急性和慢性髓性白血病细胞中可变剪接事件的识别

目的：为揭示异常的可变剪接在肿瘤中发挥的作用,着重研究急性髓性白血病（ AML）与慢性髓性白血病（CML）内显著差异的可变剪接事件以及剪接异构体。方法基于CML（K562）和AML（THP1、HL－60）细胞系的全转录组测序数据,在全基因组范围内采用TopHat、MATS和Cufflinks计算识别可变剪接事件、重构剪接异构体和分析其差异表达。结果在AML和CML细胞间识别的130个基因在CML细胞系中特异性高表达,80个基因在AML两株细胞系内均表达上调。在CML与AML之间识别了337个差异表达的剪接异构体以及35个差异可变剪接事件。结论 AML与CML细胞系间存在显著差异的可变剪接事件和剪接异构体。白血病相关的可变剪接事件可作为其潜在的标志物或药物靶标。     

家畜气肿疽的研究进展

气肿疽是由气肿疽梭菌感染牛、羊和其它动物所引起的急性、败血性传染病,以肌肉丰满部位发生炎性肿胀、坏死为特征。世界上所有养牛的国家均有本病的发生并具有较高的死亡率,对全球的养殖业尤其是养牛业造成一定的经济损失。该病在我国各地均有发生,影响我国养牛业的健康发展。本文对该病的病原学、流行病学、临床症状、发病机理、病理变化、诊断方法、防治措施等几个方面进行了综述,以期为该病的有效防控提供有益的参考。     

两种检测方法对牛环形泰勒虫病感染的调查

为进一步了解新疆托克逊县某地各年龄段牛环形泰勒虫病的感染情况,本实验应用血液涂片法和PCR检测法分别对随机采集的104头份牛全血进行了对比检测,并分析了4个年龄段牛环形泰勒虫病的感染情况。结果表明,104头份牛全血涂片染色镜检的阳性率为51.0%(53/104),PCR方法检测阳性率为57.7%(60/104),PCR的检测阳性率高于全血涂片染色结果;该地四个年龄段牛,1~2岁龄牛环形泰勒虫病的感染率高于其它三个年龄段,感染率为72.7%(8/11)。     

湿润烧伤膏在皮肤科的临床应用

临床上,皮肤屏障功能受损贯穿于众多皮肤病的病因病理过程之中。而近年来有文献报道,湿润烧伤膏能有效治疗各种皮肤屏障功能异常性皮肤病,其机制可能为湿润烧伤膏对表皮的保湿作用和再生作用能促进皮肤屏障功能的修复。本文就湿润烧伤膏治疗各种皮肤屏障功能受损性皮肤病的研究现状与进展作一综述。     

外固定支架在严重多发伤合并闭合性长管骨骨折分期治疗中的应用

目的：探讨外固定支架分期治疗严重多发伤合并四肢闭合性长管骨骨折的临床疗效。方法笔者选取2009年1月～2013年8月收治的58例严重多发伤合并闭合性四肢长管骨骨折早期行单臂支架临时外固定的患者,男性39例,女性19例;年龄18～70岁,平均47岁。待全身病情稳定、局部软组织损伤改善后,再根据患者具体情况选择最终确定性内固定治疗。结果平均外固定支架使用时间6d。二期确定性内固定治疗前2例出现钉道感染。内固定术后随访时间3～18个月,平均5．2个月。术后切口3例出现感染,总体感染率为5．2％。结论早期采用临时外固定支架没有增加最终确定性内固定手术后感染率,有利于闭合性长管骨骨折进一步治疗。     

