Comparison of the unlabeled and labeled pre-mRNA splicing assays in vitro

Pre-mRNA splicing is a fundamental process required for the expression of most metazoan genes. It is carried out by the spliceosome that catalyzes the removal of non-coding intron sequences to ligate exons into mature mRNA prior to transport and translation. The purpose of our study is to explore whether the in vitro unlabeled pre-mRNA splicing assay could be performed as an alternative method of splicing reaction other than the radiolabeled one. Two different splicing methods in vitro , P labeled and unlabeled pre-mRNA as the substrates in the reaction, were investigated. The radiolabeled products were visualized by autoradiography while the unlabeled products were observed by Ethidium Bromide (EB) staining. As a result, although there are more unspecific bands in the EB staining assay than 32P labeled one, the RNA products of in vitro splicing could be observed clearly. This suggests that the unlabeled pre-mRNA splicing assay can be an optional substitution for the isotope-labeled assay.     

急性高原病患者支气管肺泡灌洗前后肺功能及血气的改变

目的:探讨急性高原反应(HAAR)及高原肺水肿(HAPE)的发病机理。方法:对10例HAAR患者及6例HAPE患者灌洗前和灌洗后进行肺功能和动脉血气检测, 并与10例高原健康者进行对比。结果:HAAR患者及HAPE患者灌洗前动脉血氧分压明显低于对照组, HAAR同HAPE均存在弥散功能障碍;HAPE肺弥散功能(DLCO%)由灌洗前的(76.01±6.29)%, 上升到灌洗后的(103.31±9.23)%;气体转化因子(DLCO/VA%)由灌洗前的(150.30±15.20)%, 上升到灌洗后的(176.04±16.10)%;动脉血氧分压(PaO₂)由(31.73±3.01)mmHg上升到(45.31±3.56)mmHg。而HAAR及对照组灌洗后上述指标差异不显著。结论:HAPE患者肺泡内大量的液体渗出是HAPE病情恶化的主要原因之一。HAAR属HAPE发展的初级阶段, 存在着间质性肺水肿。     

重组人bFGF的原核表达及其高效价抗血清的制备

目的 以重组人碱性成纤维生长因子为免疫原，制备高效价抗hbFGF抗血清。方法通过PCR方法改造5’编码区的12个密码子，构建hbFGF’原核表达载体并在大肠杆菌(E．coli)中表达，以纯化的hbFGF、免疫新西兰兔，制备高效价抗血清，用于重组hbFGF、的免疫印迹分析。结果经过改造的hbFGF基因在E．coli中获得较高水平表达。从可溶性部分纯化得到纯度95％以上的重组hbFGF，以该重组蛋白免疫兔子，在二次加强后以间接ELISA检测抗血清效价可达1：512000。免疫印迹分析显示该抗血清与E．coli中表达的重组hbFGF、和标准hbFGF、均有特异性反应，但与某些细菌蛋白存在弱交叉反应，经E．coli菌体蛋白吸附的抗血清，与菌体蛋白的弱交叉反应消失。结论以纯化的重组hbFGF为免疫原制备了高效价的特异性抗血清，经菌体蛋白吸附可消除存在的交叉反应性。     

紫外线照射对腺病毒气溶胶活力和粒级分布的影响

目的 研究紫外线照射对腺病毒气溶胶活力和粒级分布的影响.方法 在2000L的腔室中通过TK-3微生物气溶胶发生器将绿色荧光蛋白(GFP)标记的腺病毒形成气溶胶,暴露在预先设定波长的紫外线下,用多级撞击式空气微生物采样器进行采样.对采样样品进行实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测基因组拷贝数.通过在荧光显微镜下计数带绿色荧光的PK15细胞数可直观检测病毒的感染力及活力.结果 带有绿色荧光的PK15细胞数及FQ-PCR检测结果均提示所采集的病毒气溶胶主要分布在第6级.波长为254 nm的紫外线照射5 min时,在显微镜下观察到的荧光数明显减少.波长为254 nm紫外线照射30 min时,6个级别的细胞内均未见绿色荧光.波为365 nm紫外线照射30 min时,绿色荧光数仍较多.波长为254 nm的紫外线照射30 min时没有观察到有绿色荧光的细胞,但是FQ-PCR结果提示病毒基因组拷贝数仍较高.结论 波长为254 nm的紫外线比365 nm的紫外线照射灭活腺病毒气溶胶的效果更显著.两种波长的紫外线照射对腺病毒气溶胶的粒级分布没有显著影响.病毒基因组的存在并不能代表病毒有感染力.     

常规与微创冠脉搭桥术围手术期血浆S100-B蛋白水平的相关研究

目的: 通过测定体外循环和非体外循环条件下冠脉搭桥术患者血浆S100-B蛋白水平的变化，比较2种手术方式对脑损伤程度有无不同，探讨术中影响血浆S100-B蛋白水平变化的相关因素。方法: 30例择期行冠脉搭桥术的患者，分为体外循环组（CPB group，A组）和微创非体外循环组（non-CPB group，B组）,每组均为15例。于术前、麻醉后、主动脉侧壁钳开放时、术毕时、术后2 h、6 h、12 h和24 h采血测血浆S100-B蛋白浓度。结果： （1） 两组患者血浆S100-B蛋白浓度均在升主动脉侧壁钳开放时显著高于术前，且A组患者血浆S100-B蛋白浓度峰值是B组的3倍多（2.32±0.26 μg/L和0.71±0.14 μg/L）,之后逐渐降低，到术后24 h基本接近正常。（2） 术中患者血浆S100-B蛋白升高水平与体外循环转机时间或心表手术操作时间呈正相关（A组：r＝0.659，P＜0.05;B组：r＝0.584, P＜0.05）。结论： 血浆S100-B蛋白水平可以用来评价2种冠脉搭桥术对脑的损伤程度，术后连续检测对于诊断脑损伤并及时采取相应预防措施具有重要价值;非体外循环微创冠脉搭桥术较常规体外循环下手术更能够有效降低对脑损伤的程度和术后出现神经功能障碍的风险。     

