靶向抑制存活素基因对大肠癌细胞SW80侵袭和转移的实验研究

目的 构建靶向存活素(survivin)基因的短发夹干扰RNA(shRNA)表达载体,导入人大肠癌细胞SW480中,研究靶向抑制survivin基因对SW480细胞侵袭和转移的影响.方法 根据siRNA设计原则,在survivin序列中选取设计含19个核苷酸(19 nt)的靶序列,间以9个核苷酸的茎环序列,两端分别加上对应的酶切位点,形成shRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo中,获得靶向抑制survivin基因的sihNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo-survivin;采用Lipofectamine 2000TM转染试剂将干扰质粒pRNAT-U6.1/Neo-survivin导入到大肠癌细胞SW480中;用Western blotting从蛋白水平检测干扰效果;分别采用肿瘤侵袭粘附实验和明胶酶谱分析法检测pRNAT-U6.1/Neo-survivin对SW480细胞的侵袭和转移潜能的影响.结果 Survivin基因的蛋白表达均得到显著抑制;沉默SW480的survivin基因可以显著抑制SW480细胞的侵袭和转移潜能,而且survivin基因表达被抑制后,SW480细胞分泌基质金属蛋白酶明显减少.结论 Survivin基因可能在SW480的侵袭和转移潜能中起重要作用,沉默SW480的survivin基因可以显著抑制其侵袭、转移和基质金属蛋白酶分泌,因而survivin影响SW480的侵袭和转移可能与调控基质金属蛋白酶分泌密切相关.     

肾去交感神经术调节PI3K/AKT/GSK-3β通路改善糖尿病性心肌病大鼠心功能及心肌重构

目的:探究肾去交感神经术(renal denervation,RDN)对糖尿病性心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)大鼠心功能及心肌重构的影响及相关机制.方法:28只雄性SD大鼠随机分为对照组(8只)、DCM组(10只)及RDN组(10只),利用高脂高热量饲料+链尿佐霉素(streptozo...     

p57 Kip2免疫组织化学染色鉴别葡萄胎和流产伴绒毛水肿的意义

目的 探讨p57kip2免疫组织化学染色鉴别葡萄胎和流产伴绒毛水肿的意义.方法 观察组织学伴有绒毛水肿的诊断病例58例(完全性葡萄胎18例、部分性葡萄胎19例、流产伴绒毛水肿11例、不明确流产伴绒毛水肿和葡萄胎分类的10例)以及正常胎盘3例的p57kip2免疫组织化学染色表达情况.结果 正常绒毛、部分性葡萄胎、流产伴绒毛水肿显示p57kip2阳性,核表达于细胞滋养细胞和绒毛问质细胞,而完全性葡萄胎在滋养细胞和绒毛问质细胞上显示阴性.根据组织学形态诊断分类与结合p57kip2诊断结果比较分析,在p57kip2染色的敏感度96%(46/48).结论 p57kip2免疫组织化学染色在鉴别葡萄胎和流产伴绒毛水肿是一个有价值的诊断方法,是葡萄胎敏感和特异的标记.     

颈动脉内膜中层厚度测定在糖尿病视网膜病变中的应用

目的探讨颈动脉内膜中层厚度（IMT）测定在糖尿病视网膜病变（DR）中的应用。方法将76例2型糖尿病患者的眼底病变分为无糖尿病视网膜病变、单纯型及增殖型3组，用彩色多普勒显像检测20例正常对照组和76例2型糖尿病患者IMT。结果糖尿病组IMT高于正常对照组（P〈0．01）。DR的严重程度与IMT呈显著正相关（r=-0．633，P〈0．05）。2型糖尿病患者IMT增厚组并发DR的发生率（46．94％）高于IMT正常组（24．27％），差别有统计学意义（P〈0．01）。结论2型糖尿病患者IMT的改变与糖尿病视网膜病变的发生有关，IMT测定有助于糖尿病视网膜病变的早期诊断。     

早期胃癌淋巴结转移与临床病理特征的关系

目的:探讨早期胃癌临床病理特征与淋巴结转移的关系.方法:回顾性分析我院2000-2004年手术切除经病理确诊的早期胃癌97例,分别观察肿瘤的发生部位、肿瘤大小、大体类型、组织学分类、浸润深度及脉管侵犯等病理学指标与淋巴结转移程度的相关性.结果:早期胃癌的淋巴结转移与肿瘤大小、大体类型、浸润深度及淋巴脉管侵犯密切相关.结论:早期胃癌的大体类型、肿瘤大小、浸润深度及淋巴脉管侵犯程度对正确判断和预测早期胃癌淋巴结转移具有重要意义.     

