应用荧光探针H2DCF-DA检测光照致细胞内活性氧产生的初步研究

目的应用荧光显微镜及新型荧光探针H2DCF-DA检测在光源照射过程中人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)内活性氧的产生情况。方法将ECV304细胞接种于35mm培养皿中,24h后加入H2DCF-DA,使其终浓度为10μmol/L,孵育30min。利用荧光显微镜的激发光源作为照射光源,在采集荧光图像的同时完成光源照射,光源输出波长范围为460～490nm,功率密度约为100mW/cm2。连续采集DCF的荧光图,观察细胞内DCF荧光的变化情况,采用计算机图像处理和分析技术,求得细胞内不同照射时间点DCF平均荧光强度,进而得到平均荧光强度-时间曲线。另外,使用线粒体特异标记探针MitoFluorRed589与H2DCF-DA共同孵育细胞,分别采集同一细胞的DCF的荧光图和MitoFluorRed589的荧光图,并利用像素-荧光强度分析方法来确定DCF荧光在细胞内的分布位置。结果在光源照射的开始阶段,ECV304细胞内的DCF荧光强度迅速增加,在第10s时便上升至第2s时的2.2倍,但是随着照射时间逐渐延长,荧光强度增幅逐渐变小,到第60s时上升至第2s时的4.7倍。观察时间进一步延长,DCF的荧光强度的变化似乎进入平台期,继而开始出现下降。考察DCF荧光在ECV304细胞内的分布位置主要通过比较细胞内不同区域的I1/I2值,通过图像分析与计算得到线粒体区、细胞核区以及细胞质非线粒体区内I1/I2值分     

Expression and effects of human telomerase RNA in testicular tumor

Human telomerase RNA (hTR) plays an important role in determining repeated telomere sequence and the expression of an antisense telomerase RNA that leads to telomere shortening and cell death.1 Using highly sensitive in situ nucleic acid hybridisation, we investigated the expression of hTR in human testicular tumours and located its cellular expression. Our study may help in elucidating the role of hTR in human testicular tumours, finding a highly sensitive diagnostic method and a target for gene therapy of testicular tumours.     

次氯酸对人血清白蛋白的氧化修饰影响及与高级氧化蛋白产物的关系

目的 研究次氯酸对人血清白蛋白(HSA)的氧化修饰影响及与高级氧化蛋白产物(AOPPs)之间的关系。 方法 有氧条件下在恒定浓度的HSA(60 mg/ml)内加入不同浓度次氯酸(0、1、5、10、20、30、40、50、60 mmol/L，最终浓度)，观察氧化剂对HSA的修饰作用。凝胶排阻色谱法检验HSA氧化修饰结果，在线光谱扫描(190 nm~400 nm)分析修饰产物的光谱特性。结果 次氯酸可氧化修饰人血清白蛋白，其修饰产物主要为二聚体HSA和六聚体HSA。发现次氯酸对HSA单体和HSA二聚体的氧化修饰为一级反应；对诱导生成的AOPPs为准一级反应；而对诱导生成的HSA六聚体则为二级修饰反应。同时发现白蛋白对AOPPs的主要贡献者是六聚体形式的HSA，光谱分析表明HSA聚集体的最大吸收峰发生红移，提示HSA聚集体是由于蛋白中的酪氨酸残基通过氧化交联方式而聚集形成的。 结论 HSA经次氯酸处理后主要发生了蛋白聚集。而对AOPPs的主要贡献者是六聚体形式的HSA。     

Ki67、P53及微血管密度在大肠肿瘤中的表达

目的 研究Ki67、P53及微血管密度(microvessel density,MVD)在大肠肿瘤中的表达,探讨其与大肠肿瘤癌变的关系及作为早期癌变生物学标志物的可能性。方法 采用免疫组化技术分别测定正常大肠黏膜、大肠息肉及大肠癌组织标本中Ki67、P53及MVD值,共80例,分析其变化规律及相关性。结果 在正常黏膜、大肠息肉、大肠癌组中的Ki67标记指数逐渐增高(分别为11.00±10.70、39.64±17.70、52.96±26.40),组间比较差异显著(P=0.0001)。正常黏膜组P53蛋白均为阴性,大肠癌组P53蛋白表达的阳性率明显高于息肉组(P=0.0001)。Ki67、P53蛋白表达与性别、年龄、病程、病变部位、大小、大肠癌的病理类型、Dukes分期均无相关性。正常黏膜、大肠息肉、大肠癌组的MVD值(14.80±5.10、19.70±7.84、36.56±20.40)逐渐上升,3组差别显著(P=0.0001)。大肠癌中Dukes C、D期的MVD值(40.56±3.49)明显高于A、B期(29.50±2.45)(P=0.016)。Ki67与P53在各种组织中的表达呈正相关(r=0.5149,P=0.015)。联合检测Ki67及P53鉴别大肠良恶性病变的敏感度(70.37％)低于单侧Ki67(96.30％),但特异度(94.34％)明显增高。结论 Ki67标记指数可反映细胞增殖状态,指数高的大肠腺瘤易发生癌变。MVD值高的大肠癌易发生转移,MVD可作为判断大肠癌预后的参考指     

