脂多糖致大鼠急性肺损伤早期Ⅰ型前胶原羧基端肽的表达

目的：观察脂多糖（LPS）致大鼠急性肺损伤（ALI）早期是否存在肺纤维增生,探讨其在ALI发病机制中的作用。方法：将27只SD大鼠随机分成3组,其中对照组为气管内滴注NS（生理盐水）12h后取材,LPS1组、LPS2组为气管内滴注LPS 1.0ml/kg（浓度为100μg/ml）后分别于12h、24h取材。用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法测定血清及肺泡灌洗液（BALF）中Ⅰ型前胶原羧基端肽（PⅠCP）的浓度。结果：LPS2组大鼠血清PⅠCP浓度为（64.75±11.97）μg/L显著高于对照组（12.38±3.59）μg/L和LPS1组（13.96±4.30）μg/L（P〈0.05）,而LPS1组和对照组间差异无显著性（P〉0.05）;LPS2组大鼠BALF中PⅠCP浓度为（35.26±3.32）μg/L显著高于对照组（6.90±1.99）μg/L和LPS1组（6.92±2.50）μg/L（P〈0.05）,而对照组和LPS1组间差异无显著性（P〉0.05）。结论：LPS致大鼠ALI后24h血清及BALF中PⅠCP浓度显著增高提示ALI早期肺纤维增生存在。     

适用于shRNA表达研究的克隆载体构建

目的:建立一种适用于shRNA表达研究的克隆载体。方法:通过PCR扩增一段含有自杀基因ccdB和卡那霉素抗性基因的DNA序列,将其双酶切后克隆至shRNA表达载体pSilencer3.1-H1neo中,得到重组体pSilencer3.1-ccdB。运用此重组体构建荧光素酶的shRNA表达载体并设立对照进行非重组背景的结果比较。结果:成功建立了pSilencer3.1-ccdB克隆载体。应用此载体构建荧光素酶的shRNA的表达载体,结果显示完全消除了非重组背景。结论:建立了适用于shRNA表达研究的克隆载体,为进一步研究siRNA的基因功能奠定了基础。     

奎硫平与利培酮治疗老年男性精神分裂症对照研究

目的:比较奎硫平和利培酮对老年男性精神分裂症疗效及安全性。方法:将68例年龄60岁以上的精神分裂症病人,随机分为奎硫平组和利培酮组,进行为期8周的治疗。于治疗前及疗后1、2、4、6、8周末进行阳性和阴性症状量表(PANSS)、不良反应症状量表(TESS)评定及有关实验室检查。结果:治疗结束时,两组PANSS评分较入组时显著减低(P<0.01),临床总有效率:奎硫平组90.3%,利培酮组86.7%,无显著性差异(P>0.05),第2、4周末,阴性症状减分奎硫平组较利培酮组显著。奎硫平组兴奋、激越、体位性低血压的发生率较高。结论:奎硫平和利培酮治疗老年男性精神分裂症均有良好疗效,奎硫平更具选择性。     

HIV多抗原位点同源序列合成基因的表达及活性鉴定

目的：在原核表达载体系统中对HIV-1gp41/gp120和HIV-2gp125/gp36外膜蛋白多个抗原位点同源序列合成基因进行表达、纯化并鉴定其活性。方法：人工合成含HIV-1gp41的3个抗原位点、HIV-1gp120的2个抗原位点、HIV-2gp125的3个抗原位点和HIV-2gp36的1个抗原位点的串联基因，克隆到原核表达载体pRSETB中，构建重组表达质粒pRSETB-env，用异丙-β-Ｄ-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达，采用金属离子亲和层析技术纯化表达蛋白，逐渐降低尿素浓度使目的蛋白复性，免疫印迹和ELISA法分别对表达产物进行鉴定。结果：目的基因在BL21中有较高表达率，纯化后表达蛋白经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)可见相对分子质量约44 000的蛋白带，与设计相对分子质量相符。免疫印迹、ELISA试验显示pRSETB-env质粒的HIV-1/2表达蛋白与HIV-1及HIV-2患者血清都能较好地结合，与其他患者血清无交叉反应。结论：成功构建了由HIV-1/2外膜蛋白多个抗原位点串联基因片段的表达载体pRSETB-env，并在原核细胞中高效表达，表达蛋白经纯化后纯度较高,并具有良好特异性和活性。     

来氟米特活性代谢产物A771726对人外周血T淋巴细胞的免疫调节作用

目的:探讨来氟米特(leflunomide,LEF)在体外对人外周血T淋巴细胞的免疫调节作用.方法:在植物血凝素(phytohemagglutinin, PHA)刺激下,人外周血淋巴细胞与不同剂量的LEF (5,15,45 μg/ml)共培养.检测各组T淋巴细胞的增殖、凋亡情况,分析各组T淋巴细胞免疫表型CD152,CD28的表达以及各组T淋巴细胞的IFN-γ,IL-10,TGF-β1 mRNA水平.结果:在体外,LEF对由PHA诱导的T淋巴细胞的增殖、凋亡均有抑制作用,且抑制作用与LEF呈剂量依赖性.LEF对T淋巴细胞CD152,CD28的表达无明显影响.LEF能促进IL-10,TGF-β1 mRNA的表达,抑制IFN-γ mRNA的表达.结论:LEF可能通过抑制T淋巴细胞增殖、减少T淋巴细胞凋亡、促进T淋巴细胞IL-10、TGF-β1 mRNA表达及抑制IFN-γ mRNA表达来下调免疫反应.     

