HPV58E6基因的克隆及体外表达

目的克隆并体外表达HPV58E6,为E6致癌作用和疫苗的研究奠定基础.方法通过PCR方法从HPV58全基因克隆中扩增出HPV58E6基因片段,利用基因重组技术,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3的T7启动子下游,体外转录成mRNA后,在源自网织红细胞的翻译缓冲液中表达生物素标记的HPV58E6蛋白,化学发光法检测,X光胶片曝光显影鉴定.结果酶切电泳证实质粒构建正确,SDS-PAGE电泳显示在相当于HPV58E6分子量约18.8kD的位置出现条带,X光胶片亦在相应位置出现印迹条带.结论成功表达了含有生物素标记的HPV58E6蛋白,为其致癌作用和治疗的研究奠定基础.     

光动力疗法在皮肤肿瘤治疗方面进展

光动力疗法(Photodynamic therapy,PDT)是指在光敏剂参与下,使肿瘤组织选择性摄取光敏剂,并储于其内,经光激发后,光敏剂被激活,产生光敏效应,使细胞或生物分子发生机能及形态变化、受伤或坏死而达到治疗目的一种肿瘤消融方法。1978年Dougherty等[1]对PDT进行了广泛的研究,并将P     

肝缺血/再灌注损伤与高胆红素血症关系的研究

目的：探讨大鼠肝缺血/再灌注（I/R）损伤致高胆红素血症发生的可能机制。方法：健康Wistar大鼠48只随机分为对照组、缺血30min组（I组）、缺血30min即刻再灌注组（I/R组）及I/R1、2、4h组共6组,每组8只,测定各组肝组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）的含量及髓过氧化物酶（MPO）、黄嘌呤氧化酶（XO）、丙二醛（MDA）的活性和血清总胆红素（TB）、结合胆红素（CB）、非结合胆红素（UCB）、总胆汁酸（TBA）的含量,并对各组各项指标进行比较。结果：肝组织TNF-α、IL-6含量及MPO、XO、MDA的活性和血清TB、CB、UCB、TBA的含量随着I/R时间的延长而有逐渐升高和增强的趋势。与对照组、I组相比,I/R及I/R1、2、4h组各指标均明显升高和增强,差异有统计学意义（P〈0.05）;I/R1、2、4h组亦明显高于I/R组（P〈0.05）。经相关性分析,TNF-α与IL-6、MPO、XO、MDA,MDA与TB、CB、UCB、TBA呈正相关。结论：肝I/R损伤可引起肝细胞XO活化,中性粒细胞浸润,释放的氧自由基及产生的TNF-α和IL-6可能参与了肝细胞损伤的发生机制,并导致高胆红素血症的发生。     

利心丸对小鼠缺氧耐受的影响及机理

目的研究利心丸对小鼠缺氧耐受的影响并初步探讨其机理。方法小鼠随机分生理盐水(每天20g/kg)组、心得安(每天0.16g/kg)组、利心丸高剂量(每天5g/kg)和低剂量(每天1g/kg)组,连续给药5天并于末次给药1h后测定小鼠缺氧耐受能力以及血清乙酰胆碱酯酶(T-ChE)和总抗氧化能力(T-AOC)。结果利心丸低剂量组耗氧率和心得安组均较生理盐水组显著降低(P<0.05或0.01);心得安组T-ChE活性较生理盐水组显著增高(P<0.01);心得安组和利心丸高剂量组T-AOC均较生理盐水组显著增高(P均<0.01)。结论利心丸低剂量能提高小鼠抗常压的缺氧耐受能力,可能与提高机体总抗氧化能力有关。     

单侧延长臂分子信标探针芯片在结核杆菌检测中的运用研究

目的分子信标探针在芯片表面的固定结合是限制其在芯片技术领域运用的难题。本研究拟寻找一种将分子信标探针固定在芯片表面的新方法,同时对其中重要影响因素进行优化探讨。方法本实验设计一种带单侧延长臂分子信标探针,固定在芯片表面进行杂交、扫描等后续实验。提高杂交效率部分优化包括：分子信标探针浓度;杂交温度、杂交时间;杂交液配方;4种分子对分子信标荧光信号比较。结果较理想区分阴阳性信号强度理想的探针浓度：Cy3-BDH分子信标探针浓度约10μmol/L,FAM-DABCLYE约15μmol/L。讨论单侧延长臂分子信标特异性高、敏感性高、技术难度低,对中、高密度芯片杂交可做到“点对点杂交”。     

猪胆溶纤汤对肝纤维化大鼠血生化指标的影响

目的:观察猪胆溶纤汤(ZRS)对肝纤维化的预防和治疗作用.方法:采用四氯化碳皮下注射法建立大鼠肝纤维化模型,将肝纤维化大鼠随机分为预防组和治疗组,分别于造模同时和造模后灌胃给予ZRS(2ml/100g,1次/日,连续7周),观察ZRS对各组大鼠血生化指标、肝指数、脾指数的影响.结果:ZRS预防组血清GPT、LDH水平与模型比较明显降低(P＜0.05,P＜0.01),ZRS预防组血清TP、A/G水平与模型比较显著升高(P＜0.01),ZRS预防组肝指数与模型组比较显著升高(P＜0.01)、脾指数显著降低(P＜0.01).ZRS治疗组血清GOT水平、脾指数与模型组比较明显降低(P＜0.05).结论:ZRS对四氯化碳所致大鼠肝纤维化具有预防和治疗作用.     

