儿童肺结核支气管肺泡灌洗液Xpert MTB/RIF检测的诊断准确性研究

目的探讨支气管肺泡灌洗液的Xpert MTB/RIF检测对儿童肺结核的诊断价值。方法有疑似活动性结核病的临床症状和体征，行纤维支气管镜检查并留取了支气管肺泡灌洗液的患儿为研究对象。以支气管肺泡灌洗液作为病原学检测标本，分别以病原学诊断活动性结核病和临床诊断活动性结核病为金标准，以Xpert MTB/RIF为待测标准，考察Xpert MTB/RIF对病原学和临床诊断结核的诊断价值。基于样本中结核分枝杆菌（MTB）的Ct值反映所检测样本中MTB的载量；通过对利福平耐药位点的检测，对MTB菌株进行药物敏感性检测。结果符合本文纳入标准的疑似结核病患儿351例，男198例，女153例，年龄（5.9±3.9）岁。肺结核患儿125例，其中病原学诊断结核43例（34.4%），临床诊断结核82例（65.6%）；肺结核合并支气管结核51例（40.8%），单纯肺结核74例（59.2%）；非结核呼吸道感染性疾病226例，肺炎支原体肺炎187例（82.7%），细菌性肺炎39例（17.3%）。Xpert MTB/RIF在病原学诊断和临床诊断结核的敏感度分别为79%(95%CI：63%~89%)和51%(95%CI：40%~62%)，差异有统计学意义（χ2=9.18，P=0.002）；肺结核合并支气管结核的敏感度为80%（66%~90%),单纯肺结核的敏感度47%(35%~59%)；病原学诊断和临床诊断结核、合并支气管结核和单纯肺结核特异度均为100%(95% CI：97.9%~100%)。Xpert MTB/RIF检测病原学诊断结核敏感度高于临床诊断结核，肺结核合并支气管结核敏感度高于单纯肺结核，差异有统计学意义（χ2=13.88，P<0.001）；支气管肺泡灌洗液的MTB核酸检出载量病原学诊断结核高于临床诊断结核，差异有统计学意义（χ2=7.37，P=0.025）。76例Xpert MTB/RIF检测阳性患儿中，利福平耐药2例（2.6%）。结论支气管肺泡灌洗液的Xpert MTB/RIF检测在儿童肺结核诊断中具有较高价值，可在缺乏细菌学诊断证据的临床诊断结核病儿童中发现MTB，具有较高的敏感度，有助于提高儿童结核病病原学检出率。     

海螵蛸多糖的提取分离及活性组分CPS-1的纯化

目的:从海洋中草药海螵蛸(乌贼骨)中提取分离得到多糖活性物质.对粗多糖中主要的活性组分CPS-1进行纯化,得到成分相对均一的天然活性多糖.方法:用热水抽提法提取海螵蛸多糖粗品,并对提取工艺进行正交设计,优化提取方法.对粗品组分进行总糖量测定.用DEAE-Sepharose F.F柱及Sepharose CL-6B柱对海螵蛸多糖粗品进行分离.通过活性检测实验确定活性部分.最后使用Sephacryl S-300柱进一步纯化.用HPLC来检测精品多糖的纯度.标准曲线法测定相对分子质量.结果:成功得到海螵蛸粗多糖.经过离子交换柱DEAE-Sepharose Fast Flow和Sepharose CL-6B柱及分子筛Sephacryl S-300柱的进一步分离纯化和活性跟踪,最后得到相对均一的活性精品多糖CPS-1,其含糖量达93.6%,相对分子质量为1×106.结论:不同的提取条件影响海螵蛸多糖的得率.不同性质的分离材料能够将相对分子质量及电荷有差异的多糖分离,达到分离的目的.精品多糖CPS-1是从海洋中草药海螵蛸中得到的均一多糖组分.     