人脐带间充质干细胞体外分离、培养、扩增方法及生物学特性研究

目的 建立从足月脐带分离间充质干细胞和体外传代培养技术,并对其生物学特性进行研究.方法 采用双酶法分离脐带间充质干细胞,并通过传代进行纯化和扩增培养,绘制生长曲线;用流式细胞仪检测脐带表面抗原及细胞周期;采用软琼脂克隆实验以观察脐带致瘤性.结果 成功建立了脐带间充质干细胞分离及培养扩增的方法;流式细胞仪检测结果显示,贴壁细胞均表达CD105、CD44、CD13和CD29,不表达造血细胞表型CD34、CD45和内皮细胞表型CD31,不表达CD106、CD166和HLA-DR;细胞倍增时间为30h,细胞周期分析表明,G0～G1期和S G2 M期所占比例分别为78.84%和11.16%,脐带间充质干细胞在软琼脂中无克隆形成.结论 双酶法是一种较好的分离和培养方法间充质干细胞的方法,培养的细胞具有间充质干细胞的基本特性,无致瘤性,为建立间充质干细胞库和临床应用提供了理论依据.     

let-7b通过靶向调控SALL4影响肝母细胞瘤细胞增殖能力的机制研究

目的初步研究let-7b和SALL4在肝母细胞瘤(hepatoblastoma,HB)细胞恶性行为中的作用及二者间的相互作用机制。方法采用qRT-PCR检测let-7b在正常肝细胞(HL-7702)与HB细胞系、HB组织及癌旁组织中的表达水平,采用免疫组化法检测SALL4在HB组织及癌旁组织中的表达水平,并分析HB组织中let-7b与SALL4表达水平的相关性。通过MTT、细胞周期和凋亡等实验方法上调或抑制HB细胞中let-7b的表达水平,观察let-7b对HB细胞生物学功能的影响;通过生物信息学预测软件、双荧光素酶报告系统、qRT-PCR和western blot等实验,从体外水平验证let-7b与SALL4的靶向关系。采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同let-7b与SALL4表达水平的肝母细胞瘤患者总体生存率的差异。结果与癌旁组织相比,let-7b在HB组织中表达量显著降低,而SALL4表达量显著升高;let-7b在肝母细胞瘤组织中的表达水平与PRETEXT分期存在相关性(P=0.002),且HB组织标本中let-7b与SALL4的表达水平存在负相关性(r=-0.716,P<0.001)。let-7b低表达组HB患者的总体生存率显著低于let-7b高表达组(P=0.017)。SALL4阳性组HB患者的总体生存率显著低于SALL4阴性和弱阳性组(P=0.034)。MTT、细胞周期和凋亡实验结果显示,let-7b可抑制肝癌Hep G2细胞增殖,促进细胞的凋亡。而抑制内源性的let-7b可促进Hep G2细胞增殖,抑制细胞的凋亡。生物信息学软件预测及构建双荧光报告载体荧光检测等实验结果显示,let-7b与SALL4存在一定的靶向关系。结论let-7b和SALL4可作为肝母细胞瘤不良预后的潜在标记物;let-7b作为抑癌基因可以靶向调控SALL4的表达,抑制HB细胞的增殖。     

中药联合胸膜固定术治疗恶性胸腔积液30例

我院对确诊的60例晚期肺癌患者采用随机分组研究,采用胸膜固定术结合中药内服治疗恶性胸腔积液30例,疗效较好,现报告如下.     

双切口双钢板治疗SchatzkerⅤ、Ⅵ型胫骨平台骨折

胫骨平台骨折是临床常见的一种关节内骨折.SchatzkerⅤ、Ⅵ型胫骨平台骨折多为高能量损伤,关节面破坏严重,骨折粉碎严重,胫前软组织多有不同程度损伤.