DEK基因RNAi慢病毒表达载体的构建及其功能鉴定

目的：构建DEK基因的RNA干扰（ RNAi）慢病毒表达载体,并对其生物学功能进行初步检测。方法采用RNAi技术,根据DEK基因的序列,确定其有效靶序列,合成DEK基因的Oligo DNA,退火形成双链DNA,将其克隆到经BamHⅠ与EcoRⅠ酶切后的小干扰RNA（ siRNA）表达载体PSIH-H1上,产生PSIH-H1-DEK慢病毒载体,筛选阳性克隆并测序鉴定。与3个包装质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒后感染乳腺癌细胞ZR75-1,经嘌呤霉素（ puromycin,puro）筛选2周后,收集部分细胞利用实时聚合酶链反应（ real time-PCR,RT-PCR）和Western印迹分别检验DEK在信使RNA （ mRNA ）和蛋白水平的敲低效果,并通过细胞生长实验检测DEK对人乳腺癌细胞系ZR75-1细胞生长的影响。结果 PCR和DNA测序结果证实,DEK siRNA慢病毒表达载体PSIH-H1-DEK构建成功。 RT-PCR和Western印迹结果显示,构建的DEK siRNA可有效抑制DEK基因的表达,并由此建立了敲低DEK的稳定克隆。生长曲线实验表明, DEK siRNA可抑制人乳腺癌细胞系ZR75-1细胞的生长。结论成功构建了DEK基因的RNAi慢病毒表达载体,感染人乳腺癌细胞系ZR75-1细胞后,有效沉默了ZR75-1细胞中的DEK基因的表达,为进一步研究DEK基因在乳腺癌中的作用奠定基础。     

光刺激体外培养的NG2细胞对海马神经元内Ca2+活性和电活动的影响

目的观察选择性光刺激NG2细胞对海马神经元内Ca2+活性和电活动的影响,并初步探讨可能的作用机制。方法体外纯化培养新生SD大鼠NG2细胞,通过脂质体转染的方法,在NG2细胞中特异性表达光敏感通道(channelrhodopsin-2,ChR2)蛋白DNA,并与体外培养7 d的海马神经元共培养48 h,采用蓝光（470 nm、5 s、5 mW/cm2）选择性刺激表达ChR2蛋白的NG2细胞,利用Ca2+成像和电生理的方法记录NG2细胞周围海马神经元中的Ca2+浓度变化和电流改变情况,同时比较加入/未加入γ-氨基丁酸A型受体抑制剂情况下神经元的电流变化特点。结果当蓝光刺激表达ChR2蛋白的NG2细胞后,首先NG2细胞内的Ca2+信号增强,随后其周围海马神经元内的Ca2+升高约20%;Ca2+缓慢下降后再次出现一个Ca2+峰,幅度较第1次小;NG2细胞周围海马神经元的电流频率增加,振幅增大。而当预先在细胞外液中加入50 μmol/L γ-氨基丁酸A受体抑制剂后,海马神经元的电流频率和振幅较未加抑制剂组明显减小(P＜0.05)。结论选择性光刺激表达ChR2蛋白的NG2细胞可使其兴奋,且可能通过释放γ 氨基丁酸来调节神经元活动。     

机器人辅助腔镜甲状腺手术在中国的发展和现状

机器人手术系统于2007年首次应用于甲状腺手术,其整合了腔镜与传统开放手术的优点,进一步促进了甲状腺微创外科的发展。2014年,笔者单位首先在国内开展机器人甲状腺手术,并为3 200余例患者成功实施手术,截至2023年7月国内共完成11 931例机器人甲状腺手术。其美容效果明显优于传统开放手术,且常用入路的操作及肿瘤学安全性数据也随着开展数量及质量的提高而得到更新,为国内机器人甲状腺手术的开展,提供了经验指导。新技术的发展及临床应用,也同样促进了国产机器人的研发与实践。未来,将会有更多国产机器人投入临床,进一步降低手术成本,使其像腔镜技术一样得以在临床普及。在此,笔者对相关情况作一概述,以便国内同行进一步了解其在中国的发展和现状。     

