人血管抑素A K(1-3)基因的克隆表达、纯化及活性鉴定

目的 克隆人Angiostatin K(1-3)基因,获得有活性的重组人血管抑素蛋白,为进一步开发应用奠定基础.方法 以人新鲜肝脏组织为材料,通过RT-PCR得到人Angiustatin基因的AK(1-3)片段.构建重组质粒pET30a-Angiostatin,转化表达菌Rosetta(DE3),对转化子进行诱导表达,利用Ni-NTA亲和层析纯化目的 产物,并验证其活性.结果 获得了人Angiostatin基因AK(1-3)片段的正确序列,表达和纯化了人血管抑素蛋白,表达量占菌体总蛋白的30%,纯化后证明表达产物具有较高纯度(达到90%).结论 Anginstatin K(1-3)可在原核融合蛋白表达载体中表达,且得到有活性的目的 蛋白.     

利用激光扫描共聚焦显微镜实时监测体外诱导分化的人骨髓间充质干细胞内游离Ca2+浓度动态变化

目的 利用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)实时监测由人骨髓间充质干细胞(hMSC)诱导分化的心肌样细胞内游离Ca2+浓度的动态变化.方法 体外分离培养hMSC,5-氮胞苷诱导向心肌样细胞分化.分别以体外分离培养的原代搏动的出生2 d SD大鼠乳鼠心肌细胞(CM)和同代次的hMSC为阳性对照和阴性对照.Fluo-3/AM荧光探针分别标记hMSC、由hMSC诱导的心肌样细胞及CM,利用LSCM实时监测单细胞内Ca2+动态变化的优势,观察加入心脏正性肌力药物后的细胞反应及细胞内Ca2+水平的动态变化.结果 静息状态下(给药前),搏动的CM荧光强度有变化,而hMSC及心肌样细胞Ca2+的荧光强度保持在稳定的波动水平内,两者差异无统计学意义.给药后,hMSC的Ca2+离子流没有改变,与静息状态下趋于一致;而心肌样细胞则表现出一个明显的Ca2+离子流,且下降后细胞内Ca2+水平明显高于加药前静息钙水平,其Ca2+离子流的表现趋势与搏动的CM基本一致.比较给药后hMSC与心肌样细胞的Ca2+荧光强度落差值,差异具有统计学意义(64.04 ±22.68比180.75 ±34.04,P<0.01).结论 hMSC经5-氮胞苷诱导后,在电学特性方面具有向CM分化的趋势,心肌样细胞与CM具有某些相同的电生理特性.     

高脂高胆固醇饮食小型猪CD36表达的变化

目的:用高脂高胆固醇饮食喂养贵州小香猪，探讨高脂高胆固醇饮食小香猪清道夫受体CD36表达的变化。方法:采用高脂高胆固醇饲料喂养贵州小香猪，每2个月末称体重并从禁食过夜的小香猪眶静脉窦采集血样，检测血脂浓度。血浆总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇的浓度均用酶法测定；采用逆转录-聚合酶链反应、蛋白质印迹和免疫组织化学分别检测CD36 mRNA和蛋白质的表达。 结果:喂养2个月后，实验组血浆总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇含量明显高于正常对照组；血浆甘油三酯水平从第4个月末开始升高, 在第7个月末明显增加；肝组织、胸主动脉和肾脏组织CD36表达上调，同时观察到高脂高胆固醇小型猪胸主动脉PPARγ的表达上调。 结论:提示高脂高胆固醇饲料可引起贵州小型猪的脂质代谢紊乱,并导致肝组织、胸主动脉和肾脏组织的CD36表达上调以及胸主动脉PPARγ的表达上调。     

谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白基因敲入小鼠三叉神经尾侧亚核内GFP阳性神经元的分布及与小白蛋白的共存

目的观察谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白（GAD67-GFP）基因敲入小鼠三叉神经尾侧亚核（Vc）浅层内，表达GFP的GABA能神经元的分布及其与小白蛋白（PV）的共存。方法分别运用原位分子杂交与免疫组织化学相结合；GFP与神经元标记物——神经元核蛋白（NeuN）或PV免疫荧光染色相结合的双重标记方法，在光学显微镜和激光共聚焦显微镜下进行观察。结果1．Vc浅层内90％以上的GFP阳性神经元同时表达GAD67 mRNA，而几乎所有表达GAD67 mRNA的阳性神经元都呈GFP阳性；2．GFP阳性神经元主要分布于Ｖc的Ⅰ－Ⅱ层内，细胞较小，尤其在Ⅱ层内可见大量密集分布的GFP阳性细胞和突起。GFP阳性神经元分别占Ⅰ、Ⅱ层内NeuN阳性神经元总数的19．4％和24．3％；3．GFP／PV双标神经元主要分布于Ｖc的Ⅰ－Ⅱ层，这些双标神经元大约占PV阳性神经元的62．4％，占GFP阳性神经元的12．8％。结论在Ｖc表达GFP的GABA能神经元主要密集分布于与外周伤害性信息传递关系密切的板层内，且大部分PV样阳性神经元属于GABA能神经元。     

