血小板源生长因子对人血管成纤维细胞DNA及胶原蛋白合成的影响

目的:观察血小板源生长因子对培养的人血管成纤维细胞DNA及胶原蛋白合成的影响。方法:采用培养的人血管成纤维细胞,应用 [³H]-TdR和 [³H]-脯氨酸掺入的方法,观察血小板源生长因子-BB对人血管成纤维细胞DNA合成以及胶原蛋白合成的影响。结果:血小板源生长因子-BB可促进静止状态的人血管成纤维细胞DNA及胶原蛋白的合成,在 30μg/L浓度时DNA及胶原蛋白的合成达到高峰,DNA及胶原蛋白分别于 2 4h和 36h合成最为显著。结论:血小板源生长因子-BB可明显促进培养的人血管成纤维细胞DNA及胶原蛋白的合成     

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白抑制狼疮肾炎患者外周血单个核细胞B7分子表达及

目的探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白(CTLA-4Ig)对活动期狼疮肾炎(LN)患者外周血单个核细胞(PBMC)细胞表面B7-1(CD80)和B7-2(CD86)表达的影响及其对抗双链DNA(dsDNA)抗体和免疫球蛋白产生的影响。方法将18例活动期LN患者的抗凝血标本随机分为LN的CTLA-4Ig处理组(LN-T组9例)和普通培养组(LN-NC组9例)。另以14例正常人的抗凝血标本为对照,随机分为正常人的CTLA-4Ig处理组(NC-T组7例)和普通培养组(NC-NC组7例)。用密度梯度离心法分离PBMC。处理组加入CTLA-4Ig(10ng/L)、普通培养组加入等量普通培养基37℃孵育72h后,采用流式细胞仪技术检测PBMC细胞表面B7-1和B7-2分子的表达;ELISA法检测孵育液中抗dsDNA抗体、IgG及IgM水平。结果活动期LN患者CTLA-4Ig处理组与普通培养组比较,PB-MC表面B7-2分子表达明显下降(P<0.01);B7-1分子表达无显著变化(P>0.05);孵育液中抗dsD-NA抗体、IgG及IgM的生成均明显减少(P<0.01)。而正常人的两组间各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论CTLA-4Ig可抑制活动期LN患者的PBMC表面B7-2分子的表达,并可减少其抗dsDNA抗体、IgG及IgM的分泌。     

增殖细胞核抗原 siRNA 序列的设计、合成与筛选

目的：设计并筛选能有效抑制人肝癌SMMC-7721细胞、人结肠癌Caco2细胞、人胃癌SCG-7901细胞增殖的增殖细胞核抗原(PCNA) siRNA。方法:总结以往提出的siRNA 设计原则的基础上，设计4 条PCNA siRNA，体外转录合成PCNA siRNA；并作用于3 种肿瘤细胞，WST-8法检测细胞增殖活性，筛选能有效抑制肿瘤细胞增殖的siRNA序列；RT-PCR检测细胞PCNA mRNA水平；免疫细胞化学方法检测 PCNA 蛋白表达水平。结果:4 条PCNA siRNA中，有3 条序列（No.2、No.4、No.3）的siRNA能有效抑制3 种肿瘤细胞的增殖；其中No.2、No.4作用效果最优，以50 nmol/L浓度作用48 h，对3种肿瘤细胞的增殖抑制率均可达到62％以上，No.2、No.4 PCNA siRNA均能在mRNA和蛋白水平显著下调PCNA的表达。结论:PCNA siRNA能在体外有效抑制SMMC-7721细胞、Caco2细胞、SCG-7901细胞的增殖，其适宜作用浓度为50 nmol/L，适宜作用时间为48 h。     

