小鼠生精细胞特异表达载体AAV-Dazl-RFP-Flag的构建及表达验证

目的构建含有生精细胞特异启动子Dazl的真核报告基因表达载体AAV-Dazl-RFP-Flag,研究生精细胞特异启动子Dazl在生精细胞中的启动效果。方法通过同源重组的方法对腺相关病毒载体AAV-CMV-RFP-Flag进行改造,构建小鼠生精细胞特异表达载体AAV-Dazl-RFP-Flag。在体外,转染GC1-spg野生型细胞和HEK-293T细胞,通过免疫荧光、q-PCR、Western blot验证AAV-Dazl-RFP-Flag在体外的表达特异性。在体内,将AAV-Dazl-RFP-Flag进行腺相关病毒(AAV)包装,通过显微注射技术将AAV注射到小鼠睾丸内,通过q-PCR检测AAV-Dazl-RFP-Flag在体内的表达特异性。结果成功构建了AAV-Dazl-RFP-Flag表达载体,并在体内、外水平验证了AAV-Dazl-RFP-Flag的表达。结论小鼠生精细胞特异表达载体AAV-Dazl-RFP-Flag可以在生精细胞中特异性表达,为雄性生殖不育的基因治疗提供更高效的载体工具。     

Isolation of Nanjing local strains of HHV-7 and their biological and immunological characteristics

To investigate the biological and immunological characteristics of the Nanjing local strains of HHV-7,fourstrains of herpesvirus were isolated from saliva specimens of one healthy individual and three childrensuffering from a kidney disease in Nanjing.The viruses were identified by transmission electron microscopy(EM),indirect immunofluorescence assay(IFA) with a specific monoclonal antibody;nested polymerase chainreaction,restriction mapping and DNA sequencing.The virus-infected cells showed the typical cytophathiceffect(CPE) under microscopy and could be detected by IFA with the human herpesvirus-7(HHV-7) specificantibody.Under EM,herpesvirus-like and virions capsids could be found in their cytoplasm or nucleoplasm.HHV-7 DNA fragments amplified from infected cells by nested PCR were confirmed by restriction mappingand DNA sequencing.Similarly to DC strain,an known HHV-7 strain used in the present study as the positivecontrol,the virus could be inactivated by ultraviolet irradiation for 10 min,heated at 45℃ for 30 min,pH<5or>9 at 4℃ for 2 h and ether or chloroform for 10 h.The virus induced the production of TNF-α,IL-10 andIL-12p70 while inhibited IFN-γ secretion,increased the percentage of CD2~+ cells while decreased that of CD4~+or CD45RA~+ cells.The results indicate that the viruses isolated in Nanjing are HHV-7,which has similarbiological characteristic to the known HHV-7 strain,DC.Infection with HHV-7 in vitro could affect immunefunction of lymphocytes by disturbing cytokine production and CD antigen expression.Cellular & MolecularImmunology.2004;1(5):367-372.     

无蹼壁虎半阴茎组织学研究

目的 :无蹼壁虎半阴茎形态学特征及意义 ;方法 :用光镜组织学及组织化学对无蹼壁虎半阴茎进行研究 ;结果 :研究发现半阴茎短且分叉 ,具以下几个特点 :①前方有舌状突起及小刺状结构 ;②有开放精沟 ,ALP(碱性磷酸酶 )反应阳性 ;③半阴茎后 1 /3具明显的海绵组织 ;④后方借纵形牵引肌与肛后囊相连。结论 :无蹼壁虎半阴茎与其他爬行动物的有一定的差异性 ,这是与它的生活习性及系统演化上所出的位置是相适用的。     

Acupoint-specific fMRI patterns in human brain

Specific central nervous system (CNS) responses to acupuncture have recently attracted attention. It is important to understand the differences in fMRI images of the brain evoked by acupuncture at an acupoint and at a nearby "sham" point. Here, we report analyses of fMRI images of the brains of 37 healthy volunteers in response to acupuncture at Liv3 (Taichong) and LI4 (Hegu) versus their sham points. We found common activation areas in response to Liv3 or LI4 acupuncture in the middle temporal gyrus and cerebellum, along with deactivation areas in the middle frontal gyrus and inferior parietal lobule, compared with the effects of acupuncture at sham points. Acupuncture at Liv3 evoked specific activation at the postcentral gyrus, posterior cingulate, parahippocampal gyrus, BA 7, 19 and 41, but deactivation at the inferior frontal gyrus, anterior cingulate, BA 17 and 18, compared with acupuncture at its sham point. Acupuncture at LI4 evoked specific activation at the temporal pole, but deactivation at the precentral gyrus, superior temporal gyrus, pulvinar and BA 8, 9 and 45, compared with acupuncture at its sham point. These observations reveal that acupuncture at acupoints induces specific patterns of brain activity, and these patterns may relate to the therapeutic effects of acupuncture.     

bFGF、FGF受体I在HEp-2喉癌和MGE803胃癌细胞株中表达的检测

目的　通过对碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF) ,成纤维细胞生长因子受体 1(fibroblastgrowthfactorreceptor 1,FGFR 1)的检测 ,揭示两者在体内外的表达以及与肿瘤形成的关系。　方法　采用免疫组织化学的检测方法 ,检测了体外培养的HEP 2喉癌细胞和MGE80 3胃癌细胞以及由两者在裸鼠皮下形成的实体瘤组织中bFGF和FGFR 1的表达情况。　结果　在体外培养的这两种肿瘤细胞中bFGF的阳性染色存在于整个细胞。FGFR 1的染色主要存在于细胞核。在两种肿瘤细胞形成的实体瘤组织中bFGF和FGFR 1阳性染色细胞主要是围绕于坏死区的肿瘤细胞。　结论　此两种肿瘤细胞在体内外均能表达bFGF和FGFR 1。bFGF与其高亲和力受体FGFR 1结合后进入细胞核 ,并在细胞核内发挥其生物功能 ,参与了肿瘤组织的形成和发展。     

