核糖核酸的酶消化方法直接顺序分析

应用硷基特异性核酸内切酶进行RNA的顺序分析。以~(32)P标记RNA分子的5′或3′末端的四种硷基能被酶试剂部分裂解。放射性的水解产物经胶电泳按其大小而分离。放射自显影后它的核苷酸顺序从带谱上可以直接读出。核糖核酸酶(RNasc)T_1(G特异性)、U_2(A特异性)、Phy M(U+A特异性)和B.cereus(C+U特异性)是最常用于顺序RNA的四种酶。     

低剂量奥沙利铂并氟脲嘧啶对晚期复发直肠癌放疗增敏作用的临床观察

目的：观察奥沙利铂（L-OHP）并5-氟脲嘧啶、甲酰四氢叶酸钙（5-Fu／LV）配合放疗治疗晚期复发直肠癌患者的增效作用与毒性反应。方法：23例无法手术的晚期复发直肠癌患者进行盆腔放疗，在放疗的第1、5同前一天开始给予L-OHP30mg／m。静滴0．5h，LV100mg／m^2和5-Fu375mg／m^2静滴4h，连用4d。25例单纯放疗者为对照组。结果：放疗结束时，观察组局部症状缓解率较对照组高，尤其对会阴区下坠疼的改善明显（P〈0．05），且转移症状亦有所缓解。两组有效率分别为78．3％、48％（P〈0．05），完全缓解分别为8．7％、4．0％。主要毒副反应是消化道反应、神经毒性、静脉炎，骨髓抑制。结论：利用低剂量L-OHP并5-Fu／LV的增敏作用配合放疗治疗晚期、复发直肠癌可提高近期疗效，改善症状，尤其对于伴远外转移者，为理想、安全的治疗手段。     

Synergistic effects of Nell-1 and BMP-2 on the osteogenic differentiation of myoblasts.

Osteogenesis is synergistically enhanced by the combined effect of complimentary factors. This study showed that Nell-1 and BMP-2 synergistically enhanced osteogenic differentiation of myoblasts and phosphorylated the JNK MAPK pathway. The findings are important because of the osteochondral specificity of Nell-1 signaling and the potential therapeutic effects of coordinated BMP-2 and Nell-1 delivery. INTRODUCTION: BMPs play an important role in the migration and proliferation of mesenchymal cells and have a unique ability to alter the differentiation of mesenchymal cells toward chondrogenic and osteogenic lineages. Signaling upstream of Cbfa1/Runx2, BMPs effects are not limited to cells of the osteoblast lineage. Thus, additional osteoblast-specific factors that could synergize with BMP-2 would be advantageous for bone regeneration procedures. NELL-1 (NEL-like molecule-1; NEL [a protein strongly expressed in neural tissue encoding epidermal growth factor like domain]) is a novel growth factor believed to preferentially target cells committed to the osteochondral lineage. MATERIALS AND METHODS: C2C12 myoblasts were transduced with AdLacZ, AdNell-1, AdBMP-2, or AdNell-1+AdBMP-2 overexpression viruses. Effects were studied by cell morphology, alkaline phosphatase activity, osteopontin production, and MAPK signaling. Additionally, in a nude mouse model, viruses were injected into leg muscles, and new bone formation was examined after 2 and 8 wk. RESULTS: C2C12 myoblasts co-transduced with AdNell-1+AdBMP-2 showed a synergistic effect on osteogenic differentiation as detected by alkaline phosphatase activity and osteopontin production. Nell-1 stimulation on AdNell-1 + AdBMP-2 preconditioned C2C12 cells revealed significant activation of the non-BMP-2 associated c-Jun N-terminal kinase (JNK) MAPK signaling pathway, but not the p38 or extracellular signal-regulated kinase (ERK1/2) MAPK pathways. Importantly Nell-1 alone did not induce osteogenic differentiation of myoblasts. In a nude mouse model, injection of AdNell-1 alone stimulated no bone formation within muscle; however, injection of AdNell-1+AdBMP-2 stimulated a synergistic increase in bone formation compared with AdBMP-2 alone. CONCLUSIONS: These findings are important because of the confirmed osteochondral specificity of Nell-1 signaling and the potential therapeutic effects of enhanced BMP-2 action with coordinated Nell-1 delivery.     

股骨头骨坏死样本空间结构的Micro-CT评估

目的以股骨头骨坏死样本的Micro-CT断层图像为基础，对其进行空间结构评估。方法2003年11月～2005年6月，收集股骨头骨坏死患者行全髋关节置换术时取出的股骨头样本6个，对样本进行Micro-CT断层扫描，获取股骨头骨坏死样本的计算机三维图像，图像空间分辨率为36μm×36μm×36μm。手工选取兴趣区，随后采用骨体积分数（BV／TV）、骨小梁间隙（Tb．Sp）、骨小梁厚度（Tb，Th）、骨小梁数目（Tb．N）、骨表面积体积比（BS／BV）、结构模型指数（SMI）、骨小梁模型因子（Tb．Pf）等三维空间参数分别对股骨头骨坏死标本的正常区域、硬化带和塌陷区进行评价。结果晚期股骨头骨坏死硬化区和塌陷区的骨小梁空间结构明显改变：硬化区Bv／Tv明显增加，Tb．Th明显增厚，Tb，Sp变窄，SMI与正常区域的骨小梁无差别；而塌陷区Bv／Tv明显减少，BS／BV增大，Tb．N和Tb．Pf增加，Tb，Th改变不明显。结论Micro-CT作为一种新的检测手段，能够在不损伤样本的条件下快速获取股骨头骨坏死样本断层图像，具有精度高、检测快、可进行三维重建分析的优点。晚期股骨头骨坏死不同区域的骨三维结构呈现出不同的空间结构特征。     

