人骨膜细胞体外成骨分化的基因表达和功能检测

目的 探讨并鉴定骨膜细胞经骨形成蛋白7(BMP7)诱导分化为成骨细胞的基因表达和细胞功能.方法 成人胫骨骨膜常规体外细胞培养法,分实验组和对照组,分别加入BMP7加成骨辅助剂和单纯成骨辅助剂进行体外培养.CCK-8法检测细胞增殖活性,第5、10、15和20天分别采用Real Time-PCR检测骨钙素基因表达,ELISA法检测上清液碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)及骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的水平,甲苯胺蓝染色检测糖胺聚糖(GAG),Real Time-PCR检测Ⅱ型胶原基因,比色法检测细胞ALP活性,ALP染色法检测ALP,Yon Kossa染色法检测钙结节.结果 两组骨钙素基因表达及上清液ALP、骨钙素、骨桥蛋白的含量均增高,实验组与对照组差异有统计学意义(P＜0.05).两组细胞的ALP和钙结节染色阳性率增高,实验组与对照组差异有统计学意义(P＜0.05).甲苯胺蓝染色阳性率及Ⅱ型胶原基因表达表现为先高后低,实验组与对照组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 骨膜细胞在BMP7诱导下体外大量增殖和分化成骨,表达出明显的成骨特异基因,并具有合成分泌成骨特异蛋白的功能;成骨化过程中,除直接分化成骨外,还存在部分细胞先经软骨形成再钙化成骨的现象;经骨膜细胞-BMP7途径在体外获取大量成骨细胞可用于组织工程的体外构骨及临床应用.     

窦汉卿针灸学术思想探源

通过分析《卫生宝鉴》《济生拔粹》及《针灸四书·针经指南》书中与“真言补泻手法”和“气血问答”两篇有关的内容，探讨窦汉卿针灸学术思想之源流，认为窦氏针灸学术思想受《素问》《难经》影响较多，但似未受到《灵枢》影响。     

Adenovirus-Mediated Herpes Simplex Virus Thymidine Kinase Gene Transfer Driver by KDR Promoter in Treatment of Experimental Human Hepatocel-Lular Carcinoma in Nude Mice

Objective To investigate the therapeutic efficacy of adenovirus-mediated herpes simplex virus thymidine kinase (HSV-tk) gene transfer under the driving of KDR promoter (AdKDR-tk) in combination of ganciclovir (GCV) against human hepatocellular carcinoma in nude mice. Methods HepG2 cell line was implanted subcutaneously into 32 nude mice, which were subsequently divided into 4 groups (n=8 each group) Ganciclovir group (Ⅰ), Ad group (Ⅱ), AdCMV-tk/GCV group (under the driving of CMV promoter) (Ⅲ) and AdKDR-tk/GCV group (Ⅳ). Then intratumoral injection of recombinant adenovirus or Ad was performed in all nude mice, and repeated 24 h later. For the following 10 d GCV was given at a dose of 100 mg/(kg·d), ip. All the treated animals were killed to evaluate the tumor weight and the histopathological changes and the microvessel density of tumors after the treatment was determined. Results Compared with group Ⅰ, the tumor inhibitory rate was 12.3% in group Ⅲ and 24.5% in group Ⅳ; the inhibition rates were significantly different between group Ⅲ and Ⅳ (P＜0.05). The mean MVDs in group Ⅰ, Ⅱ, Ⅲand Ⅳ were 37.4±8.6, 30.6±7.8, 27.6±7.1, and 10.7±4.1 (microvessels/mm2), respectively. Significant differences were found between group Ⅲ and Ⅱ (P＜0.05), Ⅳ and Ⅱ (P＜0.01), and Ⅳ and Ⅲ (P＜0.01). Conclusion Intratumoral injection of AdKDR-tk results in marked inhibition of HCC growth through inhibition angiogenesis in nude mice. It may be a new treatment approach for human HCC.     

肺瘤平Ⅱ号对Lewis肺癌小鼠瘤细胞CD44V6及CD49表达的影响*

目的:研究中药复方制剂肺瘤平Ⅱ号对Lewis肺癌小鼠移植瘤细胞CD44V6及CD49表达的影响,探讨肺瘤平Ⅱ号抗肿瘤的作用机制。方法:60只C57BL/6近交系小鼠右腋皮下接种Lewis瘤细胞悬液0.2 mL,随机分为生理氯化钠溶液对照组、环磷酰胺(CTX,60 mg.kg-1,ip)组、榄香烯组(65 mg.kg-1,ip,qd)、参一胶囊组(5 mg.kg-1,ig,qd)、肺瘤平Ⅱ号高、低剂量组(10,2.5 g.kg-1,ig,qd),每组10只。实验d 2开始给药,除CTX组给药1 d外,其余各组均给药12 d。实验d14以流式细胞仪检测各组小鼠移植瘤组织中瘤细胞CD44V6及CD49的表达。结果:与生理氯化钠溶液对照组比较,肺瘤平Ⅱ号高、低剂量组瘤细胞中CD44V6和CD49表达均显著降低(CD44V6:12.04±2.05 vs.8.44±1.57,8.23±2.05;CD49:59.07±7.78 vs.46.96±2.63,51.81±6.54;P<0.05或P<0.01)。结论:肺瘤平Ⅱ号通过抑制肿瘤细胞CD44V6和CD49的表达,可能是其抗肿瘤作用机制之一。     