两种剂量奥曲肽治疗食管及胃曲张静脉出血效果比较

①目的　比较两种剂量奥曲肽治疗食管、胃曲张静脉出血的临床效果。②方法　将 88例食管、胃曲张静脉出血病人随机分为奥曲肽 5 0 μg/h和 2 5 μg/h剂量组 ,观察平均止血时间、止血率、再出血率和不良反应。 ③结果　 5 0 μg/h组平均止血时间明显短于 2 5 μg/h组 (t=2 .2 4 ,P <0 .0 5 ) ,总止血率明显高于 2 5 μg/h组 (χ2 =5 .36 0 ,P <0 .0 5 ) ,再出血率较 2 5 μg/h组低 (χ2 =7.990 ,P <0 .0 5 )。两组均有 1例病人出现恶心。④结论　奥曲肽 5 0 μg/h剂量治疗食管、胃曲张静脉出血的效果优于 2 5 μg/h剂量     

食管内翻拔脱术治疗食管癌贲门癌19例分析

目的　探讨食管内翻拔脱术在食管癌、贲门癌外科治疗中的地位。方法　 19例食管癌、贲门癌病人接受了食管内翻拔脱术 ,其中食管鳞癌 15例 ,颈段 3例 ,胸中段 6例 ,胸下段 6例 ;贲门腺癌 4例。 0期 1例 ;Ⅰ期 4例 ;Ⅱa期 4例 ;Ⅱb期 1例 ;Ⅲ期 9例。 3例因有上消化道手术史行结肠代食管。结果　 19例均获切除 ,食管切缘阴性 ,无手术死亡。术后声音嘶哑 1例 ,心律失常1例 ,双侧胸腔积液 1例 ,左侧气胸伴左膈下脓肿 1例 ,5例出现小的颈部吻合口瘘。结论　食管内翻拔脱术扩大了食管癌、贲门癌的手术适应证 ,使某些常规手术高危患者重新获得手术机会。     

甘蓝复合果蔬汁的稳定性

单一的稳定剂并不能解决甘蓝复合果蔬汁的稳定性问题,而多种稳定剂的稳定效果较好,为此挑选出较好的3种稳定剂,对其进行不同比例的复配,观察一段时间的相对粘度及浊度变化,发现两种稳定剂的复配就能达到稳定的效果,最佳添加量(质量分数)为果胶0.07%,黄原胶0 03%.     

输精管绝育术复通前后血清抗精子抗体的变化与妊娠的关系

目的:比较3种术式输精管绝育术(直视钳穿输精管结扎术、输精管注射粘堵、可复性输精管注射栓堵)复通前后血清抗精子抗体情况的变化和差异,评价复孕与血清抗精子抗体及精液质量的关系。方法:对88例采用3种不同术式进行输精管绝育术术后2年复通的受试对象,分别在复通后3、6、12、24个月对精子出现、血清抗精子抗体和女方妊娠情况进行随访观察。结果:①3种术式绝育术间复通前后血清抗精子抗体的阳性率差异无显著性(P>0.05)。②复通术前后血清抗精子抗体阳性率变化差异无显著性(P>0.05)。③在接受复通手术的对象中,精子出现组和精子未出现组血清抗体阳性率间差异无显著性(P>0.05)。④血清抗精子抗体的阳性率、强度(活动精子挂珠率)和种类对妊娠无直接影响(P>0.05)。⑤复通对象中,已孕组和未孕组血清抗体阳性率间差异无显著性(P>0.05)。⑥精子密度≥20×106/m l组妊娠率明显高于精子密度<20×106/m l组(P<0.01)。结论:输精管绝育术术式对抗精子抗体无影响;复通术没有消除血清抗精子抗体或降低其阳性率;血清抗精子抗体对妊娠无直接影响;复通后的精液质量与复通后的复孕有直接关系。     

低分子肝素对不稳定型心绞痛病理生理干预作用的研究

目的:观察低分子肝素(LMWH)对不稳定型心绞痛((UAP)的临床症状、心电图、血脂以及内皮素(ET)的影响。方法:前瞻性地将84例UAP患者随机分为两组:对照组使用硝酸甘油、倍他乐克、阿司匹林等药物;治疗组(LMWH组)在上述治疗基础上加用LMWH(速避凝)。治疗前后调查临床症状以及心电图改变,抽血测定血脂、红细胞压积、血小板及内皮素水平的变化。结果:两组治疗后,患者心绞痛发作次数、持续时间以及硝酸甘油的用量明显减少,心电图明显改善,且LMWH组优于对照组(P<0.05)。LMWH治疗后,患者HCT、TC、TG及ET较治疗前明显降低(P<0.05)。对照组血浆ET水平无变化。结论:LMWH对UAP患者不仅具有抗凝抗栓作用,而且可以降低血液粘度、保护血管内皮细胞,纠正脂类代谢紊乱状态,     

肝癌患者血清P-选择素测定及临床意义

目的：研究肝癌患血清P-selection(P-sel)在肝癌复发和转移中的作用。方法：采用ELISA法分别测定原发性肝癌患和对照组血清P-选择素的含量，同时测定AFP含量。结果：肝癌患P-sel含量显高于正常人，且与AFP含量呈线性正相关，术后2周浓度降低；P-sel含量以Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ期肝癌患显高于Ⅰ期患；且大肝癌患显高于小肝癌患，有癌栓组、有肝内转移组明显高于无癌栓组和无转移组。结论：P-选择素测定在原发性肝癌的诊断和检测术后复发方面有重要价值，联合检测AFP和sP-sel可提高诊断敏感性。