大鼠胰腺β细胞分泌颗粒内钙离子超微结构定位的研究

目的: 观察大鼠胰腺β细胞内钙离子在亚细胞水平的分布情况.方法: 用胶原酶原位灌注法分离大鼠胰岛,在含100 mL/L胎牛血清、11.1 mmol/L葡萄糖的RPMI-1640培养基中培养过夜后,离心,将胰岛细胞团分为实验组(外源性胰岛素100 mU/L孵育240 min)和对照组(外源性胰岛素100 mIU/L孵育0 min),采用改进的焦锑酸钾沉淀的细胞化学方法对胰腺β细胞分泌颗粒内钙离子进行超微结构定位.结果: 超微结构显示胰腺β细胞内钙离子呈高电子密度的黑色颗粒状.对照组的胰岛素分泌颗粒内钙离子沉积明显高于实验组,并伴有钙离子外排.实验组胰腺β细胞靠近细胞膜区钙离子沉积增加.结论: 离子细胞化学定位法是研究组织中钙离子分布的有效方法.胰腺β细胞的分泌功能可能与胰岛素分泌颗粒内钙离子浓度密切相关.     

山葡萄多酚对大鼠心肌线粒体氧化损伤的保护作用

目的:在大鼠心肌线粒体（Mt）自由基损伤的体外实验中观察山葡萄多酚(PVAR)对心肌线粒体氧化损伤的保护作用,为治疗心肌缺血再灌注损伤提供实验依据。方法: 实验分5组,正常线粒体组、诱导损伤线粒体组和预先加25、50、100 mg•L^-1PVAR再诱导损伤线粒体组;利用Fe²⁺/维生素C（VitC）系统产生氧自由基,体外对Wistar大鼠心肌Mt诱导损伤,观察各组Mt心磷脂和MDA含量、膜流动性、ATPase活性和肿胀度的变化。结果：与损伤组比较,三种剂量PVAR组心磷脂含量明显增高（P<0.05),MDA明显减少（P<0.01),膜流动性显著增大(P<0.01),ATPase活性增高（P<0.05),100 mg•L^-1PVAR组线粒体肿胀度与正常组比较差异无显著性。结论:氧自由基引起Mt损伤;PVAR对氧自由基引起的大鼠心肌Mt损伤具有保护作用,保护机制可能是直接减少氧自由基的生成。     

重度牙周炎致牙齿松动脱落患者前牙美学区综合治疗1例报告及文献复习

目的：探讨重度牙周炎致前牙松动脱落患者的治疗和美学修复,阐明多学科综合治疗对前牙美学区的治疗效果,为其临床应用提供参考。方法：患者,男性,57岁,因上下前牙松动不适半年余就诊。专科检查见11、21、22、41松动Ⅲ°,42松动Ⅱ°。经多学科会诊后,行牙周基础治疗,炎症控制后,拔除11、21、22、41、42并行即刻种植,富血小板纤维蛋白（PRF）联合引导骨再生（GBR）技术修复种植体周围骨缺损。因患者美学要求,12、13、23、31、32、33、43根管治疗后行牙体预备,13-23、33-43行固定修复。结果：种植术后显示种植体位置良好,种植体周围骨量充足,口内见牙龈软组织愈合良好,牙槽嵴丰满度较好;修复完成后较好地恢复了患牙的咀嚼发音功能,患者对美学效果满意。结论：通过多学科综合治疗的应用,成功实现了对重度牙周炎患者前牙美学区的种植修复,为前牙美学区的诊疗开辟了新途径。     

米非司酮治疗后VEGF-165在异位和在位子宫内膜中的表达

目的探讨米非司酮对VEGF-165在子宫腺肌症中表达的影响。方法43例子宫腺肌症患者分为对照组(n=21)和米非司酮治疗组(n=22),采用放射免疫法测定对照组(月经第3天)和米非司酮组(术前)血清中FSH、LH、E2、PRL、P及T的水平。采用免疫组化法测定两组患者在在位和异位子宫内膜中的VEGF-165蛋白水平。结果米非司酮组较对照组血清FSH、LH、E2、P明显降低(P<0.05),而血清PRL和T的水平两组间无统计学差异(P>0.05)。VEGF-165在子宫内膜腺上皮细胞内的表达,异位内膜均明显高于在位内膜(P<0.05);而其在间质细胞内的表达,异位内膜与在位内膜无统计学差异(P>0.05)。米非司酮组异位和在位内膜腺上皮细胞、间质细胞中VEGF-165的表达水平均较对照组明显降低(P<0.05)。VEGF-165在对照组异位内膜腺上皮细胞中的表达,增殖期高于分泌期(P<0.05)。结论米非司酮治疗后,VEGF-165在异位和在位内膜中的表达明显下降,可能是通过抑制VEGF蛋白合成,降低血管通透性,抑制新生血管生成,从而有效地控制子宫内膜异位症的发生发展。     

医学院校生物技术专业分子生物学教学的思考和体会

医学院校中生物技术专业与其他医学专业的培养目标有所不同，作为生物技术专业的必修课程，分子生物学的教学应适应专业特色和要求。总结了近几年生物技术专业分子生物学教学的经验，以期进一步提高教学质量，培养符合时代要求的生物技术专业人才。