Semaphorin 3a对小鼠胚胎视交叉发育的作用

目的:探讨细胞因子Semaphorin 3a(Sema 3a)在小鼠胚胎视交叉发育过程中发挥的作用。方法:E13至E15小鼠胚胎的眼球至视束部分制备成脑厚片,置于含10%的小牛血清的DMEM/F12的培养液中,在37℃的恒温的滚动培养箱中培养5h。实验组中将Sema 3a抗体加入培养液中。培养结束后,将脑厚片以4%多聚甲醛固定,将DiI颗粒置于一侧视盘。7d后,在手术显微镜下,暴露被标记的视神经纤维,在激光扫描共聚焦显微镜下观察。结果:用Sema 3a抗体阻抑Sema 3a的功能,可引起E13跨越中线的视神经纤维减少以及神经纤维走行错误。结论:在视交叉形成的早期,Sema 3a可能吸引视神经纤维跨过中线,并且这个过程可能是短暂的。     

尼古丁依赖的功能影像学研究进展

在过去10年中,随着功能脑影像学技术在物质滥用领域的发展,越来越多的研究者运用这些技术以探讨尼古丁成瘾的神经生物学机制。本文主要总结了尼古丁急、慢性暴露下对脑功能影响的神经脑影像学研究进展,证实了尼古丁依赖与中脑边缘犒赏系统、调节注意、记忆、运动以及联想相关脑环路之间的相关性。这些研究发现将为揭示尼古丁依赖的神经生物学机制提供更多的证据支持,进一步促进今后戒烟治疗的发展。     

IFN-α诱导HuH7细胞固有免疫分子APOBEC3G的表达

目的了解IFN-α对HuH7细胞固有免疫分子APOBEC3G表达的影响及其机制。方法HuH7细胞给予不同浓度的IFN-α(0 U/ml、100U/ml、400U/ml、800U/ml and 1200U/ml)刺激,10h后提取细胞总RNA,RT-PCR和实时定量RT-PCR检测HuH7细胞内APOBEC3G的mRNA水平变化,Western blot分析APOBEC3G蛋白水平的表达;分别构建不同长度的含有IRF-E(IFN regulatory factor element)位点的APOBEC3G起始密码上游序列报告质粒、不含IRF-E和IRF-E位点突变的虫荧光素酶报告质粒,报告基因分析IFN-α刺激后APOBEC3G起始密码上游IPF-E位点对APOBEC3G表达的影响。结果IFN-α上调HuH7细胞APOBEC3G mRNA和蛋白水平的表达,并具有剂量依赖的效应。序列分析发现APOBEC3G起始密码上游的-298～-283和-57～-47位碱基分别存在IRF-E和ISRE(IFN stimulated re- sponse element)序列。报告基因分析结果显示,干扰素使含有IRF-E序列的APOBEC3G启动子报告质粒的虫荧光素酶的活性增加6～8倍,而不含IRF-E序列和IRF-E位点突变的报告质粒的虫荧光素酶活性在干扰素刺激后几乎没有变化。结论IFN-α可通过IRF-E位点上调APOBEC3G mRNA和蛋白水平的表达,从而发挥抗病毒效应。     

人巨细胞病毒感染对体外培养肺成纤维细胞中明胶酶的影响

目的探讨人巨细胞病毒（HCMV）感染对体外培养肺成纤维细胞（HEL）中明胶酶活性的影响。方法体外培养HEL细胞感染HCMV，分为低感染复数（MOI）组及高MOI组，每组重复6例。明胶酶谱法检测HEL细胞中MMP-2及MMP-9的明胶酶活性，用半定量RT-PCR检测各组HEL细胞中MMP-9及TIMP-1的转录水平。结果在低MOI组及高MOI组HEL细胞中MMP-9及MMP-2活性均增强（P〈0．05），高MOI组MMP-9及MMP-2活性较低MOI组显著增加（P〈0．05）。进一步检查MMP-9及TIMP-1的mRNA水平发现，正常对照组HEL细胞中MMP-9及TIMP-1的mRNA处于一个较低的水平，HCMV感染使HEL细胞中MMP-9及TIMP-1的mRNA水平均明显升高（P〈0．05），低MOI组和高MOI组差异无统计学意义（P〉0．05）。在低MOI组及高MOI组，HEL细胞MMP-9／TIMP-1的比值和正常对照组相比明显升高（P〈0．05），表明MMP-9升高更为显著。高MOI组和低MOI组中MMP-9／TIMP-1的比值差异无统计学意义（P〉0．05）。结论HCMV感染可以造成MMP-9和TIMP-1转录和MMP-9／TIMP-1的失衡，同时造成MMP-9及MMP-2明胶酶活性增强，导致肺泡结构的破坏和肺纤维化的发生，这在CMV肺炎的发病机制中起着重要的作用。     