人表皮细胞分离培养最佳条件的选择

目的 确定表皮细胞分离培养的最佳条件，为进一步将其作为皮肤组织工程种子细胞奠定基础。方法 采用组织块法培养表皮细胞；分别以胰蛋白酶和分散酶分离表皮细胞，有血清培养法和无血清培养法进行表皮细胞的培养，并以克隆形成试验检测细胞存活和生长情况。结果 （1）表皮细胞以分散分离可量在多数基底细胞，且成纤维细胞污染少，而胰蛋白酶得到的表皮细胞少，且混杂有大量的成纤维细胞。（2）组织块法可观察到表皮细胞生长，但成纤维细胞污染严重，且不易得到成片生长的表皮。（3）有血清培养法表皮细胞需在3T3细胞的滋养层上生长，存在3T3细胞污染的可能。（4）无血清培养方法简便易行，更有利于表皮细胞的生长。结论 采用无血清培养法培养表皮细胞条件的最终确定，为进行相关的研究，尤其是皮肤组织工程的研究奠定了基础。     

精神分裂症患者G72基因表达水平的研究

目的 本工作旨在检测精神分裂症（Schizophrenia）患者外周淋巴细胞中G72基因的表达情况，进而探讨G72基因的表达与精神分裂症的相关关系。 方法 工作在56例精神分裂症患者和84名年龄性别相匹配的对照中进行，在新鲜外周血样本中抽提总RNA，反转录成cDNA，基因表达量的检测在ABI Prism7900HT型序列监测系统上进行，采用TaqMan的方法对患者及对照组样本的mRNA进行定量，采集的荧光数据经SDS2.1软件自动处理，每个样本作三次平行检测，取平均值作为该样本的最终定量。数据应用SPSS统计软件进行处理，对组间基因表达水平的差异采用独立样本的T检验，调用本实验室G72基因单核苷酸多态性（SNPs）资料，用单因素方差分析的方法分析SNP与基因表达水平的关联性。结果 1.检测得到G72基因在对照组中的表达量为0.0586±0.0114amol/ng cDNA, 在精神分裂症患者组中的表达量为0.0498±0.0121amol/ng cDNA。2.经显著性检验， G72基因的表达水平在病例和对照组间差异无统计学意义，t=-0.512，df138，P=0.609，95%CI:-4.258~2.506。3.单因素方差分析结果显示，rs947267位置上的SNP与该基因的表达水平无相关，F=0.355，df2，χ2=0.703；而rs2181953位置上的SNP与G72基因表达水平相关联，F=6.275，df2，χ2=0.004。A/A基因型的患者基因表达水平显著高于其他基因型。结论：精神分裂症患者G72基因的表达量总体上较正常人并无显著变化，但rs2181953位置上的基因型会影响精神分裂症患者该基因的表达。     

Ad-14-3-3σ对不同辐射抗拒的鼻咽癌细胞微小RNA表达的影响

目的:在明确Ad-14-3-3σ对不同辐射抗拒鼻咽癌(nasopharygycarcinoma,NPC)细胞CNE-1和CNE-2治疗作用的基础上,检测Ad-14-3-3σ对CNE-1和CNE-2细胞中差异表达的微小RNA(microRNA,miRNA)的影响,探索CNE-1和CNE-2细胞中miRNA差异表达与NPC放射敏感性差异的关系.方法:用Ad-14-3-3σ转染CNE-1和CNE-2细胞;采用Paraflo microfluidic microRNA芯片检测,用激光扫描器收集杂交的图像,经LOWESS滤器规范信号后分析数据差异,根据Targetscan3.1数据库资料(http://www.targetsean.org)探索Ad-14-3-3σ对CNE-1和CNE-2中的miRNA差异表达的影响,预测其差异表达与NPC放射敏感性差异的关系.结果:Ad-14-3-3σ处理细胞以后,CNE-1与CNE-2相比较,有37个microRNA有明显差异,CNE-1中有17个上调,20个下调.其中倍数变化在3倍以上且2者检测量数量差异达到1000以上的有6个:hsa-miR-152、hsa-miR-205、hsa-miR-203、hsa-miR-7、hsa-miR-636和hsa-mjR-100.结论:Ad-14-3-3σ能够改变微小RNA(microRNA,miRNA)在CNE-1和CNE-2中的表达模式,缩小CNE-1和CNE-2之间miRNA的表达差异,而这些miRNA可能跟肿瘤的发生和放疗敏感性有关.     