广州市越秀区儿童体格发育及健康影响因素调查分析

目的了解广州市越秀区7岁以下儿童体格发育现状及其健康影响因素,为进一步改善7岁以下儿童生长发育水平提供科学依据。方法根据中国妇幼保健中心2005年全国第四次儿童体格发育调查制定的要求,对越秀区4097名儿童进行体格发育检查及广州市制定的儿童健康影响因素流行病学问卷调查。评价儿童生长发育状况及采用非条件Logistic逐步回归分析的方法对儿童健康影响因素进行多因素分析。结果儿童低体重率、生长发育迟缓率、消瘦率、肥胖率分别为1.98%、1.03%、1.93%、3.69%;男童低体重率、消瘦率、肥胖率与女童无显著性差异（P〉0.05）;0～2岁儿童低体重率、生长发育迟缓率、消瘦率、3～6岁儿童肥胖率随年龄增加呈上升趋势（P〈0.01）;非条件Logistic回归分析发现,出生体重（P=0.001）、母亲文化（P=0.008）、辅食添加（P=0.002）、月收入（P=0.002）、追着喂食（P=0.001）、进食玩玩具（P=0.022）、经常感冒（P=0.045）等7个因素与儿童营养不良发生相关。讨论广州市越秀区儿童营养状况良好,但仍需加强对0～2岁儿童营养不良及3～6岁儿童肥胖抚养人的健康宣教和健康行为形成的早期干预。     

青海土族人群HLA-DRB1等位基因多态性分析

目的：分析青海土族人群HLA-DRB1位点等位基因多态性特点。方法：采用序列特异性引物聚合酶链反应技术,对青海互助地区50名健康无血缘关系的土族个体HLA-DRB1基因座进行分型,并与国内其他地区少数民族人群进行比较。结果：青海土族人群中HLA-DRB基因座共检出16个等位基因,其中DRB1＊04、DRB1＊08、DRB1＊14、DRB1＊15、DRB3＊、DRB4＊基因频率较高；DRB1＊06、DRB1＊07、DRB1＊09、DRB1＊13、DRB1＊16、DRB1＊23基因频率较低。结论：青海土族HLA有独特性。青海土族基因频率与蒙古族有相似之处。     

精神分裂症与KCNN3基因1137～1140缺失移码突变传递不平衡研究

目的 探讨KCNN3基因1137～1140的4个碱基缺失所致移码突变与精神分裂症的关系。方法 95个核心家系共289名家庭成员，包含107例精神分裂症患者纳入本研究。精神分裂症采用CCMD-Ⅱ-R诊断标准。KCNN3基因1137～1140的4个碱基缺失基因型检测使用PCR技术和限制性内切酶DdeI消化方法。精神分裂症与KCNN3基因1137～1140缺失4个碱基的关联分析采用基于单倍型的单倍型相对风险率和传递／不平衡检验。结果 患者组与正常父母组比较，KCNN3基因1137～1140的4个碱基缺失的基因型频数和等位基因频率分布差异无统计学意义（χ^2=0．253，P〉0．05和χ^2＝0．010，P〉0．05）。基于单倍型的单倍型相对风险分析发现父母传递与不传递给患者的KCNN3基因等位基因之间差异无统计学意义（χ^2=0．042，P〉0．05）。传递不平衡检验结果发现KCNN3基因等位基因传递不存在连锁不平衡（χ^2=3．000，P＝0．0833）。结论 本组研究对象中，KCNN3基因第1外显子1137～1140的4个碱基缺失的发生率少；分析结果提示KCNN3基因第1外显子1137～1140的4个碱基缺失的等位基因与精神分裂症无关联。     

基于PACS的MRI影像多媒体教学与报告系统的研究

目的：开发基于医院影像归档和通讯系统（picture archiving and communication system，PACS）环境的MRI（磁共振显像）影像多媒体教学与报告系统。方法：医院PACS系统符合DICOM3.0标准，采用1000M光纤主干网，100M交换到桌面；在临床医生浏览工作站安装多媒体教学系统，在诊断工作站安装教学系统与报告系统；科学内容按部位分类，以树枝模式管理。教学字资料来源于具有一定权威的教科书、专及期刊。图像资料来源于各部位经病理及临床证实的病例，直接从PACS系统提取，经标注说明后，以件形式存放于PACS图像服务器硬盘。结果：MRI辅助影响教学系统能够实时调阅最合适病种的MRI征象、临床特点、病理、鉴别诊断、典型图像及注释、正常断面解剖等，供教学、诊断和报告参考。结论：PACS环境下MRI辅助影像学系统，能满足临床医生和低年资影像诊断医生对MRI影像知识进一步继续医学教育的需求，能为影像诊断医生提供教学及科研工具，提高MR室工作质量和工作效率。     

传统中医艾灸疗法的热辐射光谱特性的研究

采用间接测量方法研究传统中医艾灸热辐射光谱的特性，即采用光电色度计测量自燃状态下艾条的三刺激值，并在计算出色度坐标基础上，使用内插法得到艾条的色温，最后由plank公式计算得到艾条热辐射光谱特性。由测量结果得知自燃状态下艾条的热辐射光谱主要是以靠近近红外的远红外为主的光谱，其中包含可见光成份，其谱峰大约在2、8μm。