水通道蛋白3在人胎盘和胎膜中的表达及分布

目的 研究正常妊娠晚期人胎盘和胎膜水通道蛋白3(AQP3)的表达及分布.方法 收集5例正常足月妊娠剖宫分娩的胎盘和胎膜样本,用RT-PCR测定AQP3 mRNA在胎盘和胎膜组织中的表达;用Western印迹和免疫组织化学方法检测AQP3蛋白质水平在胎盘和胎膜的表达.结果 RT-PCR显示AQP3 mRNA在胎盘和胎膜组织均有表达.Western印迹结果显示胎盘组织在29 000左右有一特异性条带.免疫组织化学结果显示AQP3表达于合体滋养细胞,而在羊膜上皮细胞未见表达.结论 AQP3在胎盘母儿液体平衡中可能发挥重要作用.     

基因疫苗pcDNA-AChRα211免疫小鼠建立重症肌无力动物模型

目的：用基因疫苗pcDNA-AChRα211，免疫C57BL／6小鼠建立实验性自身免疫性重症肌无力模型（EAMG）。方法：将人乙酰胆碱受体α亚基N端的主要免疫区（AChRα211）的基因片段插入到穿梭载体pcDNA3．0中，构建基因疫苗pcDNA-AChRα211。大量提纯质粒pcDNA-AChRα211后肌肉注射C57BL／6小鼠。用ELISA法检测小鼠血清中抗AChRα211，的IgG（ACh-RAb），并用PCR方法检测外源基因在小鼠各组织器官中的分布情况。结果：双酶切鉴定和序列测定表明构建了含正确目的基因阅读框的重组质粒pcDNA-AChRα211，ELISA分析表明该基因疫苗免疫的C57BL／6小鼠血清中含有AChRAb，且免疫三个月后在小鼠的肌肉、肝、脾、肾中仍可检测到目的基因AChRα211的存在。结论：重组质粒pcDNA-AChRα211作为基因疫苗能够诱导实验性自身免疫性重症肌无力。     

强直性脊柱炎患者MICA基因第2、3和4外显子的多态性及其与HLA-B抗原的连锁不平衡

目的探讨皖籍汉族人群MICA基因（major histocompatibility complex class Ⅰchain-related gene A，MICA）第2、3、4外显子的多态性，及其与HLA-B抗原的连锁不平衡在强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）发病中的作用。方法采用聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针杂交（polymerase chain reactionsequence-specific oligonucleotide probing，PCR-SS0）技术对56例AS患者和112名正常对照人群进行MICA基因第2、3、4外显子的多态性和HLA-B抗原的检测。结果AS患者和正常对照人群的MICA等位基因分布均以MICA＊008占优势，频率分别为32．14％和30．36％。两组人群MICA＊007等位基因的分布差异有统计学意义（X^2=10．18，P〈0．05，RR=2．50）。单倍型分析显示，AS患者和正常对照人群的MICA等位基因均显示出与多个HLA-B位点的连锁不平衡现象，两组间差异有统计学意义的单倍型为MICA＊007-B27（X^2=18．46，P〈0．05，RR=7．47）。分层分析结果显示，HLA-B27阳性与AS的相关性有统计学意义（P〈0．05），但MICA＊007基因与AS的相关性无统计学意义（P〉0．05）。结论AS患者中MICA＊007等位基因频率的显著升高可能源于MICA基因与HLA-B位点间的广泛连锁不平衡。     