胎盘部位过度反应及胎盘部位结节的临床病理分析

目的探讨胎盘部位过度反应及胎盘部位结节的临床病理学特征以及免疫组织化学染色在鉴别诊断中的意义。方法对15例胎盘部位过度反应及4例胎盘部位结节的临床及病理表现进行回顾性研究,并应用人绒毛膜促性腺激素(hCG)、人胎盘催乳素(hPL)、细胞角蛋白(CK)18、胎盘碱性磷酸酶(PLAP)、α-抑制素(inhibin),进行免疫组织化学染色。结果15例胎盘部位过度反应患者的年龄为25～40岁(平均31．5岁),4例胎盘部位结节患者年龄为26～39岁(平均34．3岁)。15例胎盘部位过度反应的组织学特征为：在子宫内膜、子宫肌层及螺旋动脉中有索条状及片状种植部位中间滋养细胞浸润,子宫内膜及肌层的结构没有破坏。4例胎盘部位结节在子宫内膜组织及变性坏死的绒毛间有多个以致密的嗜酸性玻璃样物质为背景的结节性病变,结节内为绒毛膜型中间滋养细胞。15例胎盘部位过度反应对hPL及CK18均呈阳性反应;4例胎盘部位结节均对CK18、α-抑制素及PLAP均呈阳性反应。所有15例胎盘部位过度反应Ki-67增生指数均≤5％。4例胎盘部位结节Ki-67增生指数均为0。结论胎盘部位过度反应及胎盘部位结节的临床及病理形态学特征不同于滋养细胞肿瘤。免疫组织化学染色对鉴别诊断有帮助。     

尖锐湿疣皮损中朗格汉斯细胞的变化

目的了解尖锐湿疣(CA)皮损中朗格汉斯细胞(LC)的变化。方法采用免疫组化法对34例CA皮损进行LC染色,光镜下观察其形态和数量变化,并对其中6例标本行电镜观察。结果与正常皮肤相比,CA皮损表皮内LC分布不规则,少见典型的树突状细胞,细胞突明显减少、缩短或消失,半定量计数显示CA皮损中LC为(13.15±9.42)个,较正常明显降低(P<0.01)。超微结构表明LC中的特征性结构———朗格汉颗粒(LG)不仅数目减少,而且形态也不典型。结论CA皮损中LC形态及数量均发生变化,可能在CA的发病中起着一定作用。     

肱桡肌皮瓣的应用解剖学研究

通过尸体解剖,观察了64侧肱桡肌的形态及其主要供血血管——桡侧返动脉的来源、起始部位、主干长度、外径、行经及分支分布。通过动脉内墨汁注射,观察了桡侧返动脉在肱桡肌皮瓣的皮肤供血范围。认为可以桡侧返动脉为蒂的肱桡肌皮瓣转移复盖肘关节的暴露伤及邻近的软组织缺损。也可制成带蒂的肌皮瓣作游离移植。文内讨论了该瓣的优缺点及转移复盖的范围。     

聚焦超声对卵巢癌细胞株COC1细胞凋亡和Bcl-2/bax基因表达的影响

目的:研究低频脉冲的聚焦超声对人卵巢癌细胞株COC1的抗肿瘤作用,并探讨其诱导细胞凋亡的分子机制.方法:以低频脉冲聚焦超声(超声频率0.8 MHz,声强83.6 W/cm2,脉冲持续时间50μs)辐照卵巢癌COC1细胞10秒,采用MTT法观察超声对COC1细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪(FCM)、TUNEL法、荧光染色和光、电镜检测细胞凋亡;应用FCM免疫荧光技术观察Bcl-2、bax基因蛋白表达的变化.结果:低频脉冲聚焦超声可明显抑制存活卵巢癌COC1细胞株的增殖,辐照后12 h、24 h、36 h和48 h,COC1细胞MTT光吸收值与对照组相比显著降低;FCM检测超声辐照后6 h的COC1细胞凋亡率达(23.57±4.62)%;Bcl-2蛋白的荧光指数(FI)降低,而bax蛋白FI升高.同时TUNEL法观察到棕褐色着染的凋亡细胞;荧光显微镜和电镜下观察到凋亡小体形成等典型的形态学改变.结论:低频脉冲聚焦超声辐照对人卵巢癌细胞株COC1具有细胞毒作用,其机制为诱导辐照后存活的人卵巢癌细胞株COC1凋亡,bcl-2和bax蛋白可能参与了COC1细胞凋亡过程.     

低血流心肌缺血诱导GLUT4基因表达

目的：探讨低血流心肌缺血促进葡萄糖摄取增加的机制。方法：采用Northrn印迹法观察缺血心肌葡萄转运子4（GLUT4）mRNA的表达,并利用蛋白质印迹法分析心肌GLUT4多肽的表达,结果：局部心肌低血流缺血后,心肌GLUT4mRNA和GLUT4多肽表达明显增加;同时伴随缺血心肌葡萄糖摄取明显增多。结论：心肌缺血能刺激GLUT4 mRNA和GLUT4多肽表达,使GLUT4数增加,进而促进心肌葡萄糖摄取增多,使缺血心肌能量需求得以平衡,有助于缺血心肌功能的恢复,提示低血流缺 刺激心肌GLUT4表达是一个重要的代偿性保护机制。