实时荧光PCR在艾滋病合并肺孢子菌肺炎诊断中的应用

目的 应用实时荧光PCR 技术与六甲基四胺银(GMS)染色法对艾滋病合并肺孢子菌肺炎(PCP)患者支气管肺泡灌洗液(BALF)中的肺孢子菌进行检测,比较两种检测方法的性能.方法 应用实时荧光PCR 技术与GMS染色对57例艾滋病合并肺部感染患者的BALF标本进行肺孢子菌检测,比较两种方法的检测效果.结果 收集本院18例艾滋病合并肺部感染患者的支气管灌洗液标本,采用实时荧光PCR技术检测肺孢子菌DNA,结果显示13例为阳性,阳性率为72.3%(13/18).阳性标本肺孢子菌 DNA定量为1.35 × 103～8.24 × 105 拷贝/ml,平均(1.2 ± 2.13)× 105 拷贝/ml;而GMS染色镜下检测,阳性率为72.3%(13/18),二者具有极高的一致性.收集广州市第八人民医院39例艾滋病合并肺部感染患者的支气管灌洗液标本,实时荧光PCR检测肺孢子菌DNA结果显示21例为阳性,阳性率为53.8%(21/39);而用GMS染色镜下检测,阳性率仅为2.5%(1/18).在标本量少的情况下,实时荧光肺孢子菌方法检测肺孢子菌的敏感性远高于GMS染色法.结论 对艾滋病合并肺孢子菌感染患者支气管灌洗液的肺孢子菌检测中,荧光肺孢子菌与GMS染色有极高的一致性,且敏感性明显高于后者.实时荧光肺孢子菌方法可快速、灵敏、特异性、定量地检测肺孢子菌 DNA,在PCP的诊断、治疗方案选择和疗效观察方面有重要的临床意义.     

下肢负重位全长X线片在全膝关节置换术前准备中的价值

目的 评价全膝关节置换术(TKA)术前下肢负重位全长X线摄片对术后下肢力线重建及膝关节功能的影响.方法 回顾性收集我院TKA患者共138例,男58例,女80例,平均年龄71.6岁.术前分段摄片组66例,负重位全长摄片组72例.两组患者年龄、性别、体重指数、术前膝关节原发疾病和美国膝关节协会(AKS)膝关节功能评分均无显著差别(P＞0.05),均在术前进行力线分析和矫形设计,术中所有患者均不置换髌骨.两组患者至少6个月随访,比较下肢力线重建和美国膝关节协会(AKS)膝关节功能评分.结果 分段摄片组和负重位全长摄片组术后随访显示,AKS膝关节功能评分和并发症发生率无显著差别(P＞0.05).分段摄片组有4例术后下肢残留畸形大于3°,负重位全长摄片组没有残留畸形大于3°病例(P＜0.05).结论 TKA术前下肢负重位全长摄片有利于全面了解下肢冠状位力线并进行手术设计,从而准确重建下肢力线,故推荐在TKA术前常规应用.     