胃大部切除术病人营养状况研究

目的：研究根治性胃大部切除术对进展期胃癌病人营养及免疫状况的影响。方法：30例接受根治性胃大部切除术的病人，分别于术前及术后第2．7、14d采血，测定血清视黄醇结合蛋白、转铁蛋白、总铁结合力、血清铁、免疫球蛋白。结果：术后2d，所有的营养和免疫指标均急剧下降（P〈0．01）。术后14d，血清视黄醇结合蛋白已恢复到术前水平（P〉0．05），而血清总铁结合力、血清铁、转铁蛋白及各项免疫指标仍未恢复（P〈0．05）。结论：根治性胃大部切除术对胃癌病人营养水平及免疫功能的影响是暂时性的，可逐渐逆转；胃癌病人术后应注重补铁；胃癌病人免疫状况与营养状况呈正相关性。     

非线性混合效应模型估算环孢素在人体相对生物利用度和药动学参数

目的:用非线性混合效应模型(NONMEM)估算环孢素2种制剂在人体的相对生物利用度和药动学参数。方法: 20名男性志愿者随机、交叉单次口服环孢素微乳剂和普通乳剂500mg。HPLC法测定血药浓度。经典药动学方法和NONMEM法估算相对生物利用度和药动学参数。结果:用NONMEM法估算环孢素微乳剂生物利用度是普通乳剂的(209±s60) %;普通乳剂和微乳剂的V/F分别是(0. 30±0. 10), (0. 14±0. 06)L;Ka分别是0. 40±0. 11, 0. 9±0. 5;Ke分别是0. 16±0. 18, 0. 32±0. 13;K12分别是0. 23±0. 17, 0. 20±0. 17;K21分别是0. 021±0. 021, 0. 17±0. 08, 与传统方法相比基本一致。结论:NONMEM法为药物生物利用度评价和药动学参数计算提供一种简捷和快速的数据分析途径。     

武汉市海洛因依赖者流行病学回顾性调查

目的:了解武汉市海洛因依赖者的流行病学变化。方法:回顾性调查研究2002年-2004年3a在湖北省各戒毒所收治的武汉市户籍海洛因依赖者的社会人口学特征及滥用情况。结果:(1)人口学特征比较:3a来女性吸毒人口所占比例明显上升(P<0.01),无业人员所占比例逐年加大(P<0.01);(2)毒品滥用情况比较:3a来吸毒年限、戒毒次数和静脉注射滥用方式比例逐年增加(P均<0.01)。结论:武汉市常住居民中海洛因滥用形势仍相当严峻,禁毒工作仍需加强。且应加强在吸毒群体中的宣教工作。     

抗心律失常药物作用的新靶点M3R/IKM3

目的研究心脏M₃受体/M₃受体介导的钾通道与心律失常的关系，寻找抗心律失常药物的新靶点。方法 分别以结扎大鼠左冠状动脉前降支所致急性心律失常模型和膜片钳技术为基础，观察M₃受体的干预作用及作用机制。结果M₃受体阻断剂4DAMP(4-diphenylacetoxy-n-methylpiperidine-methiodide)加重结扎大鼠冠状动脉前降支所致心律失常，而M₃受体激动剂胆碱能明显对抗其作用。其他亚型受体阻断剂，M₁受体阻断剂(prienzepine)、M₂受体阻断剂(methotramine)和M₄受体阻断剂(tropicamide)对结扎大鼠左冠状动脉前降支所致急性心律失常无影响。在膜片钳实验中发现，胆碱可激活一种延迟整流钾电流(IK_M3)，此电流可被M₃受体阻断剂4DAMP明显抑制。而M₁，M₂和M₄受体阻断剂对胆碱介导的电流无作用。结论胆碱通过激动心肌M₃受体诱发一外向钾电流(IK_M3)，并在维持心脏离子通道平衡中起重要作用。M₃受体/IK_M3可能是抗心律失常新靶点。     

survivin 反义核酸增强PANC-1 细胞对5-Fu敏感性的研究

 目的 研究survivin反义核酸诱导胰腺癌细胞株PANC-1的凋亡和增强对5-Fu敏感性的影响。方法 我们应用构建的survivin反义核酸真核表达栽体电转染PAND-1细胞，RT-PCR检测survivin mRNA表达，细胞计数和MTT实验测定转染后细胞对5-Fu敏感性，流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 survivin反叉核酸可抑制PANC-1细胞中survivin mRNA的表达，并能抑制PANC-1细胞生长，提高PANC-1对5-Fu敏感性，流式细胞仪检测凋亡率明显增加。结论 survivin反义核酸能增强5-Fu诱导的PANC-1细胞凋亡，联合survivin反义核酸和5-Fu可以改善胰腺癌的治疗效果。     

