γ射线辐照外周血单个核细胞联合ApoG2体外杀伤PC-3细胞的效应

目的：观察低剂量辐射外周血单个核细胞联合棉酚衍生物ApoG2对体外培养人前列腺癌PC-3细胞的杀伤作用。方法：采用1Gyγ射线照射人外周血单个核细胞,辐射剂量率为17Gy／min,实验设对照组、照射及未照射的外周血单个核细胞与PC．3细胞共培养组、ApoG2处理组及照射的外周血单个核细胞与ApoG2联合作用组。利用吖啶橙／溴化乙啶（AO／EB）荧光双染色法及MTT法,观察外周血单个核细胞和／或ApoG2对肿瘤细胞的杀伤情况。结果：辐照的外周血单个核细胞及ApoG2处理组对PC-3的杀伤作用明显增强,杀伤活性明显高于未辐照组（P〈0．05）,而联合作用组的杀伤活性明显高于辐照组及Ap0G2处理组（（P〈O．01）。结论：低剂量辐射外周血单个核细胞联合ApoG2可以明显提高其体外的抗肿瘤效应。     

2009年泉州市H1N1流感监测及基因特性分析

目的 了解2009年泉州地区H1N1流感监测情况,分析泉州市H1N1流感病毒的HA和NA基因特征,探讨该病毒的遗传变异及分子特性.方法 对泉州市H1N1流感监测期间的病人咽拭子采用real-time RT-PCR方法检测病毒核酸,MDCK细胞培养进行病毒分离、鉴定,并提取其中2株代表性毒株病毒RNA;采用RT-PCR扩增病毒HA和NA基因,纯化产物进行核苷酸序列测定;用DNAStar Megalign软件进行序列分析.结果 1020份咽拭子中有200份为H1N1流感病毒核酸阳性,70份季节性流感病毒核酸阳性,其中53份为H3N2亚型,14份为H1N1亚型,3份为B型,并分离到29株甲型H1N1流感病毒株.HA基因经核苷酸序列测定显示,该毒株与北美流行株高度同源,由HA基因核苷酸序列推导的氨基酸系列与疫苗株A/Brisbane/59/2007相比,有22个位于抗原决定簇的氨基酸位点发生变异,但受体结合特异性仍为人样受体.NA基因耐药性位点分析,显示对达菲药物依然敏感.结论 2009年泉州市H1N1流感流行毒株与北美流行株高度同源,相对于疫苗代表株出现了HA蛋白抗原性的改变.     

测序确定人类白细胞抗原新等位基因DRB1*1461

目的 确定HLA-DR位点的一个新等位基因.方法 应用聚合酶链反应-序列分型(polymerase chain reaction sequence-based typing,PCR-SBT)方法对1例白血病患者HLA-DR位点进行基因分型.结果 新等位基因碱基序列与已知的HLA-DR位点的等位基因都不相同,同源性最高是HLA-DRBl*1404,只有1个碱基的差别,以第2外显子第1位为起点,第33位T→C,17位密码子编码的氨基酸由酪氨酸(Tyr)变为组氨酸(His).结论 该等位基因为HLA-DR位点新等位基因,2006年5月被世界卫生组织命名委员会正式命名HLA-DRB1*1461.     

靶向CD24的siRNA表达载体构建及其沉默效应的研究

目的构建CD24特异的RNA干扰质粒,为探讨CD24在肿瘤中的作用及以其为靶点的肿瘤治疗奠定基础。方法根据Genbank提供的核苷酸序列,设计、合成靶向CD24基因的寡核苷酸序列,并与表达质粒psilence3.1-H1-Hygro连接,将构建成功的重组质粒pSi-CD24转染到宫颈癌上皮细胞Hela中,用RT-PCR和Western blot检测转染后Hela细胞CD24表达的变化。结果成功构建CD24 siRNA表达载体pSi-CD24,转染Hela细胞后在mRNA水平和蛋白水平均能显著抑制CD24的表达。结论成功构建了CD24特异性siRNA表达载体pSi-CD24,能有效阻断Hela细胞CD24的表达,为进一步研究奠定了基础。     