术中超声导航辅助切除脑动静脉畸形

目的探讨术中实时超声导航在脑动静脉畸形(AVM)外科治疗中的应用价值。方法26例脑AVM显微手术切除术中,使用Aloka SSD 4000型超声检查仪扫描,进行AVM定位、辨别供血动脉和引流静脉;确定血肿与AVM的关系以及血流动力学监测。病变切除后重复超声检查AVM残留与否,并与术后脑血管造影结果对比。结果26例畸形血管团均住实时超声下清晰显示并获得全切除。血肿区为高同声无血流信号;供血动脉与正常血管在血流动力学上有差别;术中超声影像所示的病变全切除为术后血管造影所证实。结论术中实时超声能够对脑AVM进行准确定位,指导皮质切口的设计,并可判定病灶是否全切除.对于术前的MRI、DSA检查起到很有价值的补充作用。     

肝癌患者血清12种肿瘤标志物的变化

目的探讨定量测定肝癌患者血清12种肿瘤标志物的临床意义。方法用蛋白芯片技术定量测定42例正常人、46例肝癌、41例肝炎和23例肝硬化患者血清12种肿瘤标志物的变化并对检测效果进行评价。结果42例正常人CA-199(KU/L)、NSE(g/L)、CEA(g/L)、CA-242(KU/L)、Ferritin(g/L)、β-HCG(g/L)、AFP(g/L)、f-PSA(g/L)、PSA(g/L)、CA-125(KU/L)、HGH(g/L)和CA-153(KU/L)的含量分别为12.42±10.62、2.22±1.43、1.28±1.20、5.72±5.73、91.17±79.43、0.64±0.34、2.96±3.93、0.13±0.11、0.61±1.40、5.46±9.65、1.61±2.40、9.83±9.51;46例肝癌患者血清12种肿瘤标志物含量依次为:35.09±39.50、2.83±4.13、2.98±8.72、8.47±23.42、157.50±129.77、0.72±0.72、87.58±63.27、0.15±0.19、0.58±1.88、56.34±102.02、3.63±4.57、15.65±51.09;41例肝炎患者其含量依次为:76.23±96.57、4.12±4.94、2.06±3.92、4.68±6.99、298.76±326.82、1.00±0.74、63.16±91.76、0.11±0.006、0.27±0.94、18.57±36.60、3.63±4.00、6.13±6.86;23例肝硬化患者其含量依次为:49.85±75.60、5.47±14.97、1.71±1.77、12.44±34.55、278.32±326.82、0.70±0.54、52.89±98.28、0.22±0.21、2.24±4.36、111.50±191.99、2.15±0.99、10.51±15.79。该蛋白芯片测定的敏感性为50.0%,特异性为64.2%,阳性预测值为37.7%,阴性预测值为74.7%。结论采用蛋白芯片技术同时测定患者血清多种肿瘤标志物,对普查肿瘤和临床疗效观察有较好应用价值。     

久泻宁动物毒性试验研究

目的 （1）观察久泻宁一日内小鼠灌胃1～3次后的毒性反应和死亡情况，测定最大耐受量；（2）观察久泻宁给大鼠连续灌胃3个月，对机体产生的毒性反应、严重程度及可逆性，确定无毒剂量。为人拟用量提供参考。方法 （1）久泻宁小鼠灌胃，一日2～3次，观察急性毒性反应．测定最大耐受量；（2）久泻宁高、中、低三个剂量组和一个对照组，大鼠连续灌胃3个月，观察外观行为和体质量变化。试验期结束。每组取1/2动物活杀。检测血常规、血液生化、病理组织；1／2动物停药进行3周的恢复期观察后。同法检测上述指标。结果 久泻宁小鼠灌胃给药的最大耐受药量为750g／kg（含生药）。相当临床日拟用量（2．5g／kg）的300倍；大鼠连续3个月灌胃给药的无毒剂量为125g／kg（含生药）．相当临床拟用量50倍。结论 久泻宁无明显毒性，安全范围大。临床日拟用量2.5g／kg、疗程1个月是安全的。     

近交系胎鼠中脑多巴胺能神经元体外定向分化的初步研究

目的体外培养近交系大鼠胚胎腹侧中脑前体细胞(VMP)并诱导其分化为多巴胺能神经元(DN),为研究DN定向分化的分子机制提供细胞模型。方法取材胎龄11d的近交系大鼠胚胎VMP,体外用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)增殖培养7d后换用L-抗坏血酸-2-磷酸酯倍半镁盐(AA-2P)诱导分化为DN,随后进行免疫荧光染色鉴定。结果细胞总数扩增49.76倍,免疫荧光染色显示β-TubulinⅢ阳性的神经元中(71.33±20.42)%为TH阳性的DN,后者占细胞总数的(24.85±12.85)%。结论近交系大鼠VMP经体外原代培养能够得到较高比例的DN,可作为深入研究DN定向分化分子机制的细胞模型。