靶向Survivin基因的短发卡RNA在体内对U251细胞移植瘤的影响

Surivin基因属于凋死蛋白抑制因子（inhibitor of apoptosis,IAP）家族，具有抗细胞凋亡、促细胞增殖和促血管形成等多种生物学活性，其在脑胶质瘤发生和发展过程中的作用尚不完全明确，本研究结盟在观察稳定转染靶向Survivin基因的特异性短发卡RNA（shRNA）真核表达载体对人脑胶质母细胞瘤U251细胞裸鼠体内肿瘤生长和血管形成的影响。方法：将U251细胞，稳定转染Survivin基因shRNA真核表达载体pWHI-SR的U251-SR细胞，以及稳定转染空载体pWHI的U251-P细胞，分别接种于裸鼠背部皮下，建立人脑胶质瘤裸鼠皮下移植瘤模型，定期观察肿瘤生长情况，测定肿瘤体积、绘制肿瘤生长曲线，观察45天后处死动物、称瘤重，采用免疫组化SABC法检测Survivin、增殖细胞核抗原（proliferating cell muclear antigen，PCNA）以及八因子相关抗原（factor Ⅷ related antigen,FⅧRAg）在各组肿瘤标本中的表达，采用TUNEL法检测凋亡细胞，分别计算各组肿瘤标本的增殖指数（proliferative index,PI），凋亡指数（apoptotie index,AI）以及微血管密度（microvessel density,MVD）。结果：与U251、U251-SR组肿瘤标本，U251-SR组裸鼠肿瘤形成时间延迟，肿瘤生长缓慢，肿瘤体积及瘤重均明显减小（P〈0.01）；U251-P组裸鼠相丝，U251-SR组肿瘤标本Survivin蛋白表达明显下调：PI和MVD明显减少，AI明显升高（P〈0.001）。结论：靶向Survivin基因的sbRNA能够在体内明显抑制U251细胞的肿瘤生长和血管形成，Survivn基因可作为脑胶质瘤基因治疗的一个良好靶点，而RNA干涉（RNA interference,RNAi）技术可为脑胶瘤基因治疗的一个良好靶点，而RNA干涉（RNA interference，RNAi）技术可为脑胶质瘤的基因治疗提供新的重点手段。     

薄荷组织培养研究

目的采用组织培养的方法,进行薄荷种苗快速繁殖技术研究,为其种苗生产的现代化提供科学依据。方法用不同浓度和配比的6-BA和NAA以及适当调节铁离子浓度对薄荷茎段进行组织培养。结果以6-BA:NAA为4:0.2ppm配比时芽丛诱导数最多,同一材料粗细差异极其显著的母本茎段接种于不同浓度和配比的6-BA和NAA组合的培养基上培养三代后,其后代无显著粗细差异,但粗茎段母本的后代在生长性状上优于细茎段母本;试验同时表明,铁离子浓度过高会抑制芽的生长。结论适宜的芽增殖培养基:4ppm6-BA+0.2ppmNAA。     

人血浆中氯氮平及去甲氯氮平的固相萃取HPLC测定

建立了HPLC法测定人血浆中的氯氮平及去甲氯氮平含量.采甩C18柱,流动相为甲醇-水-三乙胺-乙酸(600:400:4:2),检测波长254nm,固相萃取法处理血样,地西泮为内标.氯氮平及去甲氯氮平在50～2000ng/ml范围内线性关系良好.平均方法回收率分别为103.1%和102.1%.