低剂量佐匹克隆延迟控释片治疗早醒性失眠的疗效研究

背景　失眠可分为入睡困难、睡眠维持障碍和早醒等,目前药物治疗失眠存在局限性,尚缺乏对不同类型失眠的针对性治疗,对失眠分型治疗的研究鲜见报道。目的　探讨低剂量佐匹克隆延迟控释片治疗早醒性失眠的疗效。方法　本研究时间为2016年10月—2018年1月。将40只清洁级雄性SD大鼠随机分为对照1组、低剂量（2.5 mg/kg佐匹克隆）组、高剂量（5.0 mg/kg佐匹克隆）30 min组、高剂量60 min组,每组10只大鼠。采用戊巴比妥钠延长实验,观察并记录各组大鼠的睡眠潜伏期及睡眠时间,为佐匹克隆延迟控释片的制备奠定基础。将佐匹克隆与羧甲基淀粉钠、乳糖、5%聚维酮K30（PVPK30）、硬脂酸镁混匀后压片;将山嵛酸甘油酯、乳糖、5%PVPK30、硬脂酸镁混匀后得到包衣颗粒,将片芯置于包衣颗粒中央,压片制得佐匹克隆延迟控释片。将60只清洁级雄性SD大鼠随机分为对照2组、佐匹克隆延迟控释片组（2.5 mg/kg佐匹克隆）、佐匹克隆溶液组（5.0 mg/kg佐匹克隆）,每组20只大鼠,观察并记录各组大鼠的睡眠潜伏期和睡眠时间。结果　对照1组〔（126.3±18.6）min〕、低剂量组〔（175.3±18.1） min〕、 高剂量30 min组〔（151.8±19.2）min〕和高剂量60 min组〔（181.5±15.6） min〕睡眠时间比较,差异有统计学意义（F=19.651,P<0.01）;其中,低剂量组与高剂量30 min组、60 min组大鼠睡眠时间长于对照1组,高剂量30 min组大鼠睡眠时间短于低剂量组,高剂量60 min组大鼠睡眠时间长于高剂量30 min组（P<0.05）。佐匹克隆延迟控释片组〔（188.3±25.0） min〕、佐匹克隆溶液组〔（194.0±28.1） min〕与对照2组〔（130.2±25.6） min〕睡眠时间比较,差异有统计学意义（F=30.400,P<0.05）,佐匹克隆延迟控释片组、佐匹克隆溶液组睡眠时间长于对照2组（P<0.05）。结论　通过制备低剂量（2.5 mg/kg）佐匹克隆延迟控释片喂食实验大鼠,使之在大鼠入睡后释药,能达到高剂量（5.0 mg/kg）佐匹克隆睡前60 min灌胃延长大鼠睡眠时间的效果,显现了以低剂量佐匹克隆延迟控释片针对性治疗成人早醒性失眠的前景。     

单孔腹腔镜在盆底功能障碍中的应用

盆底功能障碍是中老年女性的常见病,严重影响其生活质量。中重度盆底功能障碍的治疗以手术为主,本文对单孔腹腔镜技术在盆底功能障碍中的应用现状进行了综述和总结,并对其应用前景进行了展望。     

辣椒碱通过上调NLRP3炎性小体诱导胃癌MGC-803细胞转移

[目的]探讨辣椒碱对胃癌MGC-803细胞转移的诱导作用及其对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）炎性小体活化的影响。[方法]采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测MGC-803细胞培养液中炎性因子白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,蛋白免疫印迹（Western Blot）方法分析细胞中NLRP3炎性小体、细胞钙依粘连蛋白（E-cadherin）及波形蛋白（Vimentin）表达水平,采用Transwell法检测MGC-803细胞的迁移能力,流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）含量。[结果]辣椒碱处理MGC-803后,培养液中炎性因子IL-1β、IL-6及TNF-α释放量明显升高、NLRP3表达量增加,同时间质样标志物Vimentin的表达升高、上皮样标志物E-cadherin表达降低,但用NLRP3特异性抑制剂MCC950处理细胞之后,炎性因子表达量下调、NLRP3及Vimentin蛋白表达减低、E-cadherin表达升高,并且MCC950处理后能抑制辣椒碱增加的细胞迁移数量;ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）能逆转辣椒碱诱导结肠癌细胞NLRP3的蛋白水平及炎性因子释放。[结论]辣椒碱通过促进MGC-803细胞内ROS的表达水平来激活NLRP3炎性小体,进而促进胃癌细胞的迁移。     