细胞因子调节垂体MtT/S细胞中人生长激素基因启动子的活性

目的:探讨细胞因子白介素-11(IL-11)、睫状神经营养因子(CNTF)和转化生长因子(TGF-β)对大鼠垂体MtT/S细胞中人生长激素(hGH)基因启动子活性的影响及其与垂体特异性转录因子Pit-1蛋白的关系。方法:采用荧光素酶报告基因的方法。首先建立含hGH基因启动子(-484～30 bp)和荧光素酶融合基因的稳定转化MtT/S细胞系,然后用细胞因子刺激,检测细胞培养液和细胞裂解液中GH的含量,反映它们对GH分泌和合成的影响;检测MtT/S细胞内荧光素酶的变化,说明细胞因子对hGH基因启动子活性的作用。将Pit-1蛋白表达质粒(pcDNA-pit-1-cDNA)单独转染或与Pit-1反义寡核苷酸(Pit-1OND)共转染于稳定转化的MtT/S细胞中,观察加入细胞因子后荧光素酶的变化,探讨细胞因子的作用与Pit-1蛋白的关系。结果:IL-11(20 nmol/L)、CNTF(10 nmol/L)能刺激大鼠垂体MtT/S细胞中GH的分泌和合成,增强MtT/S细胞中荧光素酶的表达,分别增加到对照组的134%、122%。TGF-β(5 nmol/L)能减少GH的分泌和合成,抑制荧光素酶的表达到对照组的72%。Pit-1蛋白过表达和表达被抑制对细胞因子的调节作用没有影响。结论:IL-11、CNTF和TGF-β通过调节大鼠垂体MtT/S细胞中hGH基因启动子活性影响GH的合成,Pit-1蛋白可能不参与这一调节作用。     

肝脏IVa、IVb亚段间分界的临床影像解剖学研究

目的通过研究在体肝脏的CT重建图像,确定肝脏左内侧叶IVa、IVb亚段间的分界及走行在两亚段之间的肝静脉属支。方法采用容积再现(volume rendering,VR)和最大密度投影(maximum intensity projection,MIP)两种方法,对49例在体肝脏CT扫描图像进行肝内血管的三维重建,寻找肝脏左内侧叶IVa、IVb两亚段间分界及走行在段间裂内的肝静脉属支及其汇入部位。结果在VR和NIP两种重建图像上,作为两亚段分界标志的肝静脉属支出现率分别为14.29%和87.75%,因此采用MIP法重建出的三维图像对于寻找肝内细小血管分支更适用。该支肝静脉属支的汇入部位可分为以下3种情况:①汇入肝中静脉主干有24例,占55.81%;②汇入肝中静脉左根有16例,占37.21%;③汇入肝左静脉有3例,占6.98%。结论通过CT三维重建图像可以确定肝脏IVa、IVb两亚段间分界,并且走行在该分界位置的肝静脉属支可作为两亚段间的分界标志,结果为临床上涉及肝脏左内侧叶IVa、IVb亚段的肝脏外科手术提供形态学依据。     

pNTAP-PRAK真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达

目的: 构建pNTAP-PRAK真核表达质粒,并建立其稳定表达的HEK293细胞系。方法: 将人的PRAK亚克隆至串联亲和纯化(tandem affinity purification, TAP)载体pNTAP质粒上,构建成重组质粒pNTAP-PRAK,转化该重组质粒至感受态大肠杆菌DH5α,阳性克隆进行PCR、酶切及DNA测序验证正确后,利用PolyFect脂质体介导将其转染至HEK293细胞中,再通过G418筛选建立稳定表达TAP tag-PRAK融合蛋白的HEK293细胞系;利用Western blotting和细胞免疫荧光标记法检测融合蛋白TAP tag-PRAK的表达及细胞内定位情况。结果: 重组真核表达载体构建正确,该重组质粒能在HEK293细胞中稳定表达,表达产物TAP tag-PRAK主要分布在核内。结论: 成功构建pNTAP-PRAK真核表达载体并建立了其稳定表达的HEK293细胞系,TAP标签未对PRAK定位产生明显影响。     

