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91.
人类白细胞抗原-G突变体cDNA克隆及在K562细胞上的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:克隆人类白细胞抗原-G(Human leukocyte antligen-G,HLA-G)突变体cDNA,并使其在HLA-I类阴性的K562细胞上获得稳定表达,为研究配-受体之间的识别机制奠定基础。方法:用RT-PCR方法从人子宫蜕膜组织扩增出HLA-GcDNA,得到全长HLA-GPCR产物后,用桥式PCR方法进行定点点突变,将突变的目的基因亚克隆于逆转录,将突变的目的基因亚克隆于逆转录mG-pLNCX表达载体,采用感染的方法将重组质粒转入K562细胞,最后经G418筛选及有限稀释,利用单克隆抗体W6/32进行FACS及mRNA检测,观察HLA-G突变体在靶细胞表面的表达。结果:HLA-G突变体分子在经mG-pLNCX转染的靶细胞表面获得稳定高表达。结论:成功构建了mG-pLNCX表达载体,并使HLA-G突变体分子在HLA-I类阴性的靶细胞K562细胞上获得稳定表达。 相似文献
92.
颅内海绵状血管瘤 CCM1基因第12外显子及其5′端内含子新突变位点 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 探讨 CCM1基因突变在中国人颅内海绵状血管瘤 ( intracranial cavernous angiomas,ICCA)发病中所起的作用。方法 收集我院神经外科 2 0 0 2年 6月~ 2 0 0 3年 2月收治并经手术病理证实的2 1例 ICCA患者及 15名正常健康对照者 ,从外周静脉血中提取 DNA,PCR法扩增 CCM1基因第 12外显子及其两侧部分内含子序列 ,应用 DNA直接测序技术对扩增产物进行检测。结果 5例患者中检测出 3处 CCM1基因突变 ,均为首次发现。其中 ,5例患者中均存在 1172 C→ T的错义突变 ,使编码 KRIT1蛋白391位的氨基酸由丝氨酸变成苯丙氨酸。另有 1例患者存在 116 0 A→ C的错义突变 ,使编码 KRIT1蛋白387位氨基酸的谷氨酰胺变成脯氨酸。另一个突变发生在第 12外显子 5′端内含子区域 ,5例患者中有 4例第 4个碱基 C被 T取代。对照组检测结果无异常。结论 中国 ICCA患者存在 CCM1基因第 12外显子的突变 ,并与 ICCA的发病有关 相似文献
93.
一氧化氮诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡机制研究 总被引:3,自引:3,他引:3
目的:研究一氧化氮(NO)诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)凋亡的作用机制。方法:体外培养Wistar大鼠PASMC,加入NO供体硝普钠(SNP)于常氧和低氧条件下孵育12h或24h,通过流式细胞术碘化丙啶染色法观察PASMC细胞周期时段及凋亡亚二倍体峰变化,应用细胞免疫化学法检测PASMCcaspase-3和NF-κB的表达,同时行DNA断裂琼脂糖凝胶电泳。结果:SNP作用后PASMC出现剂量-依赖性促凋亡作用(P<0.01),表现为凋亡指数与caspase-3表达的不同程度的增强。随凋亡的进展,出现PASMC凋亡核小体DNAladder,同时PASMCNF-κB阳性核表达较对照组少(P<0.01)。结论:外源性NO诱导大鼠PASMC凋亡,caspase-3与NF-κB可能涉及PASMC凋亡的调控信号途径。 相似文献
94.
目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者血清维生素E水平与肝组织病理的关系.方法 选择66例慢性乙型肝炎患者进行肝穿刺病理学检查,健康对照组10例.化学比色法检测血清维生素E表达水平,同时检测HBV DNA、HBeAg及肝功能.结果 与正常对照组相比,慢性乙型肝炎患者血清维生素E水平明显降低(P<0.01);HBeAg阳性组与HBeAg阴性组比较,血清维生素E水平无明显差别(P0.05).CHB患者血清维牛素E水平与肝脏组织炎症呈负相关关系(r=-0.451,P<0.05),而与肝脏组织纤维化程度无明显相关(r=0.02,P0.05).结论 维生素E作为体内重要的抗氧化剂,参与了慢性乙型肝炎的炎症过程.在肝脏炎症过程中,适当补充维生素E,可能有助于缓解病情. 相似文献
95.
阿糖胞苷上调白血病细胞CD86分子及细胞因子表达的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:观察阿糖胞苷(Ara-C)对急性白血病细胞CD86分子表达的影响,并探讨其作用机制.方法:流式细胞术(FCM)检测U937、HL60、NB4细胞经Ara-C处理前后CD86分子表达变化,RT-PCR检测Ara-C对各组细胞CD86mRNA、NF-кB以及细胞因子IFN-γ的表达变化.结果:经Ara-C处理的急性白血病细胞CD86分子表达与对照组相比均明显升高(P<0.05);CD86 mRNA表达水平也明显增强;Ara-C处理后细胞核内NF-кB表达明显上调;并且IFN-γ mRNA在T细胞活化72 h可检测到.结论:Ara-C能使U937、HL60、NB4急性白血病细胞CD86表达增加,有利于NF-кB等转录因子活化,促进CD86转录增强、表达增加并可有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞,B7-2在T细胞活化中起着更重要的作用. 相似文献
96.