携带荧光素酶登革亚病毒颗粒的构建和鉴定

目的 拟将荧光素酶基因整合入登革病毒（DENV）亚病毒颗粒（RSPs）中,构建能用于抗体介导的感染增强（ADE）高通量筛选的研究工具。方法 将荧光素酶基因luciferase插入DENV包膜蛋白基因prME的3'端,取代prME第二个跨膜区,构建prME-luc融合基因。用prME-luc融合基因转染293T细胞,在上清中检测携带荧光素酶的登革亚病毒颗粒（RSP-luc）。结果 转染prME-luc的293T细胞可以将RSP-luc释放至培养上清中,共转染野生型prME能够提高RSP-luc的产量。Western-blot技术确认了RSP-luc中含有DENV包膜蛋白和荧光素酶形成的融合蛋白。RSP-luc易于制备并可通过超速离心分离纯化,且可通过测定荧光素酶活性快速定量。体外实验显示RSP-luc能够与Vero细胞、U937细胞以及小鼠腹腔巨噬细胞等DENV靶细胞结合,结合过程可被受体类似物硫酸肝素竞争性抑制,也可被DENV特异性抗体4E11增强。结论 RSP-luc 能够模拟DENV 感染过程,有望成为深入研究DENV 与宿主相互作用及ADE 发生机制的有效工具。     

重型颅脑损伤早期行气管切开术的临床研究

目的 探讨重型颅脑损伤早期气管切开的作用。方法 对我科自1993年1月～2004年1月收治的93例重型颅脑损伤,早期气管切开进行回顾性分析。结果 93例病人基本生活自理36例,占38．71％。生活需人照顾者15例,占16．13％。植物生存12例占12．90％。死亡30例占32．26％。结论 呼吸道不通畅、肺部感染是加重病情导致重度颅脑损伤病人死亡的重要原因之一。对估计近期不能清醒、有原发性肺部疾患、合并胸部外伤者．应早期行气管切开术。保持呼吸道通畅可明显降低重型颅脑损伤患者的死亡率,提高治愈和生存率。     

伸直位石膏外固定治疗儿童伸直型肱骨髁上骨折

我院自1998年以来，应用伸直位石膏外固定治疗伸直型肱骨髁上骨折45例，疗效满意。     

青少年Pilon骨折的治疗

目的探讨青少年Pilon骨折的特点、治疗方法及其并发症。方法对1990年4月～2003年12月期间治疗的13例青少年胫骨Pilon骨折病例进行随访分析。按Merv—Letts分型：Ⅰ型5例，Ⅱ型6例，Ⅲ型2例。骨牵引治疗2例，有限内同定8例，有限内固定结合外固定支架3例。结果所有患者平均随访24个月，按Helfet踝关节功能评价：优8例，良4例，差1例，优良率92．3％。并发症：皮肤坏死2例，创伤性关节炎4例，骨骺早闭3例，畸形愈合1例，骨延迟愈合1例，外固定支架钉道感染1例，总体并发症38．5％。结论青少年Pilon骨折应根据其分型采用不同的治疗方案：疗效与创伤程度有关：Ⅲ犁骨折有较高的并发痹。     

颈椎前路减压术中硬膜外造影术

目的在颈前路减压手术的同时行硬膜外造影术,以避免减压节段内残留压迫性组织并探讨此术式的临床效果。方法在直视下完成颈椎前路间隙或椎体次全切除减压术后,切开或切除后纵韧带,使用18#软套管注射针头,将5￣10mlOmnipaque300造影剂注入减压节段的上下方,采用“C”型臂X线机透视,观察造影剂在硬膜囊前方的分布情况,以此判断脊髓是否获得完全减压。共64例颈椎病患者进行了术中硬膜外造影术,男39例,女25例;年龄32～64岁,平均49岁。术后39例获得随访,随访9～16个月,平均13个月,其中18例在术后1￣12周内复查MRI。采用JOA评分比较手术前后神经功能。结果完成椎管减压后,首次造影显示造影剂连续者49例(77%),其中11例术后复查MRI,显示再无脊髓压迫。首次造影显示造影剂不连续者15例(23%),经进一步减压,造影剂开始出现连续;其中7例术后复查MRI,显示再无脊髓受压。39例获得随访的病例,术后神经功能恢复率52%,终末随访时,神经功能恢复率上升至61%,无一例神经症状加重者。终末随访时JOA评分与术前、术后相比,差异有统计学意义。结论在颈椎前路减压手术中,硬膜外造影术能够有效判断椎管内减压情况,操作方法简单,安全可靠。