视神经脊髓炎脑部异常的MRI表现及相关危险因素分析

目的 分析视神经脊髓炎(NMO)脑部异常的MRI表现及特征,探讨脑内病灶发生的相关危险因素.方法 对符合2006年Wingerchuk诊断标准的54例NMO患者行脑部MR检查,分析脑部MRI异常患者病灶的分布及信号特点.采用Logistic回归分析评估脑内病灶发生的相关危险因素.结果 54例NMO患者脑部MRI正常24例(44.4%),MRI表现异常30例(55.6%),以多发的皮层下和皮髓质交界区白质小病灶最常见(13/30,43.3%).典型的NMO脑内病灶位于胼胝体、脑室室管膜下、下丘脑及脑干等部位,表现为斑点、斑片及线状异常信号.16例脑部增强检查均未见异常强化病灶.Logistic回归分析显示病程以及合并自身免疫病或前驱感染史与脑部MRI异常有关联(OR=3.519,P＜0.05).结论 NMO患者脑部MRI出现异常信号较常见并有较特异的好发部位.合并系统性自身免疫病或有前驱感染史的NMO患者容易出现脑部MRI异常.

Abstract：

Objective To investigate the MRI features of the brain in patients with neuromyelitis optica (NMO), and to evaluate the correlation between the brain abnormalities and related risk factors.Methods Fifty-four patients with definite NMO according to 2006 Wingerchuk diagnosis criteria were enrolled in this study. MRI scanning of the brain was performed in these patients. Distribution and signalfeatures of all the lesions were analyzed. A Logistic regression analysis was used to evaluate the risk factors of brain abnormalities. Results Twenty-four NMO patients (44. 4%) showed unremarkable findings and thirty (55.6%) showed abnormalities on brain MRI. Multiple and non-specific small lesions in the subcortical white matter and grey-white matter junction were the most frequent abnormalities on brain MRI (13/30, 43. 3%). Typical lesion locations included corpus callosum, subependyma of ventricles,hypothalamus and brain stem. The lesions showed punctate, patchy and linear abnormal signals. Postcontrast MRI showed no abnormal enhancement in 16 cases. Logistic regression analysis showed that coexisting anto-immune disease or infection history had correlations with abnormalities of the brain on MRI (OR=3.519,P ＜0.05). Conclusions There was a high incidence of brain abnormalities in NMO.Subependymal white matter, corpus callosum, hypothalamus and brain stem were often involved in NMO.NMO patients with coexisting anto-immune disease and infection history had higher risk of brain abnormalities.     

MR灌注成像在鉴别胶质瘤复发与放射性脑损伤中的价值

目的 分析MR灌注成像在鉴别胶质瘤复发与放射性脑损伤中的作用.方法 选取15例脑胶质瘤术后、放疗后并出现新强化灶的患者.所有患者均经二次手术病理或随访(随访时间＞6个月)证实为胶质瘤复发或放射性脑损伤.15例患者均行常规MR平扫、增强扫描和MR脑灌注成像.灌注成像采用梯度回波-回波平面成像(GRE-EPI)序列,ROI放置在横断面T1WI异常强化区域和对侧相对正常的脑白质内,大小为20～40 mm2,每个病灶测量10～15次,取平均值,计算异常强化区与对侧正常区的参数比值,包括相对脑血容量(rCBV)、相对脑血流量(rCBF)及相对平均通过时间(rMTT),采用秩和检验比较胶质瘤复发和放射性脑损伤各灌注参数.并采用ROC曲线评价rCBV、rCBF及MTT鉴别诊断两者的灵敏度及特异度.结果 15例患者最终经手术和随访证实有9例胶质瘤复发,6例放射性脑损伤.胶质瘤复发rCBV、rCBF比值的M分别为2.87(范围0.70～4.91)、1.89(范围0.64～3.96),明显高于放射性脑损伤比值[rCBV 0.70(范围0.12～1.62)、rCBF 0.56(范围0.12～2.08)],差异有统计学意义(Z值分别为-2.55、-2.08,P值均＜0.05).rCBV和rCBF比值鉴别诊断为胶质瘤复发或放射性脑损伤的ROC曲线下面积为0.893和0.821.rCBV比值≤0.77时诊断放射性脑损伤灵敏度为100.0%,rCBV比值≥2.44时诊断胶质瘤复发特异度为100.0%.结论 MR灌注成像是鉴别胶质瘤复发和放射性脑损伤的有效方法,rCBV比值和rCBF比值在鉴别诊断中具有重要价值.