髓过氧化物酶在大鼠哮喘中的作用及地塞米松对其的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:观察大鼠哮喘中性粒细胞(PMN)及其髓过氧化物酶(MPO)的表达水平及地塞米松(DM)对其的影响。方法:采用大鼠哮喘模型,随机分成哮喘组(A组)、正常对照组(C组)、地塞米松治疗组(D组),对血PMN进行分离纯化和支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数,免疫组化和比色法测定MPO的表达水平。结果:(1)A组血PMN和支气管壁中MPO的表达水平均显著高于C组(P〈0.01);D组血PMN中其表达水平显著低于A组(P〈0.01),而在支气管壁两者没有显著性差异(P〉0.05)。A组肺组织和BALF中MPO的活性均显著高于C组(P〈0.01,P〈0.05),D组肺组织中其活性显著性低于A组(P〈0.01),而在BALF中两者没有显著性差异(P〉0.05)。(2)A组BALF、肺组织中PMN的计数均显著高于C组(P〈0.01);D组肺组织中其计数显著高于A组(P〈0.01),而两组BALF中PMN占细胞总数的百分比无显著性差异(P〉0.05)。结论:PMN及其MPO的表达水平在哮喘时增加,PMN可能通过合成MPO参与了哮喘的炎症过程,DM对其合成功能有抑制作用,但加剧PMN在肺组织中聚集。MPO与气道中PMN的浸润密切相关。 相似文献
97.
人类精液中一氧化氮和尿酸含量检测的关系 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨人精液中一氧化氮(N0)与尿酸含量的关系,对精了质量的影响。方法参照WHO标准方法,进行精液常规分析,按精子密度、活动率不同分为(正常、<20、20~40、>40)4个组。采用镀铜镉还原荧光法检测NO代谢产物硝酸盐(NO3-)。采用尿酸酶一过氧化物酶偶联法检测精液尿酸含量。结果70例不育组精液中尿酸含量和NO含量为(236.4±47.8)μmol/L、(78.7±1.6)μmol/L与正常生育组(398.6±52.3)μmol/L、(41.84±1.6)μmol/L呈显著性差异(P<0.01)。将尿酸含量与NO含量进行相关性分析,两者呈显著性负相关(r=-0.96,P<0.05)。不育各精子密度和活动率组精液尿酸含量随精子密度及活动率增加而上升,N0含量随之下降(P<0.01),结论精液尿酸含量测定可作为评价精子受活性氧损害的重要指标,证明尿酸对活性氧尤其在医学领域极为重视的NO损害精子具有保护性作用。 相似文献
98.
C基因截短的HBV复制与包装 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨C基因截短型HBV变异体的复制与包装。方法 采用分子克隆、人工定点突变等技术构建C基因截短型HBV变异体质粒,用脂质体法转染HepG2细胞,提取细胞内及培养上清液中DNA分别进行Southem杂交,PCR及实时定量荧光PCR分析。结果 经DNA测序及酶切鉴定证实C基因截短型HBV质粒载体构建成功;C基因截短型HBV为复制缺损型,与辅助质粒共转染HepG2细胞,可在细胞内及培养上清液中检测到HBV各种DNA构型;DNA定量分析提示C基因截短型HBV的包装效率较野生型HBV提高3~40倍。结论 C基因截短型HBV变异体为复制缺损型,单独转染后不能在肝细胞内包装与复制,但在缺失包装信号ε的相应辅助病毒辅助下可有效复制并包装成子代病毒颗粒分泌到胞外,且包装效率大大提高。 相似文献
99.
100.
横纹肌肉瘤中小窝蛋白-3的表达及鉴别诊断意义 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 研究小窝蛋白-3(caveolin-3)在横纹肌肉瘤(RMS)中的表达特点与鉴别诊断价值.方法 选取20例RMS、30例其它软组织肿瘤.用免疫组化SP法及原位杂交分别检测caveolin-3的蛋白和mRNA的表达水平.用免疫组化SP法分别检测20例RMS中desmin和myoD1蛋白的表达水平.结果 SP法caveolin-3蛋白在RMS阳性表达率为80%(16/20),其它软组织肿瘤皆为阴性(0/30),两者之间的表达差异具有统计学意义(P<0.05).原位杂交在15例RMS中有13例检测到caveolin-3 mRNA表达,阳性表达率为86.7%(13/15),在26例其它软组织肿瘤中的阳性表达率为7.7%(2/26),两者之间的表达差异亦有统计学意义(P<0.05).SP法RMS中desmin和myoD1蛋白的阳性率分别为84.2%(16/19)、89.5%(17/19),与caveolin-3蛋白的表达差异均无统计学意义(P>0.05).结论 caveolin-3在RMS中的表达有较高的敏感度和特异性,可作为临床鉴别诊断RMS和其它软组织肿瘤的有用的新型标记物. 相似文献