RNA干扰Neuropilins-2基因真核表达载体的构建及其鉴定

目的 构建Neuropilins-2(NRP2)基因RNA干扰(RNAi)的真核细胞表达载体.方法 以NRP2为靶基因,以pGenSil-l质粒为载体,设计构件重组体,根据GenBank数据库提供的NRP2基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计两条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pGenSil-l中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析.重组pGenSil-NRP2载体转染LOVO细胞48 h,收获细胞,采用Western blotting检测其NRP2蛋白表达.结果 经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体构建成功.重组体pGenSil-NRP2转染LOVO细胞48 h后NRP2蛋白表达显著降低.结论 利用RNAi技术可成功构建抑制NRP2表达的小干扰RNA重组体.     

糖基化白蛋白促内皮细胞小管样结构形成及其机制

目的 观察糖基化牛血清白蛋白(advanced glycated bovine serum albumin, AGE-BSA)对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)小管样结构(tubule like structure,TLS)形成的影响并探讨其可能机制.方法 实验设实验组、实验对照组和空白对照组.实验组设25、50、100 μg/ml 3个AGE-BSA浓度;同时设置相同浓度的牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)作为实验对照组;内皮细胞完全培养基作为空白对照组.各组设24、48、72 h 3个时相点,采用三维胶TLS形成实验和ELISA方法分别检测不同浓度AGE-BSA作用下HUVEC在Ⅰ型胶原中形成TLS的长度以及HUVEC自分泌血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的浓度.结果 在24～72 h内,浓度为25～100 μg/ml的AGE-BSA比相同浓度的BSA使HUVEC培养上清中VEGF的量和在胶原中分化形成TLS的长度均明显增加(P＜0.05).结论 AGE-BSA可通过刺激VEGF自分泌促进内皮细胞TLS形成,提示糖基化终末产物可能参与糖尿病视网膜血管生成.     

多功能医学实验平台的研制及在体外细胞温度效应观察中的初步应用

目的 研制一种多功能医学实验平台.方法 选用氧气、二氧化碳、湿度、温度传感器、控制器及效应器构建多功能医学实验平台并用于293细胞、PK15细胞受温度效应影响的试验.结果 该多功能医学实验平台可对温度、湿度、氧气浓度和二氧化碳浓度进行调节和控制,温度调控范围-20～ 60 ℃, 二氧化碳浓度调控范围0%～20%,氧气浓度调控范围0%～100%;湿度调控范围室温湿度至98%.采用该实验平台观察不同温度对293细胞、PK15细胞影响时发现,在10 ℃和20 ℃时,细胞出现胞体皱缩、突起变长等特征,细胞停止增殖.结论 该多功能医学实验平台可调节温度、湿度、氧气浓度和二氧化碳浓度,可用于细胞低温保存等移植相关实验.     

腔内激光+高位结扎+戴戒术治疗PDVI分析

目的：探讨腔内激光加高位结扎加股浅静脉瓣膜戴戒术治疗原发性下肢深静脉瓣膜功能不全的疗效和应用价值．方法：经静脉造影等检查后，诊断为原发性下肢深静脉瓣膜功能不全患者24例（29条下肢）予以腔内激光治疗、大隐静脉高位结扎加股浅静脉瓣膜戴戒术治疗．结果：本组所有病例的下肢曲张浅静脉手术后均闭塞、消失，彩色超声多普勒检查示大隐静脉主干均发生血栓性闭塞．11条肢体（37．9％）发生沿大隐静脉行程条索状硬结或硬块，2条肢体（6．9％）出现淤斑，1例（3．4％）患者发生皮肤浅表烧伤．全组病例术后随访12～36mo，症状完全消失及明显减轻的下肢23条（79．3％），患肢溃疡愈合11条（73．3％），病情好转，症状基本消失但有轻度肿胀2条（6，9％），术后出现深静脉血栓形成者1条（3．4％）．结论：腔内激光加高位结扎加股浅静脉瓣膜戴戒术治疗原发性下肢深静脉瓣膜功能不全的疗效满意，实用性强，具有安全、微创、瘢痕小和恢复快的优点．