同种异体肾移植患者B型钠尿肽水平的临床观察

目的：探讨同种异体肾移植患者和发生急性排斥反应时血浆B型钠尿肽（BNP）水平及其临床意义。方法：采用免疫夹心化学发光法检测17例首次肾移植患者术前1d、术后第1天、第2天、第3天、1周、2周和3个月血BNP浓度。17例健康体检者作对照。结果：肾移植患者术前1d血BNP浓度显著高于健康对照组（P〈0．01）。肾移植术后血BNP浓度呈下降趋势（χ^2=14．25，P=0．027）。13例没有发生急性排斥反应的患者血BNP浓度术后1周和3个月与肾移植术前比较差异有显著性（P〈0．05）；4例发生急性排斥反应患者，发生急性排斥反应当天的血BNP浓度显著增高，加强抗排斥治疗后很快下降。结论：肾移植成功后可以降低血BNP水平，但发生急性排斥反应时血BNP浓度显著增高。因此，血BNP浓度可作为早期诊断移植肾急性排斥反应发生的敏感指标。     

大鼠胰岛与生长因子共微囊提高囊内胰岛存活率

目的 探讨微胶囊胰岛皮下移植治疗化学性糖尿病小鼠和生长因子(growth factor,GF)与大鼠胰岛共微囊对提高囊内胰岛存活率的作用.方法 选取C57BL/6雄性小鼠皮下预血管化糖尿病模型25只,行微胶囊大鼠胰岛皮下移植.随机分为5组,每组5只.①A组:GF与大鼠胰岛共微囊移植组;②B组:微胶囊大鼠胰岛移植组;③C组:GF微囊移植组;④D组:大鼠胰岛移植组;⑤E组:空囊移植组.观察受体小鼠的血糖和体重变化,移植后8周比较微胶囊内胰岛存活数.结果 移植后1周至移植后3周A组与B组间血糖均有非常显著差异(P＜0.01),移植后4周至移植后8周A组与B组间血糖无显著差异(P＞0.05),移植后1周至移植后4周B组与C组间血糖均有非常显著差异(P＜0.01).C组血糖异常升高,移植4周后小鼠陆续死亡.D组和E组移植无效.A组和B组间各实验点小鼠体重均无显著差异(P＞0.05),A组小鼠体重成模时下降,移植2周后开始上升.A组和B组胰岛存活数有非常显著差异(F=36.84,P＜0.01).结论 GF与大鼠胰岛共微胶囊移植,GF可促进胰岛的细胞增殖和再生,显著提高囊内胰岛的存活率.     

超声波诱导人肝癌多药耐药细胞株HepG2/ADM凋亡的实验研究

【目的】探讨治疗超声对人肝癌多药耐药细胞株HepG2/ADM凋亡的影响及其可能机制。【方法】研究对象分为4组,分别为对照组、阿霉素组、超声波组(10 min)、阿霉素 超声波组。以频率为800 KHz,声强为3.0 W/cm2,时间10 min的脉冲式超声波作用于细胞。荧光显微镜观察细胞形态变化;DNA片段化分析检测染色体断裂情况;原位末端标记(TUNEL)和流式细胞仪检测细胞凋亡。【结果】经超声波作用10 min后,HepG2/ADM细胞死亡具有细胞凋亡的形态学特征;阿霉素组和超声波组(10 min)细胞凋亡的比例明显高于对照组;阿霉素 超声波联合治疗显著增加细胞凋亡率,为30.1%。【结论】治疗超声照射10 min可诱导HepG2/ADM人肝癌细胞株凋亡,联合阿霉素治疗,可显著增加细胞凋亡比例。     

颅内动脉瘤与细胞外基质

颅内动脉瘤是一种由多种环境因素和多个基因共同作用的多基因疾病。近年来，对颅内动脉瘤相关致病基因的研究逐渐被人们所重视并获得了深入研究。细胞外基质的破裂很可能是颅内动脉瘤形成中的一种病理生理学表现，与遗传缺陷的组织和细胞外基质相关联。在许多破裂的颅内动脉瘤动脉壁的细胞外基质中，已经证实了结构蛋白的减少。     

β转化生长因子及其受体在增生性瘢痕退行性变过程中的表达

目的 探讨增生性瘢痕退行性变过程中不同时期哌β转化生长因子(transforming growth factorβ,TGF-β)及其受体(transforming growth factor β receptor,TGF-β-R)的表达变化规律和意义.方法 对8例烧伤后增生性瘢痕患者退行性变过程中的增生活跃期和成熟稳定期的瘢痕组织进行免疫组织化学,观察增生性瘢痕退行性变过程中TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3及TGF-β-R Ⅰ、TGF-β-RⅡ的表达.结果 免疫组织化学显示,增生活跃期的增生性瘢痕组织以TGF-βl、TGF-β2和TGF-β-R Ⅰ阳性表达为主,TGF-β3和TGF-β-RⅡ仅见弱阳性表达;成熟稳定期的增生性瘢痕中TGF-β3和TGF-β-RⅡ的表达强度明显强于增生活跃期,而TGF-B1、TGF-β2和TGF-β-RⅠ的表达强度为弱阳性或阴性.结论 TGF-β及其受体不同水平的表达与增生性瘢痕从增生活跃至成熟稳定的退行性过程密切相关.     

神经阻滞配合针刀松解治疗脊神经后支卡压所致腰腿痛

目的　探讨脊神经后支卡压所致腰腿痛的致病因素及治疗方式。方法　采用神经阻滞配合针刀松解治疗 30例并与对照组物理疗法 30例比较。结果　治疗组痊愈率 80 % ,总有效率 96 .6 % ;对照组痊愈率36 .6 % ,总有效率 73.3%。治疗组痊愈率明显高于对照组 (P <0 .0 1)。结论　神经阻滞配合针刀松解治疗脊神经后支卡压所致腰腿痛优于物理疗法。