Abstract：

Objective To evaluate the feasibility of perfusion weighted imaging (PWI) in the differentiation of recurrent glioma and radiation-induced brain injuries. Methods Fifteen patients with previously resected and irradiated glioma, presenting newly developed abnormal enhancement, were included in the study. The final diagnosis was determined either histologically or clinicoradiologically. PWI was obtained with a gradient echo echo-planar-imaging (GRE-EPI) sequence. The normalized rCBV ratio[CBV(abnormal enhancement)/CBV(contralateral tissue)], rCBF ratio[CBF(abnormal enhancement)/CBF(contralateral tissue)]and rMTT ratio[(MTT abnormal enhancement)/MTT(contralateral tissue)]were calculated, respectively. The regions of interest (ROIs) consisting of 20-40 mm2 were placed in the abnormal enhanced areas on postcontrast T1-weighted images. Ten to fifteen ROIs measurements were performed in each lesion and the mean value was obtained. Mann-Whitney test was used to determine whether there was a difference in the rCBV/rCBF/MTT ratios between glioma recurrence and radiated injuries. Results Nine of the 15 patients were proved recurrent glioma,6 were proved radiation-induced brain injuries. The mean rCBV ratio[2.87(0.70-4.91)]in glioma recurrence was markedly higher than that[0.70(0.12-1.62)]in radiation injuries (Z=-2.55,P＜0.05). The mean rCBF ratio[1.89(0.64-3.96)]in glioma recurrence was markedly higher than that[0.56(0.12-2.08)]in radiation injuries (Z=-2.08,P＜0.05). The areas under rCBV and rCBF ROC curve were 0.893 and 0.821. If the rCBV ratio ≤0.77, the diagnosis sensitivity of radiation-induced brain injuries was 100.0%;If ≥2.44, the diagnosis specificity of recurrent glioma was 100.0%. Conclusion PWI was an effective technique in distinguishing glioma recurrence from radiation injuries and rCBV and rCBF ratios were of great value in the differentiation.     

伤椎固定结合硫酸钙椎体成形与单纯伤椎固定治疗胸腰椎爆裂骨折的对比研究

目的 对比伤椎固定结合硫酸钙椎体成形术与单纯伤椎固定治疗胸腰椎爆裂骨折的临床疗效. 方法 2005年1月- 2008年10月对61例胸腰椎爆裂骨折患者分别采用伤椎固定结合硫酸钙椎体成形(A组)与单纯伤椎固定(B组)进行治疗.A组32例,其中男22例,女10例;年龄21～ 65岁,平均36.8岁.术后随访13 ～27个月...     

PET-CT表皮生长因子受体显像的研究进展

对肿瘤患者来说表皮生长因子受体(EGFR)是一个很有吸引力的的治疗靶点,PET-CTEGFR显像可以反映EGFR的活性,可能成为检测EGFR更可靠的指标.近年来,用PET-CT EGFR显像筛选肿瘤靶向治疗药物已经成为PET-CT临床应用研究的热点和重点.     

肺隐球菌病CT表现与临床病理特征分析

目的:分析肺隐球菌病(PC)肺部CT表现及临床、病理特征,提高对该病的认识。方法:回顾分析9例经病理或细菌学证实的PC肺部CT表现,其中肺部有基础疾病者2例。结果:CT表现为孤立病变4例,单叶多发病变2例,双侧病变3例,病变多位于肺外围。CT有3种影像表现:①结节或肿块;②单发或多发斑片影;③斑片影与结节或肿块影混合。9例中出现空洞6例,伴肺段实变1例,伴少量胸水2例,纵隔淋巴结肿大1例。结论:PC肺部CT表现形态多样,病灶多发,具有一定的特征性。病灶形态与病程及免疫力有关,确诊尚依赖病原学及病理检查。     

胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝组织中PTEN表达与肝星状细胞凋亡的关系研究

目的 探讨胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝组织中磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)的动态表达与在体肝星状细胞(HSC)凋亡的关系.方法 健康雄性SD大鼠50只,随机分为模型组(n=40)及假手术组(n=10).模型组采用胆总管结扎法建立胆汁淤积性大鼠肝纤维化模型,并分别于结扎后1、2、3、4周(每个时间点取10只)麻醉后留取肝组织.假手术组大鼠亦于相应时间麻醉后留取肝组织.采用免疫组化法测定大鼠肝组织中PTEN蛋白的表达;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TUNEL)及α-SMA免疫组化双染法检测在体活化HSC的凋亡情况.结果 正常大鼠肝组织未见凋亡的HSC.随着肝纤维化程度加重,肝组织中PTEN蛋白的表达量逐渐减少(P<0.01),而活化HSC增多,凋亡HSC也增多.造模1、2、3、4周,大鼠肝组织的HSC凋亡指数(分别为4.57%±0.41%、4.02%±0.48%、3.45%±0.37%、2.88%±0.50%)逐渐减少(P<0.01).大鼠肝纤维化组织中PTEN的蛋白表达量与在体HSC的凋亡呈显著正相关(r=0.76,P＜0.01).结论 胆汁淤积性大鼠肝纤维化组织中PTEN的蛋白表达下调与在体活化HSC的凋亡减少相一致.