点 SP 与 HR 的乘积（ RPP）;记录不良反应的发生及药物使用情况。结果三组T1时间点BP和T3时间点SP、S2组T2时间点SP和F组T3时间点DP均显著低于同组T0时间点（P均<0.01）,F组T2时间点DP显著高于同组T0时间点（P<0.05）和S2组同时间点（ P<0.05）,S1组和S2组T1时间点SP、S2组T2时间点BP均显著低于F组同时间点（ P<0.01或0.05）。S1组和F组T2时间点HR均显著大于同组T0时间点（ P均<0.01）和S2组同时间点（ P<0.05）。三组T1、T3时间点RPP均显著小于同组T0时间点（ P<0.01或0.05）。F组T2时间点RPP显著大于同组T0时间点（ P<0.05）和S2组同时间点（P<0.05）。S2组声带活动发生率、丙泊酚和瑞芬太尼使用率小于S1组,罗库溴铵、新福林使用率均显著小于S1组和F组（P<0.05）。结论舒芬太尼0.25μg/kg用于高龄患者全麻诱导,不仅能抑制插管反应,减少不良反应,而且能保持插管前后心血管功能稳定和心肌氧供需平稳,安全可行。     

高效液相色谱法测定大鼠肺组织中百草枯质量浓度

目的：建立组织中百草枯质量分数高效液相色谱检测方法,观察百草枯染毒大鼠模型肺组织中百草枯含量的动态变化趋势。方法样品处理采用35％高氯酸处理。流动相为0.1 mol／L磷酸缓冲液－乙腈;流速1.0 ml／min ;柱温28℃;检测波长258 nm。结果所采用方法在2～200μg／ml范围内线性关系良好。平均绝对回收率为91.4％,RSD均小于3％;平均相对回收率为100.67％,RSD均＜6％。日内和日间RSD均＜6％,冻融及冻存后百草枯样品质量分数测定结果无显著性差异。结论高效液相色谱法快速、准确,无组织中杂质干扰,适用于百草枯染毒大鼠模型肺组织中百草枯质量浓度的分析测定。     

置入铜丝缠绕型支架制作猪急性心肌梗死模型

目的探讨在猪冠状动脉内置入铜丝缠绕型支架制作急性心肌梗死模型的可行性,建立一种新的急性心肌梗死模型方法。方法16头中国实验用小型猪经股动脉穿刺,在前降支置入自制的铜丝缠绕型支架。1周内观察心肌肌钙蛋白I、心电图、心脏超声和冠状动脉造影。然后处死取出心脏,取目标冠状动脉和心肌,做病理学检查。结果16头小型猪均发生了心肌梗死。梗死发生后死亡2头,其中1头在术后8 h猝死,1头在术后1周冠状动脉造影复查时死于麻醉中;其余14头均存活在1周以上,完成复查,总的成功率为87.5%。结论该模型制作具有操作简单、创伤小、成本低、死亡率低、成功率高等诸多优点,可作为较好的实验研究动物模型。     

癫痫外科研究生临床教学的体会

通过对神经外科研究生的临床教学,做好癫痫临床教学工作必须做到：临床教学前的准备工作,让研究生对癫痫外科观念有直观的了解;在教学中教师应正确指导学生的问诊、体格检查;培养学生癫痫外科定位诊断的临床思维;同时要做好教学后病例总结工作。     

加巴喷丁联合血液透析滤过治疗尿毒症不宁腿综合征

目的探讨加巴喷丁联合血液透析滤过(HDF)治疗尿毒症不宁腿综合征(RLS)临床疗效。方法 60例尿毒症并发RLS患者简单随机分成两组,试验组(HDF+加巴喷丁)、对照组(HDF),各30例,治疗前和1个月后,测定血清中甲状旁腺激素(PTH)、铁蛋白浓度,并分别采用RLS病情严重程度评分量表和匹兹堡睡眠质量表评估疗效。结果两组PTH水平、RLS量化评分和匹兹堡睡眠质量表评分治疗后比治疗前显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);试验组治疗后RLS量化评分和匹兹堡睡眠质量评分较对照组治疗后低(P<0.01);试验组有轻度嗜睡反应。结论加巴喷丁联合HDF可以有效治疗尿毒症RLS。     

