基因表达系列分析及其应用前景

基因表达系列分析(Serial analysis of gene expression，SAGE)是一种研究真核细胞表达基因信息的高通量检测技术，它能对细胞内所有表达基因进行定性与定量分析。近年来此技术广泛应用于获得表达基因谱的研究，并且可以发现新基因信息，还可发现基因的靶向定位以及对其它基因的影响，明确表达基因的功能。本文就SAGE的原理、实验方案、技术发展与演变及其应用前景进行详细介绍。     

中国东部汉族人群原发性胆汁性肝硬化与HLA-DRB1相关性分析

目的：探讨组织相容性抗原Ⅱ类HLA—DRB1等位基因与原发性肝汁性肝硬化（Primary biliary cirrhosis，PBC）患者人群的相关性。方法：采用序列特异性引物PCR（SSP．PCR）对105例确诊PBC患者，400例健康人群进行HLA-DRB1等位基因及相关亚型基因分析。结果：PBC患者组DRB1＊07的频率为37．26％，与正常人组的13．8％相比存在显著性差异（P〈0．05，比数比为2．7），所有阳性患者经亚型分析均为DRB1＊0701；其余DRB1的等位基因频率与正常对照组比较无显著性差异。DRB1＊0701阳性与阴性患者群体的疾病进程、临床指征、实验室指征等无显著性差异。绪论：中国人群PBC患者可能与DRB1＊0701易感性相关，为临床治疗提供了一定线索。     

抗幽门螺杆菌rHpaA鸡蛋黄抗体的研制

目的：采用基因工程技术表达重组幽门螺杆菌黏附素rHpaA，以此蛋白为抗原制备抗rHpaA的高特异性鸡蛋黄抗体。方法：诱导重组质粒pQE30-HpaA在大肠杆菌中大量表达rHpaA蛋白，用rHpaA免疫鸡，以水稀释法联合盐析法提取纯化IgY，采用Bradford法测定含量，SDS—PAGE电泳分析纯度，Western blot鉴定抗原特异性，ELISA测定效价和巴氏消毒后的活性。结果：IgY提纯后含量为24．6mg／ml，纯度约为90％，Western blot显示在相对分子量30000处出现单一条带，ELISA效价为1：12800，巴氏消毒后未见效价损失。结论：成功获得了高浓度、高纯度、高效价、耐巴氏消毒的特异性IgY，为进一步制备预防幽门螺杆菌感染的特异性IgY制剂奠定了基础。     

转录调控蛋白PrfA对两组新近发现的单核细胞增生李斯特菌基因的体外转录作用的研究

目的研究转录调控蛋白PrfA对两组新近发现的单核细胞增生李斯特菌基因的体外转录作用。方法利用本室近年来建立的体外转录系统,对两组基于转录基因组体内研究发现的5个可能的受PrfA不同调节的单核细胞增生李斯特菌基因进行了体外转录活性的研究。结果第一组中的hpt基因的体外转录活性受PrfA正调节,而其它4个基因既不被PrfA正调节也不被负调节。结论除hpt基因外,其它4个基因体外转录结果与体内实验不相一致,说明PrfA在体内可能通过复杂多样的非直接方式、或者还需要一些目前未知的因子来调控这些新近发现的基因的表达。     

晨练老年人的心理健康状况及相关因素分析

目的:了解无锡地区晨练老年人的幸福度和心理健康水平,并分析其相关因素.方法:以161名长期参加晨练的老年人为研究对象,111名一般社区老年人为对照,应用纽芬兰纪念大学幸福度量表(MUNSH)、SCL-90症状自评量表及老年人一般情况调查表进行调查,应用最优尺度回归法进行分析.结果:晨练老年人的幸福度优于对照组(总分36.41±7.34,33.13±6.02,t=4.13,P＜0.001),晨练组SCL-90结果也优于对照组(总分114.72±24.41/121.62±24.05,t=2.42,P＜0.05);影响其幸福度的主要因素为人际关系、对子女的满意度、对离退休的态度和居住条件.结论:老年人适度地参加一些体育锻炼有利于心身健康.     