神经外科术后无症状肺血栓栓塞症的诊断及处理

目的 研究神经外科术后的无症状肺血栓栓塞症,提高神经外科术后深静脉血栓及无症状肺血栓栓塞症的诊断及治疗水平。方法 分析我院神经外科诊断并治疗的2例无症状肺血栓栓塞症患者的临床资料,通过D-dimer,超声及CTPA进行筛查及诊断,明确诊断后予以肝素及低分子肝素抗凝治疗,后期行华发林抗凝,其中1例在抗凝治疗前急诊行下腔静脉永久滤网植入术。结果 本组D-dimer筛查结果1例正常,1例稍高于参考值上限;超声证实2例患者均有下肢静脉血栓;CTPA明确诊断为肺血栓栓塞症。抗凝治疗后复查CTPA肺血栓栓塞症有明显改善。2例患者出院后继续华发林抗凝治疗。结论 临床工作中应重视发生肺血栓栓塞症的各种危险因素,及早对高危人群进行筛查,制定围手术期的整体预防和治疗方案。     

人eNOS启动子不同序列驱动的红色荧光蛋白载体的构建与表达

目的:为了研究人血管内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)启动子的功能,构建在哺乳动物细胞中表达的人eNOS启动子不同区段驱动的红色荧光蛋白报告基因载体。方法:从重组pDseNOSRed载体上将eNOS启动子的不同长度DNA序列亚克隆至红色荧光蛋白载体pDsRed1-1上,经PCR、酶切和DNA测序鉴定,将重组载体pDsF1033Red,pDsF494Red和pDsF166Red转染NIH3T3细胞,在倒置荧光显微镜下观察它们在细胞内的表达情况。结果:PCR、酶切和DNA测序结果均表明重组载体pDsF1033Red,pDsF494Red和pDsF166Red的构建正确,这些载体能在NIH3T3细胞中有效表达。由eNOS启动子不同区段驱动表达的95％以上的红色荧光蛋白均匀分布于整个细胞,转染后48-60h开始出现,96-144h为红色荧光蛋白(RFP)的表达高峰,RFP的荧光在144h最强,168h后红色荧光逐渐消退,21d后仍有很少量红色荧光残留。RFP的表达量和荧光强度明显低于强启动子p_CMVIE驱动的RFP。结论:成功构建了eNOS启动子不同区段驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,它们能在哺乳动物细胞中有效表达,静息状态下呈现弱转录活性,为研究人eNOS启动子不同区及其顺式调控元件的作用提供了实用而又方便的工具。     

6q25区域内一个新基因MTLC的克隆及特性分析

目的：克隆6q25区域内喉癌相关新基因。方法：以表达序列标签为电子探针，在人类基因组数据库中进行电子杂交，钓出相就基因组DNA克隆后进行基因预测。根据获得的基因序列设计引物，逆转录－聚合酶链反应扩增新基因cDNA。结果：克隆了1个6q25区域内的新基因。该基因全长约21kb，含两个外显子，其cDNA序列长1006bp，编码蛋白包括235个氨基酸。其5’侧翼序列存在癌蛋白c-Myc的结合位点，将其命名为MTLC（c-Myc target from laryngeal cancer cells）基因。同源性分析表明该基因编码蛋白与小鼠MT－MC1蛋白同源性达78％。MTLC蛋白一级结构含有一个核定位信号结构域，亚细胞定位实验证实该基因主要在细胞核表达，Northern印迹分析表明MTLC基因在心肌、肝、肾、脑等多个组织有表达。结论：成功克隆了1个新基因MTLC，该基因可能作为c-Myc的靶基因以转录因子形式参与维持细胞正常生理功能。