非小细胞肺癌组织中磷酸化4E结合蛋白1表达及其与根治术后复发的关系

目的：探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织中磷酸化4E结合蛋白1(p-4EBP1)表达及其与根治术后复发的关系。方法：选取本院2020年1月—2021年1月收治的111例行根治术的NSCLC患者,收集患者手术切除的肺癌组织和癌旁组织,采用免疫组化法检测肺癌组织及癌旁组织中p-4EBP1蛋白表达,比较不同临床病理特征NSCLC患者肺癌组织p-4EBP1蛋白表达情况。随访统计NSCLC患者术后1年复发情况,对比复发组（20例）和未复发组（91例）肺癌组织p-4EBP1蛋白表达,并采用多因素Cox回归模型分析NSCLC根治术后复发的影响因素。结果：肺癌组织p-4EBP1蛋白阳性表达率高于癌旁组织（70.27%vs 16.22%,P <0.05）;临床分期Ⅲa期、低分化、淋巴结转移患者肺癌组织p-4EBP1蛋白阳性表达率分别高于临床分期Ⅰ/Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移患者（P <0.05）;术后1年,111例患者的复发率为18.02%(20/111),复发组肺癌组织p-4EBP1蛋白阳性表达率高于未复发组（90.00%vs 65.93%,P <0.05）;复发组有吸烟史、临床分...     

小鼠髓核细胞体外衰老模型的建立及评价

【摘要】 目的：建立并评价小鼠髓核细胞（nucleus pulposus cells,NPCs）体外衰老模型。方法：取8周龄C57BL/6雄性小鼠,体外分离培养小鼠NPCs,并采用细胞免疫荧光（immunofluorescence,IF）检测NPCs标志蛋白聚集蛋白聚糖（aggrecan）的表达进行细胞鉴定。取不同浓度（0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L、400μmol/L、500μmol/L）的叔丁基过氧化氢（tert-Butyl hydroperoxide,TBHP）干预NPCs,采用CCK8法检测干预2h、4h后的细胞活性,筛选TBHP的最佳干预浓度及时间。应用最佳干预浓度TBHP、最佳干预时间干预P1代NPCs后换成完全培养基继续培养24h、48h、72h,采用衰老相关β半乳糖苷酶染色（senescence-associated β-galactosidase staining,SA-β-gal）检测各时间点的衰老NPCs阳性率,观察不同时间点NPCs的衰老变化。将P2代NPCs分为对照组和模型组,对照组在完全培养基中培养,模型组加入最佳干预浓度TBHP干预最佳时间干预后换成完全培养基培养,采用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）检测两组细胞衰老相关基因p53、p21、p16以及Aggrecan、Ⅱ型胶原蛋白（collagen Ⅱ）、含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-5（a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs-5,ADAMTS-5）、基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinase-3,MMP-3）、基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13,MMP-13）mRNA表达,免疫印迹法（Western blot,WB）检测Aggrecan、Collagen Ⅱ、MMP-3、MMP-13、p53、p21蛋白表达水平。结果：分离培养的细胞高表达Aggrecan,为NPCs。TBHP最佳干预浓度为100μmol/L,最佳干预时间为4h。在100μmol/L TBHP干预4h后培养24h、48h、72h,NPCs的SA-β-gal染色阳性率均显著性增加（P＜0.05）,三个时间点间无统计学差异（P＞0.05）,后续模型组加入最佳干预浓度TBHP干预最佳时间干预后换成完全培养基培养24h,对照组培养相同时间。RT-qPCR检测模型组p53、p21、p16、MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5 mRNA表达较对照组显著性升高（P＜0.05）,Aggrecan、Collagen Ⅱ mRNA表达较对照组显著性降低（P＜0.05）;WB检测模型组MMP-3、MMP-13、p53、p21蛋白表达较对照组显著性升高（P＜0.05）,Aggrecan、Collagen Ⅱ蛋白表达较对照组显著性降低（P＜0.05）。结论：采用TBHP诱导能成功构建小鼠NPCs体外衰老模型,可为椎间盘退行性变的发病机制研究提供良好的研究样本。