淡色库蚊(Culex pipiens Pallens)与击倒抗性(kdr)相关的钠通道基因突变

本研究采用RT-PCR技术,使用简并引物分别从淡色库蚊(Culex pipiens pallens)敏感品系和抗溴氰菊酯品系中扩增出钠通道ⅡS4～ⅡS6区域的基因片段,长度为359bp.该基因片段所编码的氨基酸与黑尾果蝇(Drosophila melanogaster)、家蝇(Musca domestica)、埃及伊蚊(Aedes aegypti)、冈比亚按蚊(Anopheles gambiae)及德国小蠊(Blattella germanica)等昆虫相应区域的氨基酸序列具有较高的同源性,其同源性分别为95.8%,95.0%,100.0%,98.3%和95.0%.经序列比对,确认抗溴氰菊酯品系淡色库蚊钠通道基因在1014位点发生了突变该位点的碱基"A"突变为"T",其对应氨基酸由亮氨酸(L)变为苯丙氨酸(F),该突变(L1014F型)在多种昆虫中较为常见.     

趋化性细胞因子受体在Tc1和Tc2亚群的差异表达

目的研究趋化性细胞因子受体在体外长期培养的人Te1和Tc2细胞系中的表达。方法将新鲜分离的PBMC在特定细胞因子及细胞因子抗体存在条件下，定向诱导为Ⅰ型和Ⅱ型T细胞系，用免疫荧光染色结合流式细胞术分析鉴定，并以膜表面及胞内三色流式细胞术检测趋化性细胞因子受体在不同T细胞亚群的表达。结果①在Ⅰ型和Ⅱ型T细胞整体水平上，CXCR4的表达水平接近，CXCR3和CCR5的表达在Ⅰ型T细胞明显高于Ⅱ型T细胞，CCR3在2种T细胞系的表达水平均较低，但在Ⅱ型T细胞的表达略高于Ⅰ型T细胞；②趋化性细胞因子受体在Tc1和Tc2亚群细胞的表达与上述结果类似，即CXCR的表达水平接近，CXCR3和CCR5的表达在Tc1高于Tc2，CCR3的表达水平较低，但在Tc2则略高于Tc1。结论趋化性细胞因子受体在Tc1和Tc2亚群的表达具有差异性。     

髂静脉不完全阻塞的彩色多普勒超声诊断及漏诊原因分析

目的 探讨彩色多普勒超声诊断髂静脉（髂总或髂外静脉）不完全阻塞的声像图特征及漏诊原因。方法 采用彩色多普勒超声对109例112条髂静脉不完全阻塞患者的盆腔组织、髂静脉及整个下肢静脉行二维、彩色多普勒及脉冲多普勒扫查，观察血管结构、彩色血流充盈情况、血流速度及频谱形态，其结果与CT、MRI或静脉顺行X线造影检查进行对比分析。结果 112条髂静脉不完全阻塞患肢中第1次彩色多普勒检查准确提示仅70条，漏诊42条。对漏诊病例进行第2次超声复查后作出髂静脉不完全阻塞诊断。髂静脉不完全阻塞的声像图特征主要有血管不容易压瘪、彩色血流束呈充盈缺损或变窄、下肢深静脉血流缓慢及血流频谱呈持续流动的平直带状。漏诊原因是对下肢静脉探查不全，对提示髂静脉狭窄的股静脉或胭静脉血流缓慢、频谱形态平直等征象认识不足。结论 进一步认识髂静脉不完全阻塞的一系列声像图表现，可以提高彩色多普勒超声诊断髂静脉不全阻塞的准确性及减少漏诊。     