长寿老人主观幸福感及其相关因素研究

目的:了解长寿老人主观幸福感及其影响因素。方法:采用横断面整群抽样调查方法,对732例都江堰市90岁以上老人进行费城老年中心信心量表(PGCMS)、家庭关怀度指数(APGAR)、中文版简易智能状态检查(MMSE)、日常生活能力量表(ADL)及社会支持量表(SSRS)调查。结果:PGCMS在90-108岁老人中呈负偏态分布,PGCMS总分为1-23分,M(QL-QU)为17(13-19)。各年龄组间PGCMS的差异无统计学意义,PGCMS与SSRS中的主观社会支持、客观社会支持及APGAR、MMSE、ADL中的躯体生活自理分量表的相关有统计学意义。结论:PGCMS在90-108岁老人中呈负偏态分布,分值不随年龄的增加而变化。对90—108岁长寿老人主观幸福感有影响的因子及强度依次为主观社会支持、客观社会支持、认知功能状况、家庭关怀情况及日常生活中躯体生活自理能力。     

支气管哮喘患者血清IL-10与IgE水平变化的研究

分别用ELISA、IRMA法对50例支气管哮喘急性发作患者和48名对照者血清IL-10、IgE进行测定.结果是: 支气管哮喘患者IL-10含量明显低于对照组(P＜0.01), 而IgE含量则明显高于对照组(P＜0.01), 两者之间呈明显负相关(r=-0.18,P＜0.01).结论是: 支气管哮喘患者IL-10不足、IgE水平增高可能成为其发病的重要原因之一.     

涎腺腺样囊性癌高、低转移细胞系基因表达谱及基质金属蛋白酶表达差异

目的筛选与涎腺腺样囊性癌转移相关的候选基因，并对其中的候选基因进行初步的验证。方法用限制片段差异显示PCR技术（restriction fragments differential display PCR, RFDD-PCR）建立涎腺腺样囊性癌高、低转移细胞株（ACC-M、ACC-2）的表达谱。对两个表达谱的片段进行比较，通过生物信息学的分析，初步筛选出候选基因。用半定量逆转录PCR技术对筛选出的基因进行初步验证。结果RFDD-PCR方法共获得5420个基因片段，其中包含12个基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）基因。半定量逆转录PCR方法发现MMP2、MMP7、MMP9、MMP14、MMP15、MMP24在ACC-M和ACC-2中的表达存在明显差异。结论构建了ACC-M和ACC-2细胞株的表达谱，为寻找目的基因奠定了基础。发现MMP2、MMP7、MMP9和MMP15与涎腺腺样囊性癌的发生、发展、转移有关，不同肿瘤细胞的转移能力可能与不同的MMPs家族基因相关。     

茶叶有效成分抗肿瘤侵袭转移作用与相关机制探讨

目的：观察茶叶的有效成分表没食子儿茶素没食子酸酯［(-)-epigallocatechin-3-gallate (EGCG)］对人乳腺癌高转移细胞侵袭转移的影响作用及探讨其相关机制。 方法： 用免疫细胞化学法检测MUC1的表达，以人工重组基底膜侵袭小室(Transwell)及明胶酶谱法(PAGE)观察其对人乳腺癌高转移细胞株MDA-MB-231细胞侵袭转移能力的影响。 结果： 茶叶有效成分EGCG能降低MDA-MB-231细胞MUC1表达，明显抑制MDA-MB-231细胞侵袭基底膜的能力和Ⅳ型胶原酶的产生。 结论： 茶叶有效成分EGCG具有明显的抗癌侵袭转移作用，此与降低MUC1的表达相关。     

大学生儿童期心理虐待经历与个性特征的关系

目的:了解大学生儿童期心理虐待和忽视状况及其与个性特征的关系。方法:应用儿童心理虐待与忽视量表和卡特尔16PF对216名大学生进行问卷调查。结果:①受试学生中心理虐待阳性者45人(20.83﹪);忽视阳性者88人(40.74﹪);不同性别的虐待和忽视阳性率均无统计学差异(P>0.05);②男生心理虐待总分均分、责骂均分、恐吓均分三项高于女生相应得分,差别具统计学意义(P<0.05);③虐待阳性组在乐群性、稳定性、兴奋性、有恒性、敢为性、自律性、内向与外向、感情用事与安详机警等多项个性因素上得分低于阴性组,在怀疑性、忧虑性、适应与焦虑三项上得分高于后者(P<0.05);④受试学生儿童期心理虐待和忽视与乐群性、稳定性、恃强性、兴奋性、有恒性、敢为性、自律性、内向与外向、感情用事与安详机警等人格因素呈负相关,与怀疑性、忧虑性、紧张性、适应与焦虑等个性因素呈正相关(P<0.05)。结论:①受试大学生儿童期心理虐待和忽视经历多见,男生儿童期心理虐待发生程度较女生重;②儿童期心理虐待和忽视与大学生外向乐观、开朗合群、情绪稳定等积极个性特征呈负相关,而与其多疑刚愎、抑郁自扰、对环境的适应能力不足等消极个性特征呈正相关。