结核分枝杆菌联合DNA疫苗初免-BCG加强的免疫效果观察

目的:研究并比较结核分枝杆菌免疫保护性抗原DNA(Ag85A和ESAT-6)疫苗联合免疫,BCG免疫以及联合DNA疫苗初免-BCG加强免疫等不同的免疫策略,诱导免疫应答效果观察.方法:健康雌性BALB/c小鼠24只,随机分成PBS 阴性对照组,DNA初免-BCG异源加强组,DNA(Ag85A和ESAT-6)初免DNA同源加强组和BCG阳性对照组,共进行3次免疫,初免2次,最后1次加强,间隔2周1次.PBS组3次均注射PBS 溶液;DNA/BCG组以质粒DNA免疫2次,最后1次以BCG加强免疫;DNA/DNA组3次均以质粒DNA进行免疫;BCG组则注射PBS溶液2次后以BCG免疫.末次免疫后4、6、8周分别分离血清测定总IgG水平,同时分离小鼠脾细胞,体外经TB-PPD刺激后进行淋巴细胞增殖实验(XTT法)并测定脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-4水平.结果:DNA/BCG、DNA/DNA、BCG组体外经TB-PPD刺激后均检测到特异性IgG抗体产生,3组平均效价为1:120、1:160、1:80,DNA/DNA组的抗体效价高于另外2组;小鼠脾细胞体外经TB-PPD刺激后,均能产生特异性淋巴细胞增殖并诱生较强的IFN-γ反应,其中DNA/BCG组IFN-γ的分泌水平高于DNA/DNA组和BCG组(P<0.05).结论:联合DNA疫苗初免-BCG加强的免疫策略能在小鼠体内诱导较强的特异性细胞免疫反应,产生高水平的IFN-γ.     

HIV/HCV合并感染者淋巴细胞活化及第二受体表达的研究

目的了解中国不同疾病进展阶段人类免疫缺陷病毒和丙型肝炎病毒（HIV／HCV）合并感染者T淋巴细胞与自然杀伤细胞（natural killer cells，NK）数量变化及T淋巴细胞活化、受体表达情况，并探讨HCV感染对HIV感染免疫指标及疾病进展的影响。方法应用流式细胞术分析228例不同疾病进展阶段的HIV／HCV合并感染者及101例单纯HIV感染者外周血T淋巴细胞、NK细胞数量及T淋巴细胞活化受体（HLA-DR、CD38）、第二受体（CCR5、CXCR4）表达情况。结果（1）HIV／HCV合并感染组中，CD4^＋T淋巴细胞、NK细胞数量随疾病进展持续下降，其中艾滋病组（AIDS）明显低于无症状HIV感染组（HIV）（P〈0．05），HIV组明显低于长期不进展组（LTNP）（P〈0．01），LTNP组与健康对照组差异无统计学意义。LTNP组、HIV组及AIDS组CD4^＋、CD8^＋T细胞表面活化受体HLA-DR、CD38的表达依次升高，其中各组间CD8／CD38的升高差异均有统计学意义（P〈0．05），AIDS组CD4／HLA-DR、CD8／HLA-DR的升高明显高于LTNP组和HIV组（P〈0．01）。LTNP组、HIV组及AIDS组CD4^＋、CD3^＋T细胞表面CCR5的表达亦依次升高，各组间差异均有统计学意义（P〈0．05）；CD3^＋T细胞表面CXCR4的表达依次升高，AIDS组明显高于HIV组和LTNP组（P〈0．01）。（2）HIV／HCV合并感染组与单纯HIV感染组相比，AIDS组NK细胞明显下降（P〈0．05），CD4^＋T细胞下降，但无统计学意义，CD4／HLA-DR、CD8／HLA-DR、CD4／CXCR4、CD3／CXCR4明显升高（P〈0．01）；HIV组NK细胞明显下降（P〈0．01），CD4／CXCR4明显升高（P〈0．05）；LTNP组各项指标与单纯HIV感染组相比差异无统计学意义。（3）HIV／HCV合并感染组的HIV病毒载量随疾病进展不断升高，与单纯HIV感染组相比差异无统计学意义；HCV病毒载量在疾病不同阶段差异无统计学意义（P〉0．05）。结论随疾病进展，HIV／HCV合并感染者的免疫功能逐渐下降，HIV病毒载量逐渐升高。与单纯HIV感染相比，合并HCV感染可通过破坏机体天然免疫功能、促进免疫系统活化和受体表达，加速HIV感染的疾病进展。     

小鼠趋化因子COL19Ig融合蛋白表达载体的构建、表达及鉴定

通过特异引物扩增出去掉终止密码的mCCL19编码序列，经酶切、亚克隆、拼接构建了真核表达载体pcDNA3．1-CCL19Ig，酶切和测序鉴定插入序列；将重组质粒转染CHO细胞进行体外表达，通过RT—PCR、Western blot鉴定目的基因的表达，利用趋化小室法测趋化活性。结果测序证实重组表达载体含mCCL19编码序列和人IgGI Fc段序列，其序列分别与GenBank中公布序列比对一致，IgG1-Fc段读码框未发生改变；Western blot结果证实转染了pcDNA3．1-mCEL19Ig的CHO细胞培养上清中有相对分子质量为38000的融合蛋白mCCL19Ig表达；体外趋化实验表明融合蛋白mCCL19Ig对小鼠脾细胞有趋化活性，且呈剂量依耐关系。