多巴酚丁胺-美托洛尔负荷超声心动图检测心肌缺血的实验研究

目的通过定量组织速度成像(QTVI)技术分析多巴酚丁胺-美托洛尔负荷超声心动图(DMSE)在心肌缺血检测中的价值及机制.方法采用Ameroid环套扎冠状动脉左回旋支建立22只小型猪慢性心肌缺血模型,于造模术前行常规超声心动图及DMSE检查,术后3周复查DMSE,并与冠状动脉造影(CAG)及放射性核素心肌灌注条件下行单电子发射计算机断层摄影(SPECT)检查结果进行比较,确定缺血节段;计算DMSE检查中多巴酚丁胺及美托洛尔各剂量级别的室壁运动计分指数(WMSI),采用QTVI测定各剂量级别缺血节段心内膜及心外膜下心肌收缩期峰速度(Vs-end、Vs-epi),并计算心肌速度梯度(MVG).结果19只模型猪存活并完成各项检测,造模后12只实验猪DSE阳性,15只实验猪DMSE阳性.造模前Vs-end、Vs-epi、MVG均随多巴酚丁胺剂量的增大而升高(P＜0.05),并在美托洛尔静脉注射后下降(P＜0.05);造模后Vs-end、MVG随多巴酚丁胺剂量的增大及美托洛尔的注射无明显改变,而Vs-epi在达负荷心率时明显高于基础状态(P＜0.05),并在美托洛尔静脉注射后降低(P＜0.05).结论DMSE可提高DSE对冠心病检测的敏感性,其机理在于美托洛尔静脉注射后能快速阻断β受体,缓解心外高动力状态,从而有利于揭示多巴酚丁胺诱导的局限于心内膜下的心肌缺血.     

捕获噬菌体酶联免疫吸附法筛选抗去唾液酸糖蛋白受体单链抗体的价值

目的评价捕获噬菌体酶免疫吸附试验法(ELISA)在筛选抗去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)单链抗体(scFv)中的价值。方法以含ASGPR基因的质粒(CRDH1/pET3b)为模板,通过聚合酶链反应扩增获得ASGPRH1亚单位糖识别区基因(CRDH1),定向克隆至原核表达载体pET-32c,并经IPTG诱导表达,其表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化;然后,采用捕获噬菌体ELISA对人源噬菌体抗体库进行筛选和鉴定,同时对筛选的抗CRDH1单链抗体进行DNA测序、表达、纯化和免疫印记鉴定。然后,与间接噬菌体ELISA比较。结果CRDH1/pET-32c在原核系统中经诱导表达出分子量约35000的融合蛋白,且以包涵体形式存在;通过Ni2+亲和柱纯化获得CRDH1融合蛋白后,采用捕获噬菌体ELISA进行四轮筛选,在60个噬菌体克隆中有45株与CRDH1特异性结合,其中仅1株与重组蛋白标签有交叉结合反应。DNA序列分析表明,有9株DNA序列各异,9株可分泌性表达与CRDH1特异性结合的scFv,纯化的scFv也可特异性识别rCRDH1。计算该筛选方法的假阳性率为2%,低于间接噬菌体ELISA筛选的假阳性率(58%)。结论捕获噬菌体ELISA筛选CRDH1特异性scFv可有效降低硫氧还蛋白标签(Trx·Tag)引起的假阳性,提高筛选阳性率,并成功筛选出9株具有rCRDH1特异性的scFv。     

黄曲霉毒素B1诱发树鼩肝癌过程中的差异表达蛋白质分析及意义

目的比较黄曲霉毒素B1(AFB1)诱发的树鼩肝细胞癌生长不同阶段的蛋白质表达谱的改变,筛查在AFB1诱发的肝癌发生发展中起重要作用的关键蛋白质分子.方法用双向电泳(2-DE)及基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱法(MALDI-TOF-MS/MS)对同一动物自身的癌发生前肝组织(A45W),癌发生后的肝癌组织(ACa)及未经AFB1处理的对照组动物肝组织(E45W)进行了相互比较.结果A45W组、ACa组、E45W组分别平均检测到(1 255±43)个蛋白点(n=3)、(1 198±50)个蛋白点(n=3),和(1 252±40)个蛋白点(n=3),以其中A45W组图谱为参考胶,ACa组、E45W组分别与其匹配的平均匹配点数为(818±39)个(n=3)和(777±45)个(n=3),平均匹配率分别为66%和62%.癌与癌前比(ACa vs A45W),相差2倍以上的上调点和下调点分别为108个(包括癌特异点)和75个;癌前与未经AFB1处理的对照组比(A45W vs E45W),相差2倍以上的上调点有78个,下调点有21个.质谱可鉴定出不均一核糖核蛋白A1、不均一核糖核酸核蛋白A2/B1、peroxiredoxin 1、peroxiredoxin 2、膜联蛋白4、肌球蛋白α链等26种胶内差异蛋白质.结论在AFB1诱发的树鼩肝癌发生不同阶段有明显的差异性蛋白表达谱,为进一步对人肝癌蛋白质组的研究提供了线索.     