2433例孕妇血浆胎儿游离DNA无创性产前非整倍性检测结果分析

目的探讨应用高通量测序技术对孕妇血浆胎儿游离DNA进行无创性胎儿染色体非整倍性检测的准确性。方法选择2011年10月至2013年9月于佛山市妇幼保健院行无创性非整倍性产前基因检测的2433例名孕妇,孕周12-24w,均为单胎,年龄21-41岁。对无创性非整倍性筛查高风险的孕妇行羊膜腔穿刺或脐静脉血穿刺,行常规染色体核型分析。对筛查结果低风险者行电话随访其胎儿出生后情况,统计分析无创性产前非整倍性检测的准确性。结果2433例孕妇中,母体血浆胎儿游离DNA高通量测序技术检测出42例胎儿染色体非整倍性高风险。其中33例通过羊膜腔穿刺或脐静脉血穿刺对比分析,27例21三体高风险者行有创性产前诊断,26例为47,XN,＋21,l例为46,XN。2例18三体高风险者行进一步确诊,其中1例为47,XN,＋18,1例为46,XN。2例i3三体高风险孕妇结果均与穿刺结果为46,XN。1例XO高风险孕妇与穿刺结果为45X[25]／46,XX[25]。1例XXY高风险孕妇结果为47,XXY。孕妇血浆中游离胎儿DNA检测结果阴性者2391例,经电话随访有效者2145例,截止至2014年4月30日,已出生的新生儿均未发现唐氏综合征患儿。无创性非整倍体检测对常见染色体非整倍体的检出率100％,灵敏废100％,特异度99.8,假阳性率0.33％,假阴性率为0,阳性预测值87.9％。结论应用高通量测序技术在染色体非整倍性无创性检测具有很高的灵敏性,假阳性率很低,在胎儿染色体非整倍性疾病的产前检测中具有广泛的应用前景。     

L-甲硫氨酸通过调节脊髓DNA甲基化水平减轻甲醛溶液所致急性炎性痛机制研究

背景　甲硫氨酸能够促进DNA甲基化的发生,DNA甲基化参与疼痛的发生发展和维持。急性炎性痛是临床常见症状,控制不及时会转化成慢性炎性痛,外源性补充甲硫氨酸可能通过调节DNA甲基化参与调节急性炎性痛,改善患者疼痛症状。目的　本研究采用甲醛溶液诱导急性炎性痛模型大鼠,观察注射L-甲硫氨酸（L-MET）是否会减轻大鼠足底急性炎性痛并探讨其机制,以期为寻找新的疼痛生物标志物和开发理想的镇痛新药提供理论依据。方法　2017年7月-2018年12月,将24只健康成年清洁级雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠按照随机数字表法分为A组（0.9%氯化钠溶液+0.9%氯化钠溶液组）、B组（L-MET+0.9%氯化钠溶液组）、C组（0.9%氯化钠溶液+2 g/L甲醛溶液组）、D组（L-MET+2 g/L甲醛溶液组）,每组6只。B组、D组腹腔注射L-MET,2次/d,总量不超过0.18 mg/kg,连续注射3 d;A组、C组注射等量0.9%氯化钠溶液。C组、D组左后足足跖部皮下注射2 g/L甲醛溶液20 μl,制作甲醛溶液所致急性炎性痛模型,大鼠足部肿胀并会出现相应的抬足舔足行为视为模型制作成功;A组、B组注射等量0.9%氯化钠溶液。全程记录给药后60 min大鼠行为学,并记录疼痛次数,每隔3 min为1个观察时段,共分20个观察时段。行为学检测结束后,将大鼠处死,取脊髓L4~L6之间脊髓组织,检测大鼠脊髓全基因组DNA甲基化水平及大鼠脊髓DNA甲基化转移酶（DNMT）1、DNMT2、DNMT3a、DNMT3b RNA水平。结果　A组、B组大鼠无明显不适异常反应;C组、D组大鼠出现躁动不安、注射足抬起不着地、舔咬或抖动注射足等反应,其疼痛行为反应呈典型的双相变化,从注射后即刻开始,持续3~5 min的急性疼痛时相（第一时相）,5~10 min的静息期,随后出现可持续0~45 min的继发性疼痛时相（第二时相）。C组、D组大鼠各时间点疼痛次数均多于A组、B组（P<0.05）;D组大鼠6~39 min疼痛次数少于C组（P<0.05）。B组、D组大鼠脊髓全基因组DNA甲基化水平高于A组（P<0.05）;C组、D组大鼠脊髓全基因组DNA甲基化水平低于B组（P<0.05）;D组大鼠脊髓全基因组DNA甲基化水平高于C组（P<0.05）。C组、D组大鼠脊髓DNMT3a、DNMT3b RNA水平高于A组、B组（P<0.05）;D组大鼠脊髓DNMT3a RNA水平低于C组,DNMT3b RNA水平高于C组（P<0.05）。结论　L-MET对于甲醛溶液所致急性炎性痛模型大鼠具有明显镇痛作用,其机制与脊髓全基因组DNA甲基化水平以及DNMT水平的变化有关。