甲酰肽受体家族受体与恶性肿瘤

甲酰肽受体家族受体包括甲酰肽受体（FPR）、类甲酰肽受体1和类甲酰肽受体2是主要表达在吞噬细胞表面的一类七次跨膜、G蛋白偶联受体。这些受体被相应的激动剂激活后，能活化吞噬细胞，引起细胞的趋化移动和炎症介质的释放等生物学效应，从而在天然免疫和炎症反应中发挥重要作用。近年来，人们发现甲酰肽受体家族受体也高表达于某些恶性肿瘤细胞的表面，且与这些肿瘤的发生、发展、转移以及治疗有着密切的关系，这无疑揭示了甲酰肽受体家族受体一个新的重要作用，值得深入研究和探讨。     

全脑全脊髓照射仰卧位CT模拟定位技术

目的：探讨全脑全脊髓照射仰卧位CT模拟定位技术。方法：7名患者分别躺在真空负压袋固定器上，进行CT模拟定位，打印正侧位数字重建射线彩像（DRR）图，放射治疗前拍摄正侧位定位验证片，测量解剖参考点和射野边界之间的距离。结果：患者左右方向及背腹方向误差在2mm以内。人体上下方向误差在4mm以内；放疗后，患者受照射的皮肤部位均出现色素沉着。结论：仰卧位全脑全脊髓照射CT模拟定位技术可用于俯卧位不合作的患者。     

氨氯地平抑制氧化型胆固醇诱导的血管内皮细胞凋亡

目的:研究氧化型胆固醇(Triol与25-OH)对人脐静脉内皮细胞凋亡的诱导作用,并观察氨氯地平对氧化型胆固醇诱导内皮细胞凋亡的影响。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,利用光镜、电镜、DNA电泳及流式细胞仪测定作为凋亡检测指标。结果:对照及胆固醇组未检测到细胞凋亡,Triol与25-OH处理组光镜、电镜下可见典型的细胞凋亡形态学改变,电泳示"DNAladder",流式细胞仪检测出现亚二倍体峰,凋亡率分别为32.25%与23.04%,而氨氯地平使其凋亡率分别下降至13.42%与11.77%。结论:氧化型胆固醇(Triol与25-OH)可以诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡,而氨氯地平抑制其凋亡诱导作用。     

IL-18、ICE在人卵巢癌组织中的表达

目的:分析卵巢癌组织中白细胞介素18(IL-18)及白细胞介素1β转化酶(ICE)的基因及蛋白表达水平,探讨其与卵巢癌临床特性之间的关系.方法:分别采用RT-PCR及免疫组化染色法检测正常卵巢(n=10)、卵巢良性肿瘤(n=6)、卵巢癌(n=32)组织中IL-18、ICE的mRNA及蛋白表达;分析卵巢癌不同病理类型、临床分期及发病年龄患者之间表达是否具有差异.结果:①正常、良性肿瘤及卵巢癌组织中均有IL-18 mRNA表达(分别为1.30±0.48、1.02±0.17、0.77±0.35);ICE mRNA在正常及良性肿瘤组织中均有表达,卵巢癌组织中有29例(90.63%)表达(分别为0.96±0.51、0.73±0.34、0.63±0.34).②IL-18及ICE蛋白均表达于卵巢上皮细胞浆内.正常、良性肿瘤及卵巢癌组织的IL-18阳性表达率分别为83.3%、80.0%和31.3%;ICE阳性表达率分别为80.0%、50.0%和37.5%.③卵巢癌组织中IL-18、ICE mRNA及蛋白表达均较正常及良性肿瘤组织明显减少(均P＜0.05),良性与正常组织之间相比差异均无显著性(均P＞0.05).卵巢癌组织中IL-18与ICE的mRNA、蛋白表达之间呈显著正相关(分别为r=0.37,P=0.036;r=0.45,P=0.009).④IL-18、ICE mRNA及蛋白表达在不同病理类型、临床分期及发病年龄患者之间均未见显著性差异(均P＞0.05).结论:卵巢癌患者局部癌组织IL-18、ICE表达减弱,可能与卵巢癌的发生发展有着一定的关系.