心肌特异表达基因p93在四种心血管疾病中血清水平的差异及其意义

目的研究心肌特异表达的新激酶基因p93在冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)、扩张性心肌病(DCM)、先天性心脏病(CHD)和风湿性心脏病(RHD)中的作用。方法以杂交瘤技术制备p93单克隆抗体;应用酶联免疫吸附测定(ELISA)直接法检测正常人与上述4种疾病患者血清中p93的表达状况及血清浓度的差异。结果成功制备了人p93单克隆抗体,效价达1:100 000;正常人及CAD、DCM、CHD、RHD患者血清中均有p93的表达;正常人血清水平对数值为2．32±0．19;4种疾病患者的p93血清水平(对数值分别为2．46±0．22,2．47±0．20,2．58±0．26,2．49±0．19)均高于正常人(P<0．05)。其中CHD组明显高于正常对照组及CAD组(P<0．05)。结论p93基因与这4种疾病均有密切关系,以CHD尤为突出。推测该基因可能在上述各疾病的发生、发展过程中起着重要作用,但其机制亟待进一步探讨。     

CIK在无血清培养体系中的增殖、表型变化和抗肿瘤活性

目的:探索细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)在无血清体系中的增殖规律、表型变化及其抗瘤活性。方法:不同培养基培养CIK细胞,采用活细胞计数法观察CIK细胞的增殖,流式细胞仪检测CIK细胞的表型,CytoTox96非放射性细胞毒试剂盒检测CIK细胞的细胞毒活性。结果:经过细胞因子和抗体刺激后,CIK细胞能明显增殖,无血清培养基加自体血浆组最高可扩增473.28±27.53倍,无血清培养基组可扩增218.24±16.86倍,而RPMI1640加FCS只扩增11.52±1.04倍。CD3 CD8 、CD3 CD56 、CD226 CD11a 和CD305 CD11a 细胞随着培养时间的延长而增加,而CD3 CD4 细胞则明显减少。CIK细胞对肿瘤细胞的细胞毒作用明显高于LAK细胞(P<0.01),且其细胞毒活性随着培养时间的延长而增高。结论:CIK细胞在体外扩增能力强,对肿瘤细胞的杀伤活性高,有望成为新一代抗肿瘤过继免疫细胞制剂而应用于临床。     

老年冠心病患者踝臂指数和心脏结构与功能的相关分析

目的探讨老年冠心病患者踝臂指数(ABI)和心脏结构与功能的相关性。方法87例老年冠心病患者,按ABI分组,A组ABI≤0.9,B组ABI>0.9,同时测量2组的心脏结构指标:左心房直径(LAD)、左心室舒张期直径(LVDD)、左心室后壁厚度(LVPW)。左室收缩功能指标:左室缩短率(FS)、左室射血分数(EF)。左室舒张功能指标:EF斜率。结果A、B2组比较,年龄、血脂、血糖、肝功能、肾功能、LAD、LVDD、LVPW和EF斜率均无显著性差异。FS和EF均有显著性差异,A组较B组明显降低(P<0.05)。结论ABI与老年冠心病患者的心脏功能有较好的相关性,对其预后的判定有一定的价值。     

华支睾吸虫成虫14～33 ku抗原诊断价值的研究

目的探讨纯化华支睾吸虫成虫14~33 ku抗原在华支睾吸虫病免疫诊断中的应用价值。方法使用SDS-PAGE和电洗提法,从可溶性华支睾吸虫成虫抗原中分离纯化14~33 ku抗原,用此抗原经ELISA方法检测华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、日本血吸虫病、姜片虫病患者血清及健康人血清特异性IgG抗体,并与粗制可溶性成虫抗原和可溶性成虫脱脂抗原ELISA结果相比较。结果检测63例华支睾吸虫病患者血清,纯化华支睾吸虫成虫14~33 ku抗原ELISA阳性率为76.2%,可溶性成虫抗原和可溶性成虫脱脂抗原ELISA阳性率均为100%;检测25例卫氏并殖吸虫病、85例日本血吸虫病、27例姜片虫病患者血清,14~33 ku抗原的ELISA交叉反应阳性率分别为8.0%、3.5%、0,而可溶性成虫抗原分别为80.0%、62.4%、14.8%,可溶性成虫脱脂抗原分别为64.0%、55.3%、7.4%;检测127例健康人血清,14~33 ku抗原的ELISA假阳性率为0,可溶性成虫抗原和可溶性成虫脱脂抗原的假阳性率分别为5.5%、3.1%。结论纯化华支睾吸虫成虫14~33 ku抗原用于华支睾吸虫病免疫诊断的特异性优于粗抗原,但敏感性较低。